Платиза личный: Получение займа | Platiza.ru

Содержание

Получение займа | Platiza.ru

В любое время вы можете погасить заём досрочно, частично, полностью или воспользоваться продлением займа. Своевременное погашение займа положительно отразится на Вашей кредитной истории и увеличит кредитный рейтинг.

Досрочное погашение займа

Досрочное погашение позволяет вам сэкономить на возврате. К выданной вам сумме денег будут добавлены проценты только за фактическое количество дней пользования займом.

Частичное погашение займа

Дополнительный способ экономии на возврате займа — это регулярное погашение плановых или частичных платежей. При частичном погашении суммы основного долга проценты будут начисляться на оставшуюся сумму.

Продление займа

Не успеваете погасить заём вовремя? Воспользуйтесь услугой продления займа. Для этого в личном кабинете выберите срок продления, оплатив при этом лишь проценты, начисленные сверх суммы займа.

Это позволит вам сохранить кредитный рейтинг и избежать ухудшения кредитной истории.

Способы погашения

Погашение с банковской карты

Вы можете погасить заём в личном кабинете как уже с зарегистрированной банковской карты, так и с другой карты VISA, Mastercard или Мир. Для этого:

  1. Зайдите в личный кабинет
  2. В разделе Текущий заём нажмите кнопку «Погасить».
  3. Выберите карту, с которой хотите погасить заём.

Погашение с VISA QIWI Wallet (КИВИ Кошелёк)

  1. В личном кабинете выберите способ погашения «Электронные деньги» — «VISA QIWI Wallet»
  2. Войдите в Ваш личный кабинет на сайте VISA QIWI Wallet. В личном кабинете своего QIWI кошелька в разделе «Счета» нажмите «Оплатить» выставленный счёт от Platiza.ru.
  3. Информация о закрытии займа появится в личном кабинете Platiza. ru. По результату вам придет SMS-оповещение.

Погашение с Яндекс.Деньги

  1. В личном кабинете на сайте Platiza.ru выберите способ погашения «Электронные деньги» — «Яндекс.Деньги»
  2. Вы будете переведены на сайт Яндекс.Деньги, где необходимо авторизоваться в личном кабинете Яндекс-кошелька
  3. Подтвердите сумму оплаты
  4. Ожидайте подтверждения оплаты. Для обратного перехода на Platiza.ru нажмите Вернуться в магазин

Погашение через QIWI терминал

  1. Чтобы погасить заём через QIWI терминал, вам необходимо знать: номер договора и сумму к оплате. Эту информацию вы можете узнать в личном кабинете на сайте Platiza.ru.
  2. Найдите на карте QIWI терминалов наиболее удобный пункт оплаты.
  3. В платёжном терминале выберите пункт «Оплата услуг».
  4. Через поиск или «Услуги банков — Погашение займов» найдите иконку Platiza.
  5. Введите номер договора и внесите сумму для оплаты.
  6. Если вам необходима сдача, то терминал предложит вам зачислить остаток на Visa QIWI Wallet (Киви кошелёк) или на ваш мобильный телефон.

Погашение в салоне сети Связной

  1. Чтобы погасить заём в салоне сети Связной, вам необходимо знать: номер договора и сумму к оплате. Эту информацию вы можете узнать в личном кабинете.
  2. Обратитесь в ближайший к вам салон связи Связной.
  3. Сообщите менеджеру салона, что хотите погасить заём в компании «Платиза.ру», номер договора и сумму к оплате.
  4. Сохраняйте чек до момента зачисления денежных средств.
  5. Для осуществления платежа возьмите с собой паспорт.

Погашайте задолженность по кредиту и пополняйте счет в любом из салонов «Связной» по всей России без комиссии. Денежные средства поступят на ваш счет на следующий рабочий день после совершения платежа.

Не подходит ни один способ погашения

Если ни один из предложенных способов погашения не удобен для вас, обратитесь в нашу службу поддержки.

cabinet-platiza.ru — вся информация о сайте и компании, 88002003839

Dorax Investment Moscow Company Limited — аккредитивы, документарный аккредитив, товарный аккредитив, резервный аккредитив, банковская гарантия, гарантия возврата авансового платежа, депозитный сертификат, банковская сохранная расписка, подтверждение фондов, подтверждение активов, подтверждение ресурса, гарантия исполнения, подтверждающее письмо банка, documentary letter of credit, lc, dlc, stand-by letter of credit, sblc, letter of guarantee, bg, lg, advance payment guarantee, apg, certificate of deposit, cd, safekeeping receipt, skr, proof of funds, pof, proof of assets, poa, proof of product, pop, performance bond, pb, bank comfort letter, blc, факторинг, финансирование, торговое финансирование импортёров, структурированное финансирование торговых операций, торговое инвестиционное финансирование, кредитование, инвестиции, swift, аккредитивы, аккредитив документарный, аккредитив товарный, документарный аккредитив, товарный аккредитив, резервный аккредитив, банковская гарантия, гарантия возврата авансового платежа, депозитный сертификат, банковская сохранная расписка, подтверждение фондов, подтверждение активов, подтверждение ресурса, гарантия исполнения, подтверждающее письмо банка, переводной аккредитив, documentary letter of credit, резервный, резервный аккредитив, stand-by letter of credit, sblc, stand-by, guarantee, безотзывная, гарантии, банковские гарантии, гарантия банковская, банковская гарантия, гарантия возврата авансового платежа, депозитный сертификат, банковская сохранная расписка, подтверждение, letter of guarantee, bank guarantee, депозитный сертификат, certificate of deposit, банковская сохранная расписка, safekeeping receipt, подтверждение, подтверждение фондов, proof of funds, подтверждение активов, proof of assets, подтверждение ресурса, proof of product, гарантия исполнения, performance bond, подтверждающее письмо банка, bank comfort letter, финансирование, торговое финансирование импортёров, факторинг, структурированное финансирование торговых операций, торговое инвестиционное финансирование, кредитование, инвестиции, банковский, bank, торговое, банка, letter, факторинг, credit, расписка, финансовых, платежа, активов, выставления swift сообщений, swift сообщение, swift сообщения, инвестиции, swift, кредитование, торговое инвестиционное финансирование, структурированное финансирование, торговое финансирование импортёров, blc, факторинг, bank comfort letter, pb, performance bond, pop, proof of product, poa, pof, proof of assets, proof of funds, skr, cd, safekeeping receipt, certificate of deposit, apg, advance payment guarantee, lg, bg, letter of guarantee, sblc, stand-by letter of credit, dlc, lc, documentary letter of credit, подтверждающее письмо банка, гарантия исполнения, подтверждение ресурса, подтверждение активов, подтверждение фондов, банковская сохранная расписка, депозитный сертификат, гарантия возврата авансового платежа, банковская гарантия, резервный аккредитив, товарный аккредитив, документарный аккредитив, аккредитивы, mt110, sblc аккредитив, sblc что это, swift сообщение, гарантированные и резервные аккредитивы, sblc форма оплаты, sbcl резервный аккредитив,гарантия cis против бг, standby letter of credit, оплата dlc, swift mt202 что это, расчет аккредитив mt700, swift mt104 это, mt110 свифт это, sblc что это, аккредитив с покрытием это, swift mt935 пример, текст пролонгации банковской гарантии по свифту, предоплата против банковской гарантии, свифт подтверждение, mt710 свифт, что такое аккредитив lc, типы сообщений swift, swift mt205, аккредитив stand-by, аккредитив sblc, swift mt199 что это, счет mt202 свифт, подтверждение активов через swift mt799 mt760, поля резервного аккредитива, swift типы сообщений, mt671, формат сообщения mt300, банковская гарантия mt730, sblc что это такое, pop подтверждение ресурса, гарантия аккредитив, формат swift mt, свифт мт 110, аккредитив с авансовым платежом, пример mt767, депозитный сертификат к pof фонды, swift mt730 что это, аккредитивы и банковские гарантии, mt700 открытие документарного аккредитива, аккредетив mt700, применеие ucp 600 при выпуске резервных аккредитивов, что такое sblc, mt202cov пример, swift mt671, mt300 swift, аккредитив против отгрузочных документов, выставление резервного аккредитива, mt298 формат свифт сообщение 901, аккредитив через свифт, mt700 что это, swift mt600, urdg758, stand by letter of credit, proof of products, mt700, проектное финансирование из китая, swift mt103, swift mt700, sblc банковский инструмент, аккредитив swift, финансовый инструмент sblc это, swift mt020, swift mt300 формат, инструкция swift mt500, документарный акцептный аккредитив, формат swift, свифт сообщение авизование аккредитива, свифт mt110 кэш бэк, гарантия stand by, что такое банковский mt110 swift, аккредитив lc, свифт сообщение это, как читать свифт сообщение, swift mt110 что это, аккредитив гарантия, сообщение swift 199, proof of funds это, гарантии urdg 758, sblc это, свифт mt542, свифт mt110, swift сообщение акцепт, чем отличается сообщение mt542 свифт, bank dlc, pop подтверждение товара, подтверждение ресурса образец, sblc paper documents blank db, резервный аккредитив это, что такое mt742 рамбурсное требование, swift mt540, swift mt110 что это, документарный аккредитив mt700, swift mt524, финансовых, выставления swift сообщений, stand-by sblc аккредитив, guarantee, банковский, переводной аккредитив, credit, подтверждение, лизинг финансовых инструментов, безотзывная, банка, аккредитив, банковский аккредитив, международное торговое финансирование, торговое финансирование импорта, торговое финансирование механизм, финансирование торговых сделок, формы аккредитивов, торговое финансирование факторинг, аккредитивы бывают, гарантия выполнения обязательств, торговое финансирование без залога, беззалоговое торговое финансирование, без залоговое торговое финансирование, торговое финансирование импортеров, резервный аккредитив stand-by, факторинг операция без залоговый, револьверный автоматически возобновляемый аккредитив, подтверждение фондов активов ресурса, схема операции с аккредитивом, преимущества аккредитивных схем, аккредитив letter of credit, аккредитив c пост финансированием отсрочкой оплаты, аккредитивы и расчёты аккредитивами, схема расчётов с помощью документарного аккредитива, аккредитивы letter of credit lc dlc акредитивы, гарантия предоплаты, переводной аккредитив, депонированный аккредитив, депозитная расписка, беспроцентное финансирование, аренда финансовых инструментов, отзывной аккредитив, инвестиционное финансирование, без залоговое финансирование импортёров, bank guarantee, stand-by letter of credit, структурированное финансирование, денежный аккредитив, безотзывный аккредитив, непокрытый аккредитив, гарантированный аккредитив, автоматизация гарантий, револьверный аккредитив, сохранная расписка, аккредитив с постфинансированием, безотзывный документарный аккредитив, акцептный аккредитив, аккредитив sblc резервный, sblc stand-by, аккредитив стенд бай резервный аккредитив stand-by, выставление аккредитива, аккредитив банка, финансовые инструменты, гарантии и аккредитивы, беззалоговое финансирование импортеров, аккредитив стенд бай, автоматически возобновляемый аккредитив, делимый аккредитив, stand-by аккредитив, аккредитив lc dlc, выставленный аккредитив, аккредитив с красной строкой, факторинг импорта, аккредитив с покрытием, аккредитив с отсроченным платежом, аккредитив резервный, гарантия letter of guarantee, торговое финансирование, гарантии bg, аккредитивы letter of credit lc dlc акредитивы, финансирование импортёров, stand-by letter of credit, аккредитив стенд бай резервный аккредитив stand-by, stand-by аккредитив, mt101, mt102, mt102stp, mt103, mt103remit, mt103stp, mt104, mt105, mt107, mt110, mt111, mt112, mt190, mt191, mt192, mt195, mt196, mt198, mt199, mt200, mt201, mt202, mt202cov, mt203, mt204, mt205, mt205cov, mt207, mt210, mt256, mt290, mt291, mt292, mt295, mt296, mt298, mt299, mt300, mt303, mt304, mt305, mt306, mt307, mt320, mt321, mt330, mt340, mt341, mt350, mt360, mt361, mt362, mt364, mt365, mt370, mt380, mt381, mt390, mt391, mt392, mt395, mt396, mt398, mt399, mt400, mt410, mt412, mt416, mt420, mt422, mt430, mt450, mt455, mt456, mt490, mt491, mt492, mt495, mt496, mt498, mt499, mt500, mt501, mt502, mt503, mt504, mt505, mt506, mt507, mt508, mt509, mt510, mt513, mt514, mt515, mt516, mt517, mt518, mt519, mt524, mt526, mt527, mt530, mt535, mt536, mt537, mt538, mt540, mt541, mt542, mt543, mt544, mt545, mt546, mt547, mt548, mt549, mt558, mt559, mt564, mt565, mt566, mt567, mt568, mt569, mt574 irslst, irs 1441 nra, mt 574 w8beno, irs 1441 nra, mt575, mt576, mt577, mt578, mt579, mt581, mt586, mt590, mt591, mt592, mt595, mt596, mt598, mt599, mt600, mt601, mt604, mt605, mt606, mt607, mt608, mt609, mt620, mt643, mt644, mt646, mt649, mt670, mt671, mt690, mt691, mt692, mt695, mt696, mt698, mt699, mt700, Открытие аккредитива, mt701, mt705, Предварительное авизование аккредитива, mt707, Изменение условий аккредитива, mt710, mt711, mt720, Перевод аккредитива, mt721, mt730, mt732, mt734, mt740, mt742, Рамбурсное, mt747, mt750, mt752, mt754, Уведомление о платеже акцепте негоциации, mt756, Извещение о рамбурсе платеже, mt760, Гарантия резервный аккредитив, mt767, Изменение условий, mt768, mt769, mt790, mt791, mt792, mt795, mt796, mt798, mt799, mt800, mt801, mt802, mt824, mt890, mt891, mt892, mt895, mt896, mt898, mt899, mt900, mt910, mt920, mt935, mt940, mt941, mt942, mt950, mt970, mt971, mt972, mt973, mt985, mt986, mt990, mt991, mt992, mt995, mt996, mt998, mt999, mt020, mt022, mt024, mt026, mt028, mt031, mt032, mt035, mt037, mt041, mt044, mt045, mt046, mt048, mt049, mt070, mt073, mt074, mt090, mt092, mt500, mt501, mt502, mt503, mt504, mt505, mt506, mt507, mt508, mt509, mt510, mt513, mt514, mt515, mt516, mt517, mt518, mt519, mt524, mt526, mt527, mt530, mt535, mt536, mt537, mt538, mt540, mt541, mt542, mt543, mt544, mt545, mt546, mt547, mt548, mt549, mt558, mt564, mt565, mt566, mt567, mt568, mt569, mt574 irslst irs 1441 nra, mt 574 irs 1441 nra, mt575, mt576, mt577, mt578, mt579, mt581, mt586, mt590, mt591, mt592, mt595, mt596, mt598, mt599, mt600, mt601, mt604, mt605, mt606, Консультации по дебету, mt607, Консультации по кредиту, mt608, mt609, mt620, Подтверждение фиксированного займа, mt643, mt644, mt646, mt649, mt670, mt690, mt691, mt692, mt695, mt696, mt698, mt699, mt701, Открытие аккредитива, mt705, Предварительное авизование аккредитива, mt707, Изменение условий аккредитива, mt710, mt711, Авизование аккредитива, mt720, mt721, Перевод документарного аккредитива, mt730, mt732, mt734, mt740, mt742, Рамбурсное требование, mt747, mt750, mt752, mt754, mt756, mt767, mt768, mt769, mt790, mt791, mt792, mt795, mt796, mt798, mt799, mt800, mt801, mt802, mt824, mt890, mt891, mt892, mt895, mt896, mt898, mt899, mt900, mt910, mt920, mt935, mt940, mt941, mt942, mt950, mt970, mt971, mt972, mt973, mt985, mt986, mt990, mt991, mt992, mt995, mt996, mt998, mt999, подтверждение перевода свифт, sblc что это, sblc, сообщения swift, аккредитив стенд-бай это, резервный аккредитив, резервный аккредитив это, proof of product, что такое sblc, mt202 swift, swift mt200, sblc аккредитив термин, документ с подтверждением, наличия финансовых средств, гарантия не подтверждается swift, wift mt102, letter of guarantee что это, swift mt730 что это, mt300 swift, гарантии для лизинга аккредетив, sblc что это такое, swift mt700, 671 формат swift, swift mt101 пример, аккредитив свифт mt700, mt 700 открытие документарного аккредитива, аккредетив mt700, применеие ucp 600 при выпуске резервных аккредитивов, разница между резервным и документарным аккредитивам, dorax-investment. ru/sblc, где используется формат свифта swift mt110, пример информации в отчете по формату swift mt950, аккредитив dlc mt700, что такое swift fin mt671, аккредитив stand-by это, акредитив mt700 что это, mt300 swift, как застраховать финансовый договор sblc, mt202cov пример, swift mt671, stand-by letter of credit, mt700 что это, swift mt600, подтверждение перевода свифт, sblc аккредитив, sblc, sblc что это, свифт мт 110 что это, что означает сокращение sblc, letter of credit что такое, swift mt204, stand-by letter of credit, разница между резервным и документарным аккредитивам, акредитив sblc что это, применеие ucp600 при выпуске резервных аккредитивов, sblc что это такое, sblc mt103, sblc, standby letter of credit, sblc аккредитив, что такое sblc, что такое sblc банка, lc sblc что это, masspayment mt102, mt110 swift, mt300 swift, mt103 lc, mt199 что это, mt298 swift, mt299 что это, pop product это, pop подтверждение ресурса, proof of funds, proof of funds что это такое, stand by lc что это, stand by letter of credit что это такое, stand-by letter of credit, swift 199, swift 700 это, swift mt290, swift mt700 что это, swift mt758, swift mt758 что это, swift mt103, swift mt103-202, swift mt202 для чего он используется, swift сообщения для аккредитивов, swift формат 500, urdg 758 это, аккредитив mt700, аккредитив mt700, банковский mt412, вакансии аккредитивы, имитатор свифт, описание формата свифт mt370, оплата мт700, подтверждение swift 758, swift mt202, свифт мт202cov что это, свифт мт300/102, свифт мт542 что это, swift 101, sblc, mt 700, pof что это, sblc что это, stand-by letter of credit, swift mt670, swift запрос выписки, аккредитив подтвержденный, мт 199 это, что такое аккредитив мт 700, bg что это, dlc mt 700 это, lc bank, lc with bank from, mt 192, mt 205 swift, mt 300 swift, mt 730 банковскии формат, mt103 что это, mt199,mt199 что это значит, mt299 что это,mt700 swift, mt720 аккредитив,oplata sblc, prof of funds,proof of funds образец, proof of product pop,proof of product образец, sblc dlc, sblc аккредитив что это, sblc это, stand-by lc что это, swift 102 это, swift 199, swift mt 103 one way, swift mt 110 что это такое, swift mt 543, swift mt094, swift mt700, swift type 199, swift аккредитив, MT 101, MT 102, MT 102 STP, MT 103, MT 103 REMIT, MT 103 STP, MT 104, MT 105, MT 107, MT 110, MT 111, MT 112, MT 190, MT 191, MT 192, MT 195, MT 196, MT 198, MT 199, MT 200, MT 201, MT 202, MT 202 COV, MT 203, MT 204, MT 205, MT 205 COV, MT 207, MT 210, MT 256, MT 290, MT 291, MT 292, MT 295, MT 296, MT 298, MT 299, MT 300, MT 303, MT 304, MT 305, MT 306, MT 307, MT 320, MT 321, MT 330, MT 340, MT 341, MT 350, MT 360, MT 361, MT 362, MT 364, MT 365, MT 370, MT 380, MT 381, MT 390, MT 391, MT 392, MT 395, MT 396, MT 398, MT 399, MT 400, MT 410, MT 412, MT 416, MT 420, MT 422, MT 430, MT 450, MT 455, MT 456, MT 490, MT 491, MT 492, MT 495, MT 496, MT 498, MT 499, MT 500, MT 501, MT 502, MT 503, MT 504, MT 505, MT 506, MT 507, MT 508, MT 509, MT 510, MT 513, MT 514, MT 515, MT 516, MT 517, MT 518, MT 519, MT 524, MT 526, MT 527, MT 530, MT 535, MT 536, MT 537, MT 538, MT 540, MT 541, MT 542, MT 543, MT 544, MT 545, MT 546, MT 547, MT 548, MT 549, MT 558, MT 559, MT 564, MT 565, MT 566, MT 567, MT 568, MT 569, MT 574 IRSLST, MT 574 W8BENO, MT 575, MT 576, MT 577, MT 578, MT 579, MT 581, MT 586, MT 590, MT 591, MT 592, MT 595, MT 596, MT 598, MT 599, MT 600, MT 601, MT 604, MT 605, MT 606, MT 607, MT 608, MT 609, MT 620, MT 643, MT 644, MT 646, MT 649, MT 670, MT 671, MT 690, MT 691, MT 692, MT 695, MT 696, MT 698, MT 699, MT 700, MT 701, MT 705, MT 707, MT 710, MT 711, MT 720, MT 721, MT 730, MT 732, MT 734, MT 740, MT 742, MT 747, MT 750, MT 752, MT 754, MT 756, MT 760, MT 767, MT 768, MT 769, MT 790, MT 791, MT 792, MT 795, MT 796, MT 798, MT 799, MT 800, MT 801, MT 802, MT 824, MT 890, MT 891, MT 892, MT 895, MT 896, MT 898, MT 899, MT 900, MT 910, MT 920, MT 935, MT 940, MT 941, MT 942, MT 950, MT 970, MT 971, MT 972, MT 973, MT 985, MT 986, MT 990, MT 991, MT 992, MT 995, MT 996, MT 998, MT 999, MT 020, MT 022, MT 024, MT 026, MT 028, MT 031, MT 032, MT 035, MT 037, MT 041, MT 044, MT 045, MT 046, MT 048, MT 049, MT 070, MT 073, MT 074, MT 090, MT 092, sblc, swift mt 700, sblc что это, swift 101, типы сообщений swift, мт 199 свифт что это, mt 542 свифт это, swift mt 700, mt 586 формат свифт, swift mt 110 информация, мт 700 аккредитив, номера swift 700, подтверждение активов rva, doublestar, aufine, odyking, techking, keter, автобусы, микроавтобусы, краны, бульдозеры, экскаваторы, снегоуборочные машины, погрузчики ковшовые и вилочные, бетононасосы, асфальтоукладчики, катки, техника для коммунального хозяйства и дорожная техника, самосвалы, тягачи, бензовозы, снегоуборочная техника, swift mt 700, sblc, mt 542 свифт это, sblc что это такое, sblc что это, sblc аккредитив, мт 700 аккредитив, типы сообщений swift, swift 101, мт 199 свифт что это, proof of assets, stand by letter of credit, свифт 700 что это такое, bg что это, proof of product образец, stand-by letter of credit, swift mt202 что это, swift сообщение, аккредитив sblc, аккредитив мт 700, виды swift сообщений, свифт 199, свифт мт 700, что такое sblc, swift mt 700, sblc, sblc что это, sblc что это такое, mt 542 свифт это, sblc аккредитив, мт 700 аккредитив, sblc ucp 600, swift 101, типы сообщений swift, mt700 что это, stand by letter of credit, мт 199 свифт что это, мт 700 аккредитив что это, свифт 700 что это такое, что такое sblc, divisible letter of credit, sblc, swift mt 700, sblc что это, sblc аккредитив, sblc что это такое, mt 542 свифт это, виды swift сообщений, swift 101, мт 700 аккредитив, mt700 что это, sblc ucp 600, stand by letter of credit, мт 199 свифт что это, свифт 700 что это такое, типы сообщений swift, mt 110 swift, аккредитив sblc, что такое sblc, proof of producte, standby letter of credit, мт 110 свифт что это, мт 300 свифт, мт 700 аккредитив что это, отмена свифта, резервный аккредитив, резервный аккредитив sblc, divisible letter of credit, mt 700, proof of assets, proof of product, sblc это, swift 199, swift mt202 что это, аккредитив мт 700, резервный аккредитив это, свифт 110 что это, свифт 199, условия оплаты lg что это, bg что это, dlc mt700 что это, dlc при оплате, mt 730 swift, swift 199, 320 форма по swift, 71a swift, mt103 mt102, proof of product образец, sblc, sblc аккредитив, swift mt 094, swift mt300 формат, дисконты к аккредитивам по лимитам под остатки, мт 102 свифт, свифт 199, свифт 768, свифт мт-110, свифт формат 199, типы сообщений мт3xx swift, Sblc, swift mt 700, sblc аккредитив, sblc что это, sblc что это такое, mt 542 свифт это, виды swift сообщений, swift 101, мт 199 свифт что это, мт 700 аккредитив, свифт 700 что это такое, типы сообщений swift, что такое sblc, mt700 что это, sblc ucp 600, stand by letter of credit, mt 110 swift, mt199, swift mt542, аккредитив sblc, мт 700 аккредитив что это, резервный аккредитив, торговое финансирование это, mt 700, proof of producte, standby letter of credit, аккредитив мт 700, классификация swift сообщений, мт 110 свифт что это, мт 300 свифт, отмена свифта, резервный аккредитив sblc, свифт 110 что это, свифт 199, divisible letter of credit, mt196 swift, mt202 swift, proof of assets, proof of product, sblc это, swift 199, swift mt199 что это, swift mt202 что это, виды свифтов, резервный аккредитив это, mt 542 свифт это, виды swift сообщений, mt700 что это, свифт 700 что это такое, типы сообщений swift, swift 101, мт 199 свифт что это, мт 700 аккредитив, что такое sblc, sblc ucp 600, stand by letter of credit, мт 110 свифт что это, mt 110 swift, mt199, swift mt542, аккредитив sblc, мт 700 аккредитив что это, резервный аккредитив, резервный аккредитив sblc, торговое финансирование это, mt 700, proof of producte, standby letter of credit, аккредитив мт 700, виды свифтов, классификация swift сообщений, мт 300 свифт, отмена свифта, свифт 110 что это, свифт 199, форматы свифт сообщений, divisible letter of credit, dlc условия оплаты, mt196 swift, mt202 swift, proof of assets, proof of product, sblc это, swift 199, swift mt199 что это, sblc, sblc что это, sblc аккредитив, swift mt 700, mt700 что это, sblc что это такое, mt 542 свифт это, виды swift сообщений, свифт 700 что это такое, что такое sblc, мт 199 свифт что это, мт 700 аккредитив, типы сообщений swift, гарантия банковская это, получить гарантию от банка, получить гарантию банковскую от банка это, получить банковскую гарантию от банка это, торговое финансирование это, получить торговое финансирование, требуется торговое финансирование, торговое финансирование импортёров это, получить торговое финансирование импортёров, требуется торговое финансирование импортёров, торговое финансирование торговых операций это, получить торговое финансирование торговых операций, требуется торговое финансирование торговых операций, международные финансовые инструменты это, получить международные финансовые инструменты, требуется международные финансовые инструменты, торговое и экспортное финансирование это, получить торговое и экспортное финансирование, требуется торговое и экспортное финансирование, финансирование импорта это, получить финансирование импорта, требуется финансирование импорта, Sblc, sblc что это, mt700 что это, sblc аккредитив, swift mt 700, sblc что это такое, mt 542 свифт это, виды swift сообщений, sbls, swift mt542, свифт 700 что это такое, что такое sblc, мт 199 свифт что это, мт 700 аккредитив, типы сообщений swift, swift 101, sblc ucp 600, stand by letter of credit, мт 110 свифт что это, мт 700 аккредитив что это, отмена свифта, mt199, sblc это, swift mt 110 что это, аккредитив sblc, mt 110 swift, standby letter of credit, swift mt202 что это, аккредитив мт 700, резервный аккредитив, резервный аккредитив sblc, свифт 110 что это, свифт мт 700, типы swift сообщений, торговое финансирование это, divisible letter of credit, mt 700, proof of producte, swift 199, swift mt199 что это, виды свифтов, классификация swift сообщений, мт 300 описание формата, мт 300 свифт, sblc, sblc что это, mt700 что это, sblc аккредитив, swift mt 700, sblc что это такое, swift mt542, мт 300 описание формата, mt 542 свифт это, виды swift сообщений, sbls, мт 199 свифт что это, свифт 700 что это такое, мт 700 аккредитив, что такое sblc, stand by letter of credit, типы сообщений swift, swift 101, аккредитив с авансовым платежом, мт 700 аккредитив что это, отмена свифта, свифт 199 что это такое, mt199, sblc ucp 600, standby letter of credit, swift сообщение, мт 110 свифт что это, sblc это, swift mt 110 что это, аккредитив sblc, свифт мт 700, mt 110 swift, swift 199, swift mt202 что это, аккредитив мт 700, резервный аккредитив, резервный аккредитив sblc, свифт 110 что это, типы swift сообщений, торговое финансирование это, stand-by letter of credit, divisible letter of credit, dlc сделка через банк swift mt 700, Sblc, sblc что это, sblc что это такое, что такое оплата rdlc/dlc, sblc аккредитив, pop подтверждение ресурса, dlc аккредитив, dlc аккредитив что это, dlc что за метод оплаты, proof of assets что это, proof of funds, sbls, stand by letter of credit что это такое, standby letter of credit, аккредитив sblc что это, виды letter of credit, раскрытие аккредитива, bs/sblc, dlc payment что это, irdlc что это такое, l / c в торговых документах, l/c, sblc, l/s аккредитив, letter of credit sblc, lg и bg инструменты, pof образец, price bg/sblc, proof of funds что это, банковская гарантия, sblc получить, sblc форма оплаты, stand by аккредитив, аккредитив dlc mt700, аккредитив dlc или sblc, аккредитив dlc что это такое, аккредитив stand by что это, sblc, sblc что это, sblc аккредитив, mt700 что это, sblc что это такое, swift mt 700, что такое оплата rdlc/dlc,мт 300 описание формата, swift mt542, sbls, mt 542 свифт это, аккредитив с авансовым платежом, виды swift сообщений, что такое sblc, stand by letter of credit, мт 199 свифт что это, мт 700 аккредитив, свифт 700 что это такое, proof of funds, standby letter of credit, отмена свифта, типы сообщений swift, swift 101, аккредитив sblc, мт 700 аккредитив что это, свифт 199 что это такое, mt199, sblc ucp 600, sblc это, swift сообщение, мт 110 свифт что это, резервный аккредитив, резервный аккредитив sblc, резервный аккредитив это, mt700 dlc, proof of assets что это, swift mt 110 что это, свифт мт 700, торговое финансирование это, mt 110 swift, proof of assets, swift 199, swift mt202 что это, swift mt103, swift перевод, свифт перевод, расчет кредита, что такое swift, международные переводы swift, открытие банк, что такое банковская гарантия, инвестиционный фонд, swift mt103, swift перевод, кредит, свифт перевод, инвестиционный фонд, свифт, инвестиционная компания, расчет кредита, инвестиционный проект, конвертация валют, инвестиционные компании, банк открытие кредит, перевод денег за границу без комиссии, денежный кредит, интернет кредит, товарный кредит, залоговый кредит, как перевести деньги за границу, потребительский кредит, онлайн заявка на кредит, подать заявку на кредит, заявка на кредит онлайн, ипотечное кредитование, кредит на покупку жилья, получить кредит онлайн, калькулятор автокредита, деньги в кредит, swift денежные переводы, кредит онлайн, онлайн кредит, кредит онлайн заявка, заявка на кредит, кредитон, как получить кредит, кредит на жилье, онлайн деньги, калькулятор кредита, перевод денег, кредитный калькулятор, ипотека, кредит наличными, кредитные карты, кредит, кредит на карту, кредит под залог недвижимости, оформить кредитную карту, депозит, банки онлайн кредит, как перевести деньги с карты на карту, обмен валют онлайн, денежный перевод, кредит на карту онлайн, онлайн кредит на карту, оформить кредит, оформить кредит онлайн, деньги онлайн на карту, онлайн заявка на кредит наличными, как сделать банковский перевод за границу, перевод валют, перевод вестерн юнион, деньги на карту онлайн, международные денежные переводы, переводчик валюты, вестерн юнион тарифы, перевести деньги с карты на карту онлайн, перевести деньги на карту, оформить онлайн заявку на кредит, международные платежи, кредит, как перевести деньги с карты на карту, депозит, вестерн юнион, денежные переводы, swift перевод, овердрафт, перевод денег, свифт перевод, как перевести деньги с другой страны, кредитные карты онлайн, перевод с карты на карту онлайн, международный перевод с карты на карту, кредит банк, банк корреспондент это, перевод денег с карты, swift банка, переводы денег с карты на карту, онлайн заявки кредит, как сделать банковский перевод за границу, онлайн перевод с карты на карту, деньги с карты на карту, получить кредитную карту онлайн, отправить деньги с карты на карту, перевести с карты на карту деньги, денежные переводы с карты на карту, как перевести с карты на карту деньги, интернет кредит, с карты на карту перевод, подтвержденный аккредитив, кредитный калькулятор, ипотека, кредит наличными, интернет банкинг, кредитные карты, кредит под залог недвижимости, депозитный калькулятор, кредит без залога, кредитование малого бизнеса, перевод долларов, перевод с карты на карту без комиссии, перевести деньги с карточки на карточку, перевод денег с карточки на карточку, товарный кредит, заказать кредитную карту онлайн, денежные переводы контакт, перевод денег сбербанк, как перевести деньги на карту, перевод денег на карту сбербанка, где получить кредит — Добро пожаловать на сайт нашей компании!

Горячая линия Платиза, как написать в службу поддержки?




В этой статье выясним, есть ли горячая линия Платиза? По каким номерам могут дозвониться клиенты? С какими вопросами помогут разобраться специалисты call-центра?



О компании

Platiza — одна из микрофинансовых организаций на российском рынке. Занимается предоставлением займов населению под различные нужды. Оформить кредит можно в течение нескольких минут даже не выходя из дома, воспользовавшись онлайн порталом.


Как написать в службу поддержки Платиза?

При трудностяхс оформлением займа, погашением задолженности или использованием личного кабинета, клиенты могут обратиться за консультацией.

Служба поддержки Platiza готова ответить на вопросы граждан онлайн. Для этого предусмотрены следующие формы связи:



  1. Через форму на сайте.

  2. По электронной почте.

Через форму — https://platiza.ru/help/connect, клиенты смогут связаться с контакт-центром и задать свой вопрос специалистам.

Аналогично можно поступить, отправив сообщение по электронной почте — [email protected].

Отправляя запросы, придерживайтесь рекомендаций:



  • Уточняйте ФИО, контакты.

  • Тему.

  • Причины.

  • Прикрепляйте доп. материалы.

На сайте предусмотрен раздел «Справка», в котором собрали информацию по всем популярным темам — https://platiza.ru/help/popular-questions.


Какой телефон горячей линии Платиза?

В России у компании действует единый контакт-центр по обработке обращений от населения. Горячая линия рассматривает вопросы общего характера, а также технические проблемы, с которыми могут столкнуться клиенты при использовании сервисов организации.


Телефон горячей линии бесплатный — 8 800 200 38 39. Позвонить можно со всех стационарных, а также мобильных устройств с 06:00 до 00:00.


Указанный горячий номер телефона поможет получить консультацию относительно требуемых документов, условиях сотрудничества и т.д.


Адреса на карте

Адреса, телефоны и режим работы можно посмотреть на Яндекс Картах.


Для каких случаев предназначена горячая линия?

По телефонной линии или онлайн, граждане могут получить помощь при оформлении займа, отправке документов, изменения графика платежей, получения разъяснений при возникновении задолженности и т. д.


В каком случае поддержка не сможет помочь?

Поддержка рассматривает только вопросы, которые касаются компании.

Специалисты контакт-центра не рассматривают, не обсуждают условия предоставления займов в сторонних организациях.


Связь с поддержкой через личный кабинет

Для клиентов в компании предусмотрены и альтернативные способы общения. Речь идет об общении с менеджерами через личный кабинет на сайте.


Для регистрации и входа используйте ссылку — https://platiza.ru/login.

Учетная запись предоставляется только для оформивших договор и получивших займ.

Чтобы отправить обращение, перейдите во вкладку «Техподдержка» и заполните всплывающую форму.


Как написать жалобу?


Остались недовольны обслуживанием?

Можете оставить жалобу одним из способов:



  1. Отправив письмо по электронной почте.

  2. Заполнив форму через сайт или личный кабинет.

  3. Оставив комментарий в соц. сети.

Жалобы рассматриваются только при условии указания достоверных данных о себе, как ФИО и контакты.

О претензиях можно сообщать и через call-центр.


Другие способы связи

Пообщаться с менеджерами компании можно и другим способом, например, оставив комментарий в одной из социальных сетей:




Время работы

У службы поддержки Платиза режим работы установлен с 06:00 до 00:00, ежедневно.



Headquarter Locations, Competitors, Financials, Employees

Финам.ru — FINAM Global запустил сервис краткосрочных займов Platiza.ru — Новости компаний

Feb 29, 2016

22.11.2012 12:08   Новости компаний Инвестиционный фонд FINAM Global (входит в состав инвестиционного холдинга «ФИНАМ») объявляет о запуске проекта Platiza.ru — уникального для российского рынка интернет-сервиса, пользователи которого получат возможность оформить краткосрочный заём за считанные минуты без предъявления документов. В рамках сервиса клиент может не только оперативно получить интересующую его сумму займа, но и быстро оплатить коммунальные счета, услуги связи и покупки у партнеров проекта. Всё, что требуется от потенциального клиента Platiza.ru, — наличие дебетовой банковской карты. На карту, в случае одобрения заявки, перечисляются средства в размере займа, и с неё же списывается сумма в счёт погашения долга. Такой подход существенно упрощает процедуру получения и погашения займа, экономит личное время заемщика. Помимо выдачи микрозаймов путём перечисления средств на счёт дебетовой карты, сервис позволяет клиентам в режиме онлайн оплачивать жилищно-коммунальные услуги (ЖКУ), услуги операторов сотовой связи и прочие счета. Для этого достаточно подать заявку на получение займа на Platiza.ru, дождаться её одобрения, выбрать поставщика услуг из более чем 2000 вариантов, и оплата будет произведена в течение нескольких минут, причём без комиссии. Ресурс Platiza.ru также сотрудничает с интернет-магазинами, благодаря чему клиенты могут взять заём и оплатить покупки не выходя из дома.

В рамках партнёрской программы предусмотрена возможность возврата приобретённого товара обратно в магазин. Если покупка возвращается до момента погашения займа, с покупателя снимаются обязательства по выплате заемных средств. Для удобства клиентов Platiza.ru разработан онлайн-сервис «Личный кабинет» — с его помощью заёмщики могут контролировать свои денежные средства и осуществлять досрочное погашение займов. В последнем случае производится пересчёт суммы выплаты в меньшую сторону, что позволяет заемщику экономить на выплате процентов. «Platiza.ru — это ни на что не похожий проект, открывающий интернет-сообществу целый ряд новых возможностей. Основная его задача — решение финансовых проблем потребителей максимально быстро и наименее затратно. При разработке проекта мы первостепенно учитывали давно назревшие потребности россиян в услугах онлайн-сервиса, позволяющего решить сразу несколько проблем. В итоге мы создали проект, объединивший в себе такие опции, как выдача займа и оплата товаров/услуг без необходимости посещения банка и торгово-сервисного предприятия.
Мы уверены, что за счёт своей уникальности и простоты использования проект будет успешно развиваться, и сможет эффективно удовлетворить насущные потребности населения», — говорит генеральный директор Platiza.ru Илья Саломатов. «Мы с оптимизмом смотрим на перспективы развития проекта Platiza.ru. С одной стороны, популярности онлайн-сервиса будет способствовать огромный спрос населения на услуги микрофинансирования и дальнейший рост уровня проникновения интернета. С другой стороны, проект предоставляет своим пользователям уникальную возможность практически моментально оформить заём без необходимости личного посещения офиса, а также на комфортных условиях приобрести интересующий товар и оплатить широкий спектр услуг. Уверен, что перечисленные преимущества, наряду с высоким профессионализмом команды проекта, позволят Platiza.ru расти существенно быстрее рынка», — считает CEO фонда FINAM Global Дмитрий Смирнов. FINAM Global — подразделение инвестиционного холдинга «ФИНАМ», объединяющее такие направления работы, как прямые инвестиции, частные капиталовложения, инвестиционный банкинг (в части ТМТ-компаний), международное развитие интернет-проектов и ряд других.
Отдел по связям с общественностью и СМИ инвестиционного холдинга «ФИНАМ»

Platiza увеличила объем выдач на 43% в 2016 году

| Поделиться

Российский сервис мгновенной финансовой помощи Platiza (проект фонда FinSight Ventures, учредителями которого являются группа «Финам» и компания «Скагит Инвестментс») подвел итоги 2016 г. и зафиксировал повышенный спрос на онлайн-займы. Темпы выдач компании оказались на 3% выше темпов роста всего рынка микрокредитования и составили 43%, сообщили CNews в Platiza.

По результатам 2016 г. объем выдач составил более p1,2 млрд. Средняя сумма займа по всем режимам достигла p4,7 тыс., средний срок — 15 дней, а средняя процентная ставка — 1,2%. Займы перечислялись заемщикам на карту или интернет-кошелек всего за 30 секунд в режиме онлайн по всей России.

Одобрение на выдачу новых займов стало получать большее количество заемщиков: approval rate (процент одобрения) достиг 67%. Основные цели займов остались те же: клиенты обращались за деньгами, чтобы дотянуть «до зарплаты», для улучшения кредитной истории и на покупку товаров и услуг, отметили в компании.

В 2016 г. важным достижением в компании считают разработку и запуск мобильного скоринга, многомодульной системы оценки кредитоспособности заемщика на основе новейших технологий, а также построение адаптированной и масштабируемой системы бизнес-аналитики, поддерживающей облачные технологии и технологии machine learning, deep learning и big data.

В октябре компания разработала и выпустила мобильное приложение нового поколения Balance, которое предназначено для управления персональными финансами. Это личный финансовый планировщик, работающий на технологии искусственного интеллекта, который помогает клиентам достигнуть поставленных целей и обрести финансовую стабильность. По данным Platiza, его скачали и установили уже более 25 тыс. клиентов.

Константин Рензяев, Corpsoft24: Главный вызов «удаленки» — управление эффективностью сотрудников и предотвращение их выгорания

Удаленная работа

Клиенты компании по-прежнему имеют возможность мгновенно получать заемные средства на карту или интернет-кошелек, не выходя из дома, бесплатно узнавать свой кредитный рейтинг, получать индивидуальную программу займов и улучшать кредитную историю после каждого своевременного погашения займа.

«Прошедший 2016 год был очень насыщенным и непростым, тем не менее нашей команде удалось достичь отличных показателей и предоставлять клиентам высокий уровень сервиса. Мы увеличили клиентскую базу почти вдвое, и при этом 76% всех займов стали повторными. В 2017 году мы планируем увеличение доли рынка и укрепление позиций, выход за рубеж, внедрение новых передовых технологий и расширение продуктовой линейки», — рассказал Александр Уваров, директор по взаимодействию с акционерами и инвесторами и стратегическим коммуникациям Platiza.

Татьяна Короткова

Закономерности штарковского уширения литий- и натрий-подобных изоэлектронных последовательностей

  • Джениже С., Сречкович А., Милосавлевич М., Лабат О., Платиша М., Пурич Дж.: З. физ. D — Атомы, молекулы и кластеры 9 , 129 (1988)

    Google ученый

  • Ackermann, U., Finken, K.H., Musielok, J.: Phys. Ред. А 31 , 2597 (1985)

    Google ученый

  • Боген П.: З. Натурфорш. А 27 , 210 (1972)

    Google ученый

  • Эль-Фарра, Массачусетс, Хьюз, Т.П.: J. Quant. Спектроск. Радиат. Транс. 30 , 335 (1983)

    Google ученый

  • Келлне, Э., Джонс, Л.А., Барнард, А.Дж.: J. Quant. Спектроск. Радиат. Транс. 22 , 589 (1979)

    Google ученый

  • Пурич Й., Джениже С., Сречкович А., Платиша М., Лабат Дж.: Phys. Ред. А 37 , 498 (1988)

    Google ученый

  • Пурич Й., Сречкович А., Джениже С., Платиша М.: Phys. Ред. А 37 , 4380 (1988)

    Google ученый

  • Коневич, Н., Питтманн, Т.Л.: J. Quant. Спектроск. Радиат. Транс. 37 , 311 (1987)

    Google ученый

  • Пурич Й., Джениже С., Сречкович А., Чук М. , Лабат Дж., Платиша М.: Z. Phys. D — Атомы, молекулы и кластеры 8 , 348 (1988)

    Google ученый

  • Пурич, Й., Джениже, С., Лабат, Й., Циркович, Л.: Z. Phys. 267 , 71 (1974)

    Google ученый

  • Платиша М., Димитриевич, М.С., Попович, М., Коневич, Н.: J. Phys. Б 10 , 2997 (1977)

    Google ученый

  • Лесаж А., Ратор Б.А., Лакичевич И.С., Пурич Дж.: Phys. Ред. А 28 , 2264 (1983)

    Google ученый

  • Платиша М., Попович М., Димитриевич М.С., Коневич Н.: J. Quant. Спектроск. Радиат. Транс. 22 , 333 (1979)

    Google ученый

  • Платиша М., Попович, М., Димитриевич, М. С., Коневич, Н.: Z. Naturforsch. А 30 , 212 (1975)

    Google ученый

  • Димитриевич, М.С., Коневич, Н.: Формы спектральных линий. Венде, Б. (ред.), с. 211. Берлин: deGruyter 1981

    Google ученый

  • Димитриевич М.С., Коневич Н.: Астрон. Астрофиз. 172 , 345 (1987)

    Google ученый

  • Пурич, Ю., Чук М., Лакичевич И.С.: Phys. Ред. А 32 , 1106 (1985)

    Google ученый

  • Пурич, Дж., Джениже, С., Сречкович, А., Чук, М.: Физика (1988) (в печати)

  • Грим, Х.Р.: Уширение спектральных линий плазмой. Нью-Йорк: Academic Press, 1974,

    ,

    . Google ученый

  • Визе, В. Л., Смит, М.В., Гленнон, Б.М.: Вероятности атомных переходов.NSRDS-NBS 4, правительство США. Распечатать. Офис, Том. I. Вашингтон, округ Колумбия, 1966

  • Визе, В.Л., Смит, М.В., Майлз, Б.М.: Вероятности атомных переходов. NSRDS-NBS 22, правительство США. Распечатать. Офис, Том. II. Вашингтон, округ Колумбия, 1969

  • Бриджес, Дж. М., Визе, В. Л.: Phys. 159 , 31 (1967)

    Google ученый

  • Миллер, М.Х.: Техническое примечание. Университет Мэриленда, BN-550 (1968)

  • Бароннет, Дж.M., Rakowitz, J., Condert, J.F., Bourdin, E., Fauchais, P., Ershov-Pavlov, A.P.: J. Phys. (Париж), Коллок. C7 [Прил. 7] 40 , 247 (1979)

    Google ученый

  • Попович М., Платиша М., Коневич Н.: Астрон. Астрофиз. 41 , 463 (1975)

    Google ученый

  • Платиша М., Попович М., Коневич Н.: Астрон. Астрофиз. 45 , 325 (1975)

    Google ученый

  • Визуализация напряжения в обонятельной луковице с использованием линий трансгенных мышей, экспрессирующих генетически закодированный индикатор напряжения ArcLight

  • Storace, D. et al. На пути к более совершенным генетически закодированным датчикам мембранного потенциала. Trends Neurosci. 39 , 277–289. https://doi.org/10.1016/j.tins.2016.02.005 (2016).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Сепехри Рад, М. и др. Визуализация напряжения и кальция активности мозга. Биофиз. J. 113 , 2160–2167, https://doi.org/10.1016/j.bpj.2017.09.040 (2017).

  • Platisa, J., Vasan, G., Yang, A. & Pieribone, V. A. Направленная эволюция ключевых остатков во флуоресцентном белке меняет полярность чувствительности к напряжению в генетически закодированном индикаторе arcLight. ACS Хим. Неврологи. 8 , 513–523. https://doi.org/10.1021/acschemneuro.6b00234 (2017 г.).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Platisa, J. & Pieribone, VA Генетически закодированные флуоресцентные индикаторы напряжения: мы уже там? Курс. мнение Нейробиол. 50 , 146–153. https://doi.org/10.1016/j.conb.2018.02.006 (2018 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Платиса, Дж., Han, Z. & Pieribone, V. Различные категории флуоресцентных белков приводят к GEVI со схожими характеристиками. (2020). https://doi.org/10.1101/2020.05.06.081018v1.

  • Ри, Дж. К. и др. Биофизические параметры GEVI: соображения по напряжению визуализации. Биофиз. Дж. 119 , 1–8. https://doi.org/10.1016/j.bpj.2020.05.019 (2020 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Джин Л. и др. Одиночные потенциалы действия и подпороговые электрические события, визуализированные в нейронах с помощью зонда напряжения флуоресцентного белка. Нейрон 75 , 779–785. https://doi.org/10.1016/j.neuron.2012.06.040 (2012 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Хан З. и др. Зонды напряжения флуоресцентного белка, полученные из ArcLight, которые реагируют на изменения напряжения мембраны с быстрой кинетикой. PLoS ONE 8 , e81295. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0081295 (2013 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Гонг Ю. и др. Высокоскоростная запись нервных импульсов у бодрствующих мышей и мух с помощью флуоресцентного датчика напряжения. Наука 350 , 1361–1366. https://doi.org/10.1126/science.aab0810 (2015 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Сторас, Д.А., Браубах, О.Р., Джин, Л., Коэн, Л.Б. и Сунг, У. Мониторинг мозговой активности с помощью белковых датчиков напряжения и кальция. наук. Респ. 5 , 10212. https://doi.org/10.1038/srep10212 (2015).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Каннан, М. и др. Быстрая визуализация напряжения in vivo с использованием красного флуоресцентного индикатора. Нац. Методы 15 , 1108–1116. https://doi.org/10.1038/s41592-018-0188-7 (2018 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Пяткевич К.D. и др. Популяционная визуализация нервной активности бодрствующих мышей. Природа 574 , 413–417. https://doi.org/10.1038/s41586-019-1641-1 (2019 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Абдельфаттах, А. С. и др. Яркие и фотостабильные хемигенетические индикаторы для расширенной визуализации напряжения in vivo. Наука 365 , 699–704. https://doi.org/10.1126/science.aav6416 (2019 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед Google ученый

  • Виллетт, В. и др. Сверхбыстрая двухфотонная визуализация индикатора напряжения с высоким коэффициентом усиления у бодрствующих мышей. Сотовый 179 , 1590-1608.e1523. https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.11.004 (2019 г. ).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Бандо Ю., Сакамото М., Ким С., Айзенштат И. и Юсте Р. Сравнительная оценка генетически закодированных показателей напряжения. Сотовый представитель 26 , 802–813, https://doi.org/10.1016/j.celrep.2018.12.088 (2019).

  • Mathiesen, S.N., Lock, J.L., Schoderboeck, L., Abraham, W.C. & Hughes, S.M. Трансдукция ЦНС Преимущества AAV-PHP.eB по сравнению с AAV9 зависят от пути введения и штамма мыши. Мол. тер. Методы клин. Дев. 19 , 447–458, https://doi.org/10.1016/j.omtm.2020.10.011 (2020).

  • Цао, Г. и др. Генетически направленная оптическая электрофизиология в интактных нейронных цепях. Сотовый 154 , 904–913. https://doi.org/10.1016/j.cell.2013.07.027 (2013 г.).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Чемберленд, С. и др. Быстрая двухфотонная визуализация динамики субклеточного напряжения в нейронной ткани с генетически кодируемыми индикаторами. Elife 6 , https://doi.org/10.7554/eLife.25690 (2017).

  • Раккулья, Д. и др. Пресинаптические ГАМК-рецепторы опосредуют временное усиление контраста в обонятельных сенсорных нейронах дрозофилы и модулируют поведенческую кинетику, управляемую запахом. eNeuro 3 , https://doi.org/10.1523/ENEURO.0080-16.2016 (2016).

  • Раккулья, Д. и др. Специфическая для сети синхронизация электрических медленноволновых колебаний регулирует сонливость у дрозофилы. Курс. биол. 29 , 3611-3621.e3613. https://doi.org/10.1016/j.cub.2019.08.070 (2019 г.).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Мадисен, Л. и др. Трансгенные мыши для перекрестного нацеливания на нейронные сенсоры и эффекторы с высокой специфичностью и эффективностью. Нейрон 85 , 942–958. https://doi.org/10.1016/j.neuron.2015.02.022 (2015 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Лу, С. и др. Генетически нацеленная полностью оптическая электрофизиология с трансгенной cre-зависимой мышью с оптопатчем. J. Neurosci. 36 , 11059–11073. https://doi.org/10.1523/jneurosci.1582-16.2016 (2016 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Шимаока Д., Стейнмец Н.А., Харрис К.Д. и Карандини М. Влияние двусторонней постоянной активности на вызванные ответы в коре головного мозга мышей. Элиф 8 , https://doi.org/10.7554/eLife.43533 (2019).

  • Сонг, К., Piscopo, DM, Niell, CM & Knopfel, T. Корковые признаки соматосенсорной обработки бодрствования. наук. Респ. 8 , 11977. https://doi.org/10.1038/s41598-018-30422-9 (2018).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Цзэн Х. и др. Индуцибельная и обратимая система генетического спасения мышей. PLoS Genet 4 , e1000069. https://дои.org/10.1371/journal.pgen.1000069 (2008 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Армбрустер, М. и др. Активность нейронов вызывает специфическую деполяризацию дистальных отростков астроцитов. bioRxiv , 2021.2007.2003.450922, doi: https://doi.org/10.1101/2021.07.03.450922 (2021).

  • Vucinic, D., Cohen, L.B. & Kosmidis, E.K. Межклубочковое центрально-окружное торможение формирует вызываемый запахом ввод в обонятельную луковицу мыши in vivo. J. Нейрофизиол. 95 , 1881–1887 гг. https://doi.org/10.1152/jn.00918.2005 (2006 г.).

    Артикул пабмед Google ученый

  • Кохви, М. и др. Субпопуляция ГАМКергических интернейронов обонятельной луковицы происходит от Emx1- и Dlx5/6-экспрессирующих предшественников. J. Neurosci. 27 , 6878–6891. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.0254-07.2007 (2007 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ваховяк, М.и Коэн, Л. Б. Представление запахов рецепторными нейронами, входящими в обонятельную луковицу мыши. Нейрон 32 , 723–735 (2001).

    КАС Статья Google ученый

  • Bozza, T., McGann, J.P., Mombaerts, P. & Wachowiak, M. Визуализация нейронной активности in vivo путем целенаправленной экспрессии генетически кодируемого зонда у мыши. Нейрон 42 , 9–21 (2004).

    КАС Статья Google ученый

  • Спортс, Х., Wachowiak, M., Cohen, LB & Friedrich, RW. Временная динамика и паттерны латентности входных сигналов рецепторных нейронов в обонятельную луковицу. J. Neurosci. 26 , 1247–1259 (2006).

    КАС Статья Google ученый

  • Wachowiak, M. et al. Оптическое исследование обработки информации о запахах in vivo с использованием GCaMP, экспрессируемых в определенных типах клеток обонятельной луковицы. J. Neurosci. 33 , 5285–5300. https://doi.org/10.1523/jneurosci.4824-12.2013 (2013 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ghatpande, A.S. & Reisert, J. Реакция нейронов обонятельных рецепторов, кодирующая быструю выборку запахов. J. Physiol. 589 , 2261–2273. https://doi.org/10.1113/jphysiol.2010.203687 (2011).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ваховяк, М. и др. Ингибирование [исправлено] входа нейронов обонятельных рецепторов в клубочки обонятельных луковиц, опосредованное подавлением пресинаптического притока кальция. J. Нейрофизиол. 94 , 2700–2712. https://doi.org/10.1152/jn.00286.2005 (2005 г.).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Leinders-Zufall, T., Greer, C.A., Shepherd, G.M. & Zufall, F. Визуализация индуцированных запахом переходных процессов кальция в одиночных обонятельных ресничках: специфичность активации и роль в трансдукции. J. Neurosci. 18 , 5630–5639 (1998).

    КАС Статья Google ученый

  • Курахаши Т. и Менини А. Механизм адаптации запаха в клетке обонятельного рецептора. Природа 385 , 725–729. https://doi.org/10.1038/385725a0 (1997 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед Google ученый

  • млн лет, М., Чен, В. Р. и Шеперд, Г. М. Электрофизиологическая характеристика нейронов обонятельных рецепторов крыс и мышей из интактного эпителиального препарата. Дж. Неврологи. Методы 92 , 31–40. https://doi.org/10.1016/s0165-0270(99)00089-8 (1999).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Сторас, Д. А. и Коэн, Л. Б. Обонятельная луковица млекопитающих способствует адаптации реакции на запах: второе перцептивное вычисление, выполняемое луковицей. eNeuro , https://doi.org/10.1523/ENEURO.0322-21.2021 (2021).

  • Лекок Дж., Тирет П. и Чарпак С. Коды периферической адаптации при высокой концентрации запаха в клубочках. J. Neurosci. 29 , 3067–3072. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.6187-08.2009 (2009 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Спорс, Х. и Гринвальд, А. Пространственно-временная динамика представления запаха в обонятельной луковице млекопитающих. Нейрон 34 , 301–315 (2002).

    КАС Статья Google ученый

  • Денк В., Стриклер Дж. Х. и Уэбб В. В. Двухфотонная лазерная сканирующая флуоресцентная микроскопия. Наука 248 , 73–76. https://doi.org/10.1126/science.2321027 (1990).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед Google ученый

  • Мурата Ю., Ивасаки Х., Сасаки М., Инаба К. и Окамура Ю. Активность фосфоинозитидфосфатазы в сочетании с датчиком внутреннего напряжения. Природа 435 , 1239–1243 (2005).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Димитров Д. и др. Разработка и определение характеристик улучшенного датчика напряжения флуоресцентного белка. PLoS ONE 2 , e440. https://doi.org/10.1371/журнал.поне.0000440 (2007).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Санкаранараянан, С., Де Анджелис, Д., Ротман, Дж. Э. и Райан, Т. А. Использование рН-фторинов для оптических измерений пресинаптической активности. Биофиз. J. 79 , 2199–2208. https://doi.org/10.1016/S0006-3495(00)76468-X (2000 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Piao, HH, Rajakumar, D., Kang, BE, Kim, EH & Baker, BJ Комбинаторный мутагенез домена, чувствительного к напряжению, обеспечивает оптическое разрешение потенциалов действия, возбуждающихся с частотой 60 Гц, с помощью генетически закодированного флуоресцентного датчика мембранный потенциал. J. Neurosci. 35 , 372–385. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.3008-14.2015 (2015 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ашида, К., Хотта, К. и Ока, К. Отношения ввода-вывода интернейронов AIY у caenorhabditis elegans в шумной среде. iScience 19 , 191–203, https://doi.org/10.1016/j.isci.2019.07.028 (2019).

  • Мацке, А.Дж. и Мацке, М. Экспрессия и тестирование в растениях ArcLight, генетически закодированного индикатора напряжения, используемого в исследованиях в области неврологии. Завод БМК. биол. 15 , 245. https://doi.org/10.1186/s12870-015-0633-z (2015).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Borden, P. Y. et al. Генетически экспрессируемый датчик напряжения ArcLight для визуализации крупномасштабной активности коры головного мозга у бодрствующих и находящихся под наркозом мышей. Нейрофотоника 4 , 031212. https://doi.org/10.1117/1.NPh.4.3.031212 (2017).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Фридрих, Р. В. и Коршинг, С. И. Хемотопические, комбинаторные и некомбинаторные пахучие представления в обонятельной луковице, выявленные с помощью чувствительного к напряжению индикатора аксона. J. Neurosci. 18 , 9977–9988 (1998).

    КАС Статья Google ученый

  • Бандо Ю., Wenzel, M., Yuste R. Nat. коммун. https://doi.org/10.1038/s41467-021-27444-9 (2021).

  • Platisa, J., Ye, X., Ahrens, A.M., Liu, C., Chen, I.A., Davison, I.G., Tian, ​​L., Pieribone, V.A., Chen, J.L., BioRxiv. https://doi.org/10.1101/2021.12.07.471668 (2021 г.).

  • Зорумски С.Ф., Изуми Ю. и Меннерик С. Кетамин: рецепторы NMDA и другие. J. Neurosci. 36 , 11158–11164. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.1547-16.2016 (2016).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Schoppa, N.E., Kinzie, J.M., Sahara, Y., Segerson, T.P. & Westbrook, G.L. Ингибирование дендродендритов в обонятельной луковице управляется рецепторами NMDA. J. Neurosci. 18 , 6790–6802 (1998).

    КАС Статья Google ученый

  • Исааксон, Дж.С. и Строубридж, Б. В. Обонятельные реципрокные синапсы: передача сигналов дендритов в ЦНС. Нейрон 20 , 749–761. https://doi.org/10.1016/s0896-6273(00)81013-2 (1998).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Уилсон, Д. А., Салливан, Р. М., Галл, С. М. и Гатри, К. М. Модуляция NMDA-рецептором латерального ингибирования и экспрессии c-fos в обонятельной луковице. Мозг Res. 719 , 62–71.https://doi.org/10.1016/0006-8993(96)00083-2 (1996).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Ринберг Д., Кулаков А. и Гельперин А. Кодирование редких запахов у бодрствующих мышей. J. Neurosci. 26 , 8857–8865. https://doi.org/10.1523/jneurosci.0884-06.2006 (2006 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Попробуйте этот рецепт! — Los Angeles Times

    На прошлой неделе я кратко написал о двух Les Fleurettes, предварительных дебютантках, которые вызвались добровольцами в S.Преимущество EED для Descanso Gardens. Джордан Платиса и Лиза Санфилиппо, юниоры LCHS, произвели на меня хорошее первое впечатление. Я обещал рассказать о них нашим читателям на этой неделе.

    Семья Платиса переехала в Ла-Каньяда из Нортриджа вскоре после землетрясения 1994 года. «Мой папа — финансовый директор Ascent Media, а мама остается дома, чтобы заботиться обо мне и двух моих младших братьях. Она помогает нам с домашними заданиями, и приятно, что она участвует во всех наших мероприятиях», — сказала Платиса.

    Платиса добавила, что участие ее матери в общественных работах дало ей возможность участвовать в волонтерских проектах. Своим любимым занятием в программе она назвала возможности обслуживания Les Fleurettes.

    «Мы приготовили с Сантой бутерброды к чаепитию в клубе по четвергам, сделали поделку и помогли им улыбнуться Санте. Он действительно проникся духом Рождества. Я с нетерпением жду нашей работы в Специальной Олимпиаде этим летом», — добавила она.

    Платиса часто упоминала мероприятия, связанные с детьми.«Я много сижу, и мне это нравится», — объяснила она. «У моего десятилетнего брата есть друзья, которым нужны няни. Очень весело играть с маленькими детьми. Я присматриваю за двумя семьями не реже одного раза в неделю, а иногда и дважды».

    Она надеется родить троих детей, когда выйдет замуж. «Это идеальный размер для семьи», — сказала она. В La Cañada Presbyterian Platisa еженедельно посещает небольшие групповые обсуждения с седьмого класса. «У нас есть пожилой консультант, который помогает нам говорить о нашей жизни и связывать наши переживания с Богом.Я понял, когда мы говорили о поддержке семьи, какая у меня замечательная семья. Я не хочу их недооценивать».

    Платиса призналась, что еще не определилась со специальностью в колледже или конкретной карьерой. «Я люблю моду. Я хотел бы быть личным помощником. Кампус Калифорнийского университета в Санта-Барбаре очень красивый. Я надеюсь, что смогу пойти туда. Я никогда не уеду из Калифорнии. Я слишком люблю погоду».

    Дома Платиса помогает ухаживать за семейным зверинцем, в котором есть кошки, две собаки, змея, аквариум и пруд с черепахами.Две кошки скончались в начале этого месяца, поэтому Платиса надеется вскоре завести новых котят.

    Лиза тоже заботится о домашнем питомце. Мамбо, французский бульдог, развлекает семью Санфилиппо своими выходками, но он собственный пес Лизы. Она влюбилась в эту породу, когда увидела фильм «Обрушение дома», и решила завести собственного бульдога. «Я изучил породу в Интернете. Затем я сидел с ребенком и устраивал гаражные распродажи, пока не заработал достаточно денег, чтобы купить его. Интересная личность Мамбо привлекает здесь много внимания», — объяснила она.

    В LCHS Санфилиппо играет в центре женской баскетбольной команды университета. «Мой рост работает на меня, но я думаю, что моя страсть, сосредоточенность и решительность — мои сильные стороны. Мои слабости технические. Мне нужно работать над движениями, такими как открытие под кольцом», — сказала она. Любимый урок Санфилиппоса — предварительное исчисление. «Математика дается мне легко».

    И Платиса, и Санфилиппо, старшие девушки-скауты, работают над своей золотой наградой. Любовь Санфилиппо к спорту отражена в ее проекте Gold.«У моей мамы есть друг, который преподает в начальной школе в Эль-Монте. Детям нравилось играть в волейбол, но в школе было тесно. Они потеряли свой двор, когда над ним установили переносной класс». — сказал Санфилиппо.

    «Я только что получил разрешение на сбор денег на покупку оборудования и переносной сети для них». Sanfilippo планирует использовать гаражные распродажи, вечера сбора средств в ресторанах и пожертвования для финансирования проекта. «Также я собираюсь выпустить DVD с правилами игры. Мне не терпится принести им оборудование, показать DVD и помочь им снова поиграть в волейбол», — сказал Санфилиппо.

    Прошлым летом Санфилиппо вместе со своей старшей сестрой отправилась волонтером в детский бейсбольный лагерь на стадионе Доджер. «Моя сестра была стажером в организации Доджер. Родители некоторых детей заплатили за их поездку, а другие спонсировались на стипендии. Не каждый день вы можете играть на поле Доджер, опробовать клетки для ватина и встретиться с игроками и тренерами. Дети были всех возрастов и профессий. Было приятно наблюдать за тем, как они занимаются одними и теми же делами. Я надеюсь, что смогу сделать это снова в этом году.”

    Санфилиппо назвала недавний показ мод Les Fleurettes своим любимым мероприятием в программе. «Я должна была выбрать наряд для собеседования при приеме на работу. Сотрудники Anthropologie помогли мне выбрать черную пышную юбку, рубашку и жакет». Санфилиппо использовала стажировку своей сестры как отправную точку при выборе наряда. «Я думал о том, что будет уместно для собеседования с Доджерс, и они помогли мне согласовать одежду, которая была менее формальной — веселой, но все же профессиональной.”

    Когда я услышал от Джордан, что ее мама Джоди отлично готовит, я попросил Джоди отправить по электронной почте два рецепта, которые получили восторженные отзывы от семьи и друзей. «Я всегда готовила соус из фасоли», — написала она. «Это любимое блюдо моего мужа и дочерей. К сожалению, они могут съесть весь рецепт до того, как мои гости успеют его съесть. Похоже на мой рецепт. Думаю, вам тоже понравится.

    Пишите Линн Дюваль по адресу [email protected] Netcom.com

    Направленная эволюция ключевых остатков во флуоресценте Белок меняет полярность чувствительности к напряжению в генетически Кодированный индикатор ArcLight

    Абстрактный

    Генетически закодированный индикаторы кальция (GECI) производят беспрецедентно большие сигналы, которые позволили обычную оптическую запись одиночных активность нейронов in vivo в мозге грызунов.Генетически закодированное напряжение индикаторы (GEVI) предлагают более прямое измерение нейронной электрической активности. статус, однако характеристики сигнал-шум и полярность сигнала зондов, разработанных на сегодняшний день, не позволяют использовать их в естественных условиях. Мы применили направленную эволюцию к целевым модулируемым областям флуоресцентного белок в GEVI ArcLight для создания первого GEVI на основе GFP (Марина) который демонстрирует Δ F / Δ V с положительным соотношением наклона. Мы обнаружили, что только три раунда сайт-направленного мутагенеза было получено семейство «осветляющих» GEVI с чувствительностью к напряжению, сравнимой с той, что наблюдается у родителя. зонд ArcLight.Этот сдвиг в полярности сигнала является важным первым шаг к созданию индикаторов напряжения с характеристиками сигнал/шум сопоставимы с GECI для поддержки широкого использования in vivo.

    Ключевые слова: Генетически закодированный индикаторы напряжения, ArcLight, зеленый флуоресцентный белок, биосенсоры, направленный эволюция, мутагенез

    Введение

    Высокая чувствительность генетически кодируемые индикаторы кальция (например, GCaMPs) в сочетании с двухфотонной микроскопией высокого разрешения обеспечили беспрецедентные взгляды на активность нейронов in vivo. 1 Данная методика позволяет контролировать активность большое количество генетически детерминированных нейронов в коре бодрствующего грызуны. Однако уровень внутриклеточного кальция является суррогатным индикатором. более релевантной физиологической меры, мембранного потенциала. Ан альтернатива индикаторам кальция для прямого сообщения о нейронах активности являются генетически закодированными показателями мембранного потенциала. Однако, в то время как первый индикатор напряжения флуоресцентного белка был сообщалось почти два десятилетия назад, 2 и многие сообщалось о дополнительных конструкциях, 3−16 , в основном из-за чувствительности к низкому напряжению, ни одна из них не получила широкого распространения для использования в физиологических исследованиях.

    Мы разработали ArcLight, 10 генетически закодированный флуоресцентный индикатор напряжения на основе слияния напряжения домен восприятия (VSD) напряжения Ciona кишечного чувствительная фосфатаза 17 и ее мутантная версия флуоресцентного белка pHluorin. 18 Срок Благодаря своей относительно высокой чувствительности ArcLight использовался для изучения электрическая активность дрозофилы нейронов 19-22 in situ, Caenorhabditis elegans нейронов in situ, 23 кардиомиоцитов человека, 24,25 и нейронов млекопитающих 42,6018 в культуре 1, 60183 . 27 Успешный использование ArcLight в различных организмах в основном связано с его яркостью хорошая локализация в мембране. В отличие от индикаторов, полученных из опсина, 9,13,14 ArcLight основан на Aequorea victoria зеленом флуоресцентном белке (GFP), который имеет яркость, на порядки большую, чем у опсинов. 28 И хотя опубликован ряд GEVI на основе слияния домена, чувствительного к напряжению, с GFP-подобным флуоресцентным белки 2−8,11,12,16,29−31 селективные мутации во флуоресцентном белке ArcLight привели к конструкция с беспрецедентными изменениями абсолютного выхода флуоресценции с напряжением.Тем не менее относительно медленная кинетика (время активации τ > 9 мс) вольтаж-зависимого изменения флуоресценции в Дуглайт значительно снижает его эффективность в обнаружении потенциалов действия в нейрональных клетках и негативно повлияло на его более широкое использование в физиологических эксперименты. 16,32

    Текущий мультифотон методы регистрации активности нейронов в коре головного мозга млекопитающих не может проследить кинетику реакции более быстрых показателей при регистрации одновременной динамики больших популяций отдельных нейронов у бодрствующих животных. 33,34 Моделирование ясно указывают на то, что преувеличенные во времени ответы флуоресценции к потенциалам действия улучшит обнаружение. 34,35 В свете этого наиболее важные ограничения ArcLight и другие датчики напряжения по сравнению с индикаторами кальция на основе GFP (т. е. GCaMP6) — это не скорости отклика, а скорее: (i) абсолютная (и относительные) изменения их выхода флуоресценции намного ниже чем современные индикаторы кальция и (ii) напряжение индикаторы с наибольшими сигналами в сочетании с оптимальной яркостью (я.e., ArcLight, ASAP2f и AceNeon) имеют отношение отрицательного наклона между напряжением и флуоресценцией, в отличие от индикаторов кальция, которые положительная зависимость наклона между уровнями кальция и флуоресценцией. 10,32,36

    Для улучшения утилиты GEVI ArcLight для записи in vivo электрической активности нейронов, мы стремились изменить полярность сигнала от уменьшения интенсивности флуоресценции при деполяризации, к увеличению. Однако многочисленные исследования ArcLight не выявили четкая механистическая гипотеза его надежной чувствительности к напряжению. 37−39 Большинство модификаций ArcLight нацелены на чувствительные к напряжению домен привел к нескольким зондам с улучшенной кинетикой, но с уменьшенным амплитуда зависящего от напряжения отклика. 26,38,39 Кроме того, подавляющее большинство одиноких (не FRET) Индикаторы напряжения на основе GFP, оба опубликованы (FlaSh, VSFP3, SPARC, Zahra1 и 2, ElectricPK, ArcLight, другие виды ArcLights, Bongwoori, ASAP1, ASAP2f, ArcLightning и др.) и неопубликованные (>500, Platisa и Pieribone) вызывают уменьшение флуоресценции в ответ к деполяризации.Насколько нам известно, существует только одно напряжение, подобное GFP. показатель (FlicR1), который демонстрирует деполяризационно-зависимое увеличение по интенсивности флуоресценции достаточно существенной, чтобы ее можно было рассматривать для практическое использование. 40 При этом для производства таких исследование, мы предприняли направленную эволюционную мутагенную стратегию, нацеленную на флуоресцентный белок в ArcLight в сочетании с автоматическим скринингом. Мы показываем, что изменения только трех остатков в флуоресцентном белке (FP) ArcLight привело к семейству «осветляющих» GEVI, которые демонстрируют чувствительность к напряжению, сравнимую с ArcLight. самый чувствительный вариант этих новых зондов, GEVI Marina способен сообщения о потенциалах действия и подпороговых событиях в спонтанных активные нейроны млекопитающих in vitro.

    Результаты и обсуждение

    Наиболее совершенные генетически кодированные индикаторы напряжения на основе FP (например, ArcLight, ASAP2f, Ace-mNeon) снижают интенсивность их флуоресценции. с активацией (т. е. деполяризацией). 10,32,36 Таким образом, во время записи in vivo этот яркий флуоресценция состояния ( F 0 ) вносит большой шумовой сигнал от окружающих ячеек, который снижает общее отношение сигнал/шум отношение (SNR) отклика по сравнению с зондами с низкой флуоресценцией в состоянии покоя.Поскольку нейроны существуют в деполяризованном состоянии далеко реже, чем в состоянии покоя (гиперполяризованном), показатель который демонстрирует низкую флуоресценцию в состоянии покоя, даст улучшенный ОСШ. Ключевое улучшение более поздних версий GCaMP (> GCaMP3) является их низкая флуоресценция в нейронах в состоянии покоя. Потенциалы действия вызывают приток кальция и тем самым резкое увеличение флуоресценции выход GCaMP6. Высокая чувствительность Δ F / Δ V ArcLight обеспечивается наличием специфические остатки во флуоресцентном белке.Мы пришли к выводу, что модификации к флуоресцентному белку может привести к изменению полярности сигнал, зависящий от напряжения.

    Для разработки GEVI с положительной зависимостью наклона между мембранным потенциалом и флуоресценцией мы решили использовать более яркая версия ArcLight, суперэклиптический ArcLight в качестве стартового точка. Ранее мы обнаружили, что eGFP может заменить флуоресцентную лампу ArcLight. белок (суперэклиптический pHluorin), если были сделаны четыре критические мутации (S389D, S444F, Q446T и A469D). 37 Примечательно, все эти остатки заселяют одну и ту же поверхность β-ствола (бета-листы 7, 10 и 11) и имеют внешнюю ориентацию. Мы начали путем создания насыщенных библиотек мутагенеза трех из этих важнейших остатки (D389, F444 и T446) в домене FP ArcLight (, S1 и 2). Кроме того, мы сделали мутагенные библиотеки из шести другие остатки (R338, h490, Y442, T445, S447 и E464; и S1), которые находятся проксимальнее либо хромофора, либо остатки, которые мы обнаружили, что они необходимы для создания эффекта ArcLight.

    Важнейшие остатки в составе флуоресцентного белка ArcLight (супер эклиптический pHluorin) определяют полярность и размер вольтаж-зависимого ответ флуоресценции в генетически закодированных индикаторах напряжения. Два различные углы обзора трехмерной структуры eGFP (идентификатор PDB 1EMA), иллюстрирующие положение остатков в пределах суперэклиптики pHluorin ArcLight, что обеспечивают обратную полярность и высокую чувствительность индикатора напряжения Марина: D389A (синий), h490A (пурпурный) и Y442V (желтый).Решающее остатки для чувствительности к напряжению ArcLight: D389 (синий), F444 (оранжевый), T446 (голубой) и D469 (зеленый). 37

    Направленная эволюция GEVI ArcLight производит индикатор с обратная реакция, зависящая от напряжения. Левые боковые панели (A, C и E): для каждой из насыщенных библиотек мутагенеза было получено 96 колоний. отобраны и протестированы на экспрессию и чувствительность к напряжению. Скрининг каждой библиотеки преформировали два-четыре раза на заказном, полуавтоматическая сортировочная платформа, позволяющая проводить одновременное поле стимуляция и оптическая визуализация в формате 96-луночного планшета.Мы использовали либо электрически активные клетки HEK293, либо нейроны коры мыши. транзиентно экспрессирующие различные мутанты. Каждая точка на графике представляет максимальное значение деполяризационно-зависимого изменения флуоресценции обнаруживаются в каждой лунке. Правые боковые панели (B, D и F): детальное исследование чувствительности выбранных индикаторов к напряжению с помощью комбинации запись патч-клэмп цельных клеток и оптическая визуализация в неэлектрическом активные клетки HEK293. Интенсивность возбуждающего света, измеренная на образце плоскости 18 мВт/мм 2 .На каждую конструкцию от трех до шести ячеек были протестированы. Данные представлены как среднее ± SEM. (А) Первый раунд сайт-направленного мутагенеза на остатках, проксимальных к хромофору (R338, h490, Y442, T445, S447 и E464) или остатки, которые мы обнаружили важно для чувствительности ArcLight к напряжению (D389, F444 и Т446). Библиотеки F444X и T446X тестировали на нейронах, все остальные библиотеки тестировали в клетках HEK293, в которые добавлялись добавки. Некоторые из конструкций несущие мутации в остатке D389 производят зонды, которые реагируют на деполяризация мембраны с умеренным увеличением интенсивности флуоресценции.(B) Детальное исследование подтверждает инвертированную полярность сигнала нескольких Мутанты D389 по сравнению с родительским ArcLight. Самый высокий положительный сигнал, зависящий от деполяризации, был обнаружен в ArcLight D389A. мутант. (C) Второй раунд сайт-направленного мутагенеза остатков R338, h490, T445, S447 и E464 с использованием ArcLight D389A в качестве шаблона идентифицировали несколько мутантов h490 с повышенной чувствительностью к напряжению по сравнению с родительским показателем. (D) Определены записи фиксации напряжения мутант ArcLight A389 h490A как высокоотзывчивый.(E) Дополнительные мутагенные библиотека по остатку Y442 ArcLight A389 h490A производит варианты с дальнейшее улучшение чувствительности к напряжению. (F) Анализ клещей напряжения подтверждает значительное улучшение чувствительности к напряжению у двух мутантов Y442, Y442L и Y442V. ArcLight A389 A390 Y442V получил имя Марина.

    Девяносто шесть (96) Эшерихия coli колонии из каждая библиотека сайт-направленного мутагенеза была отобрана, и кДНК из каждую колонию очищали. Каждый из 96 клонов был протестирован путем скрининга. два-четыре раза либо в первичных культурах нейронов, либо в спонтанных добавление клеточной линии HEK 41 с использованием изготовленного на заказ автоматизированная платформа скрининга (Vasan, Platisa и Pieribone, персональные коммуникация).Мутации по остаткам R338, h490, Y442, F444, T445, T446, S447 и E464 произвели размеры сигнала, которые либо не изменились, или меньше, чем у ArcLight дикого типа (A). Однако мутации в D389 вызвало либо значительное снижение отрицательных изменений флуоресценции или, в некоторых случаях, увеличение интенсивности флуоресценции (до 7%Δ F / F при использовании нашего стандартного протокола стимуляции; см. Методы) с деполяризацией в мембране Напряжение. Мы секвенировали все 96 мутантов D389 и выбрали конструкции. которые представляли все 19 различных новых аминокислот.Каждый мутант был затем тестировали с помощью электрофизиологических методов фиксации цельных клеток. с микрофлуориметрией в неэлектрически активных клетках НЕК293. результаты этих скринингов можно увидеть на B. Мутант D389A продуцировал самые большие увеличение интенсивности флуоресценции при деполяризации мембраны (+7,1 ± 0,5%Δ F / F для +100 мВ деполяризация от удерживающего потенциала -70 мВ при выражении клетки HEK293). Замены D389W и D389C также дали положительный результат. хотя и меньше, ответы на деполяризации (B).В то время как мутация D389A в ArcLight изменил знак реакции флуоресценции на деполяризацию с от отрицательного к положительному, абсолютное изменение флуоресценции, а также поскольку Δ F / F был относительно небольшой.

    Чтобы повысить чувствительность к напряжению, мы выполнено мутагенез насыщения тех же остатков, как описано выше (R338, h490, Y442, T445, S447 и E464), но с использованием ArcLight A389 в качестве шаблона. Опять же, мутации R338, T445 и E464 давали конструкции с положительные сигналы движения, но они были в значительной степени похожи или меньше в величина, чем у ArcLight A389 (C и D).Однако конструкции с мутациями в h490 и S447 производил сигналы со значительно большей амплитудой отклика. чем ArcLight A389. Мы протестировали каждую из 19 аминокислотных замен. at h490, используя электрофизиологию патч-кламп цельных клеток, и обнаружили, что мутанты, несущие либо аланин, либо цистеин по остатку h490, продуцируются величины отклика, которые были в 2,5 и 2 раза больше, чем у ArcLight A389, соответственно (17,8 ± 1,2% F / F и 13,9 ± 1,2% F / F для деполяризации +100 мВ, протестированной в клетках HEK293).Мутант ArcLight A389 A390 показал биэкспоненциальную кинетику во времени. константы ∼3,6 мс и ∼30 мс для активации (быстрый компонент, составляющий 38% ответа), и ∼12 мс и ∼47 мс для инактивации (быстрый компонент составляет 68% ответа) (Рисунок S2). Наша попытка повысить напряжение чувствительность мутанта ArcLight W389 путем внесения изменений в положение 390 не удалось создать улучшенные варианты, чувствительные к напряжению. Мы сделали не изучать этот мутант дальше.

    Следующий раунд мутации были выполнены на остаток Y442 в ArcLight A389 A390 (E) и дал несколько вариантов (Y442 L, V, A, M и C), у которых были повышенные изменения, зависящие от деполяризации по интенсивности флуоресценции (F).Две наиболее перспективные конструкции, содержащие лейцин или валин в положении 442. Эти мутанты показали ~1,6 кратное увеличение амплитуды сигнала по сравнению с родительским ArcLight A389 A390 (31,1 ± 4,2% ΔF/F и 29,2 ± 2,0% Δ F / F для деполяризации +100 мВ в HEK293 ячейки соответственно). Мутант ArcLight A389 A390 V442 (по имени Марина) имеет одну экспоненциальную кинетику активации с постоянной времени 29,2 ± 2,0 мс и биэкспоненциальной кинетикой дезактивации с постоянные времени 15.6 ± 1,5 мс для быстрой составляющей и 59,4 ± 5,8 мс для медленного компонента (быстрый компонент с учетом 61% ответов; Рисунок S2).

    обнаружено изменение полярности зависимого от напряжения отклика ArcLight, по-видимому, зависит от присутствия аминокислот с гидрофобные (аланин, триптофан, цистеин и метионин) боковые цепи в положении 389. Гидрофобные боковые цепи аланина и триптофана произвели наибольший эффект. Гидрофильные боковые цепи (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин и аргинин) в этом положении не производить пробники с положительной крутизной зависимости от напряжения.Замена полярного тирозина (Y) на другом внешне ориентированном остатке 442 внутри ArcLight FP с рядом гидрофобных аминокислот (лейцин, изолейцин, валин, аланин и метионин) приводили к вариантам с повышенным чувствительность к напряжению. Опять же введение гидрофильных остатков (аспарагиновой кислоты или глутаминовой кислоты, данные не показаны) в это положение уменьшилось чувствительность к напряжению.

    Позиция 442 выглядит более беспорядочной до размера остатка с несколько аминокислот (валин, лейцин и изолейцин) продуцируют зонды с аналогичной чувствительностью к напряжению.Мы также продемонстрировали, что одинаково значительное улучшение чувствительности к напряжению (более чем в два раза) GEVI Marina было достигнуто за счет замены гидрофильного гистидин (H) в положении 390 с гидрофобными остатками, либо аланин (А) или цистеин (С). Введение других более крупных гидрофобных остатки в положении 390 вызывали меньшее увеличение чувствительности к напряжению. Замена h490 другими полярными гидрофильными группами не вызывала уменьшается только величина сигнала, но некоторые замены (аргинин и аспарагин) вызвали изменение полярности ответа зонда.Наши результаты показывают, что как размер, так и заряд боковой цепи Остаток 390 играет значительную роль в чувствительности к напряжению. Ан увеличение гидрофобности поверхности ФП подтверждает гипотезу что чувствительность к напряжению одиночных FP GEVI может зависеть от взаимодействий между поверхностью ФП и плазматической мембраной. 29,37 Влияние изменения остатка 390 на чувствительность к напряжению не удивительно, учитывая большое количество доказательств, описывающих различные способы в котором h490 (h248 в avGFP) влияет на флуоресцентные свойства GFP, включая изменение переноса протона и конформации белка и гибкость. 42−46

    Сравнение кривых V / F новых вариантов GEVI (A, B и S3) показали, что все три мутации (D389A, h490A и Y442V), введенные в родитель GEVI ArcLight способствовал повышению чувствительности зонда к деполяризующим событиям, в то время как все три зонда демонстрировали почти одинаковое отсутствие чувствительности к гиперполяризующим явлениям. Спонтанно добавление клеток HEK293 показало снижение базовой флуоресценции для Марина GEVI (180 ± 5 а.е., n = 3045 клеток) по сравнению с родительским ArcLight (266 ± 5 а.е., n = 8987 клеток).Мутационные изменения в Марине, по-видимому, снижают фотообесцвечивание. константы индикатора по сравнению с измеренным родительским датчиком ArcLight в клетках НЕК293 (С). Кривые фотообесцвечивания для обоих зондов были подогнаны под одну экспоненциальную зависимость. кривые, дающие постоянные времени 206,3 ± 20,8 с для Марины и 132,3 ± 4,8 с для ArcLight.

    Характеристика романа GEVI Марина. В экспериментах, показанных в A и B, клетки HEK293, временно экспрессирующие различные GEVI, были одновременно электрически записано с использованием патч-клеммы цельных клеток (300 мс 100 мВ деполяризующие шаги от удерживающего потенциала -70 мВ) и изображены с высокоскоростной (1000 Гц) ПЗС-камерой.Во всех опытах возбуждение интенсивность света, измеренная в плоскости образца, составила 18 мВт/мм 2 . (А) Деполяризационные изменения мембранного потенциала вызывают снижение интенсивности флуоресценции в ArcLight (синим цветом) и увеличение интенсивность флуоресценции в ArcLight D389A (светло-зеленый), ArcLight A389 h490A (зеленый) и ArcLight A389 A390 Y442V-Marina (темно-зеленый). Все трассы являются одиночными испытаниями и были вычтены с двойной экспоненциальной подходит для отбеливания коррекции. См. также рисунки S2 и S3 для невычитанных трасс.(Б) V F кривая для всех показателей, показанных на А (4–5 клеток записывается по каждому показателю). Для всех ячеек шаг напряжения -50 до +100 мВ применялись с шагом 10 мВ от потенциала покоя −70 мВ. Данные представлены как среднее ± SEM. (С) ГЕВИ Марина демонстрирует более низкую скорость фотообесцвечивания по сравнению с исходным зондом Арклайт. Электрически активные клетки HEK293, временно экспрессирующие GEVI ArcLight (синий), ArcLight A389 A390 (светло-зеленый) и ArcLight A389 A390 V442 (темно-зеленый) подверглись 60 циклам прерывистого лазерное возбуждение (рабочий цикл 5 с вкл/55 с выкл), в результате чего 300 s полное лазерное возбуждение (18 мВт/мм 2 ).(AU = произвольные единицы.)

    Для изучения потенциала выявление электрических событий в нейронах клетки, GEVI Marina временно экспрессировался в первичных нейронах мыши. культура in vitro. Репрезентативные нейроны коры головного мозга мыши in vitro временно выражающие GEVI Marina показаны в . Одновременная оптическая и электрическая регистрация показало, что чувствительность Марины к напряжению позволяет обнаруживать мембранные переходные процессы (одиночные потенциалы действия и подпороговые события) из тел и отростков нейронов ().Спонтанные потенциалы действия в Марине экспрессирующие нейроны можно было надежно увидеть оптически (; 1,4 ± 0,1% Δ F / F для потенциалов действия 37,4 ± 3,7 мВ; в среднем 35 точек доступа в 5 разных ячейках) с отношением сигнал/шум отношение (SNR) 4,5 ± 0,2. В одинаковых экспериментальных условиях родительский зонд ArcLight разрешает потенциалы действия со средним изменение флуоресценции 2,6 ± 0,7%Δ F / F для потенциалов действия 48,9 ± 8 мВ; среднее значение 21 точка доступа в 3 разных ячейках) с отношением сигнал-шум (SNR) 8.8 ± 1,5.

    Спонтанная электрическая активность у культивируемых млекопитающих обнаружены нейроны с GEVI Мариной. (Вверху) GEVI Marina с мембранной локализацией в транзиентно экспрессирующих нейронах коры головного мозга мышей in vitro. Изображение Z-стек из девяти секций толщиной 2 мкм, снятых с помощью двухфотонного микроскоп с 20-кратным объективом. Шкала полосы: 20 мкм. (Внизу) Образцы следов отдельных пробных записей спонтанного действия. потенциальные всплески из трех мест показанного нейрона. флуоресценция записи на частоте 125 Гц (цветные): % Δ F / F из области интереса тем же цветом слева; запись напряжения электрода сома (белый).Все оптические следы имеют двойное экспоненциальное вычитание для коррекции отбеливателя FP. 80 × 80 изображение (справа) нейрона с усредненными областями интереса для получения показанных следов. Интенсивность возбуждающего света на образце плоскости 18 мВт/мм 2 .

    Одновременная электрическая и оптическая регистрация спонтанного действия потенциальная активность клеток коры головного мозга, экспрессирующих in vitro ГЕВИ Марина. (A и B) Флуоресцентные следы активности в одном испытании. в телах нейронов двух разных клеток.(С) Увеличение следа, отмеченного в (B) красной рамкой. Оптический след в зеленом цвете, и электрика черного цвета. Интенсивность возбуждающего света на образце плоскости 18 мВт/мм 2 . Регистрировались все следы флуоресценции. на частоте 500 Гц с помощью высокоскоростной ПЗС-камеры. Все следы исправлены отбеливателем. Трассы в (A) и (B) не фильтруются, трасса в (C) фильтруется с использованием фильтр нижних частот Kaisser-Bessel 30 (отсечка 150 Гц).

    Зависимая от напряжения димеризация между флуоресцентными белки различные индикаторные молекулы были предложены в качестве механизма чувствительность к напряжению ArcLight и индикаторов, производных от ArcLight. 37,47 Остатки D389, F444 и T446 (S147, S202 и Q204 в avGFP, рис. S1) придают высокую чувствительность Δ F / Δ V ArcLight. 37 Эти остатки считаются частью более крупной группы аминокислот, которые образуют интерфейс димера в GFP. 48,49 Однако только замены A206K, L221K и F223R по отдельности или в комбинации, как было показано, нарушают образование димеров, делая GFP мономерный. 50 Для непосредственного тестирования возможного влияние остатков, образующих интерфейс димера, на чувствительность к напряжению, мы сделали библиотеки насыщения в этих трех позициях (T448, L463, и F465 в Марине; ).Ни одна из этих мутаций не давала показателей с повышенным чувствительность к напряжению по сравнению с родительским датчиком. Кроме того, мутагенные библиотеки нескольких других остатков, присутствующих на границе раздела димеризации GFP 49 N149, Y151, R168, S202 и Q204 (Q391, Y393, R410, F444 и T446 в Марине) тоже не производил более чувствительный показатель. Подобно тому, что было замечено для ArcLight остатки, F444, T446 и D469 играют решающую роль в чувствительности к напряжению Марины со многими мутантами, уменьшающими или даже обращающими вспять зависящее от напряжения сигнал.Тот факт, что мутации в нескольких присутствующих остатках в интерфейсе димеризации нарушается чувствительность зонда к напряжению согласуется с гипотезой о межмолекулярной димеризации играет роль в функции зонда ArcLight.

    Мутагенное действие изменения интерфейса димеризации FP на реакция, зависящая от напряжения. (A и B) Для каждого насыщенного мутагенеза библиотеки, 96 колоний были отобраны и протестированы на экспрессию и чувствительность к напряжению. Скрининг каждой библиотеки был проведен четыре раза. раз на специально изготовленной полуавтоматической платформе скрининга, которая позволяет для одновременной полевой стимуляции и оптической визуализации в 96-луночном формат блюда.Экранирование проводили в электрически активном HEK239. клетки, временно экспрессирующие различные мутанты. Каждая точка на графике представляет собой самое высокое значение флуоресценции, зависящей от деполяризации изменение, обнаруженное в каждой лунке. (A) ArcLight A389 A390 Y442V-Марина был использован в качестве шаблона для создания библиотек сайт-направленного мутагенеза на остатках, которые, как мы обнаружили, необходимы для чувствительности ArcLight к напряжению и/или участвуют в димеризации FP (Q391, R410, F444, T446 и D469). (B) ArcLight A389 A390 Y442L использовался в качестве шаблона для создания ориентированных на сайт библиотеки мутагенеза по остаткам, участвующим в димеризации FP (Y393, T448, L463 и F465).

    Из-за нескольких состояний хромофора GFP дикого типа (wtGFP) показывает два максимума поглощения: основная полоса поглощает при 398 нм и второстепенная полоса поглощает при 475 нм, каждая из которых имеет одинаковое излучение пики (508 и 503 нм соответственно). 51,52 Возбуждение вызывает сдвиг хромофора от нейтрального (поглощение при 398 нм) в анионную форму (поглощение при 475 нм) через возбужденное состояние перенос протона (ESPT), приводящий к зеленому излучению. Реакция ESPT включает несколько остатков, окружающих хромофор.Это было показано, что мутации критических остатков могут привести к нарушению ESPT но также и перемонтаж GFP с протонными путями, основанными на альтернативных акцепторы протонов. 44 У wtGFP мутация S65T заставляет хромофор существовать в основном в депротонированной форма, приводящая к одному пику возбуждения при ~488 нм. 53,54

    Оригинальный ArcLight (epArcLight), основанный на слиянии Напряжение чувствительный домен (VSD) Ciona , чувствительный к напряжению фосфатаза (CiVSP) и эклиптический pHluorin ArcLight) содержит серин на остатке 65 GFP (как присутствует в исходной эклиптике остаток pH фтора 307 из исходного метионина в Ciona VSD). 10,39 Эклиптический pHluorin FP дает двойные пики возбуждения (395 и 475 нм) в epArcLight, который напоминает спектр дикого типа GFP 18 и GCaMP. Однако широко используемый ArcLight это тот, в котором FP ​​включает мутацию S65T (т.е. суперэклиптический pHluorin) 55 обнаружен в eGFP, что вызывает упрощение спектра возбуждения до одного пика с центром при ~488 нм. 53 Эта версия ArcLight был принят, потому что его яркость в состоянии покоя была выше. 10

    Для проверки чувствительности к напряжению различных формы хромофоров GFP (нейтральный по сравнению с анионным), мы измерили чувствительность к напряжению в обоих «отрицательных» и «положительные» варианты ArcLight с использованием либо Возбуждающий свет 400 или 488 нм ( и S4). Мы рассмотрели напряжение/флуоресцентный отклик epArcLight и обнаружили, что деполяризационно-зависимый увеличение флуоресценции присутствовало при освещении светом с длиной волны ∼400 нм. используется, что является обратным откликом, наблюдаемым с ~ 488 нм. возбуждение (А).В отличие от epArcLight, суперэклиптический pHluorin ArcLight показывает отсутствие зависимого от деполяризации увеличения флуоресценции при возбуждении при ~400 нм (В). Кроме того, корректировка длины линкера, которая увеличила чувствительность суперэклиптики к напряжению pHluorin ArcLight, 10 не влияла на чувствительность к напряжению зонд на ~ 400 нм (C).

    Влияние длины волны возбуждающего света на чувствительность к напряжению в GEVI на базе ArcLight. Чувствительность к напряжению тестировалась с использованием всего электрофизиология клеточного пластыря в сочетании с оптической записью в неэлектрически активных клетках HEK293, транзиентно экспрессирующих различные GEVI (см. также рисунок S4).Клетки были удерживается при удерживающем потенциале -70 мВ и переходит на +30 мВ для 300 мс. Все следы записывались с частотой 1000 Гц с помощью высокоскоростной ПЗС-камеры. Следы были записаны с использованием ∼400 нм (следы в свете зеленый) или ∼488 нм (темно-зеленые следы) свет возбуждения от Светодиодный источник света. Интенсивность света на плоскости образца для обеих длин волн была доведена до 8,5 мВт/мм 2 . Все следы являются одиночными испытаниями и нефильтрованное с отбеливанием, удаленным путем вычитания двойной экспоненты соответствовать. (A) Деполяризационные изменения мембранного потенциала вызывают либо увеличение или уменьшение интенсивности флуоресценции в Ecliptic pHluorin ArcLight (S249) в зависимости от используемой длины волны возбуждающего света, ~400 и ∼488 нм соответственно.Super Ecliptic pHluorin на основе GFP GEVI не показывают изменения флуоресценции, зависящего от деполяризации, когда ~400 используется возбуждающий свет нм. (B) Super Ecliptic pHluorin ArcLight (S249) и (C) Super Ecliptic pHluorin ArcLight (Q239). (Г) Арклайт (A389 A390), (E) ArcLight (S307 A389 A390) и Марина на (F) выставке значительная чувствительность к напряжению, зависящая от деполяризации, только при освещается возбуждающим светом с длиной волны ∼488 нм.

    Во всех «осветляющих» вариантах ArcLight (ArcLight A389 A390 и ArcLight S307 A389 A390), независимо от аминокислоты остаток, присутствующий в положении 65 внутри FP (либо серин, либо треонин), изменение интенсивности флуоресценции, зависящее от напряжения, присутствует только при использовании возбуждающего света с длиной волны ∼488 нм (D – F).Поэтому представляется, что для большинство pH-зондов на основе фтора, изменения мембранного потенциала влияют на депротонированную, а не на протонированную форму флуорофора. Возможно, изменение напряжения приводит к перемещению FP по отношению к внешнему фиксированному соседнему заряду (возможно, заряженные головные группы мембраны). Это может изменить ионную среду и, таким образом, выход флуоресценции флуорофора. Однако эти движения, зависящие от напряжения, могут не повлиять на нейтральную форму флуорофор.Единственным исключением является эклиптическая версия pHluorin. ArcLight, в котором транслокация, зависящая от напряжения, возможно приводит к сдвигу флуорофора между двумя состояниями.

    Настоящие исследования показывают, что молекулярные перестройки в домен восприятия напряжения, который сопровождает изменение напряжения на мембране может привести к увеличению или уменьшению выходной флуоресценции присоединенного флуоресцентного белка. Мы обнаружили, что мутации до D389 (147 позиция в eGFP) в ArcLight выдает индикатор с слабый положительный наклон отношения Δ F / Δ V .Кроме того, мы обнаружили, что мутации еще двух амино кислотные остатки в FP, ориентированные внутрь 390 и ориентированные наружу 442, результат GEVI (Марина) с большим «положительным» отклик. Внесенные мутации существенно не изменили константы времени отклика по сравнению с родительским зондом ArcLight. Самый известный вариант Marina (ArcLight A389 A390 V442) способен разрешения потенциалов действия и подпороговых событий в спонтанных активные нейроны млекопитающих. Изменение полярности сигнала является важным первый шаг к производству GEVI с характеристиками сигнал/шум сопоставимы с GCaMP, что позволит более широко использовать их in vivo.

    Методы

    Молекулярная биология и конструирование библиотек мутагенеза

    Все конструкции, использованные в этом исследовании произошли от генетически индикатор закодированного напряжения ArcLight-Q239 (идентификатор GenBank: {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«текст»:»AB183035″,»term_id»:»663«,»term_text»:»AB183035″ }}AB183035, {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»AY533296″,»term_id»:»45479289″,»term_text»:»AY533296″}}AY533296; Плазмида № 36856, Аддджин, Кембридж, Массачусетс). Для улучшения выразительности в клеток млекопитающих последовательность ArcLight Q239 была оптимизирована по кодонам используя предпочтительные кодоны млекопитающих.Для улучшения транспорта мембраны зонда мы заменили остатки 71–91 в CiVSD на последовательность аминокислот (KSRITSEGEYIPLDQIDINV) от сигнала доставки канала Гольджи к плазматической мембране канала Kir2.1. 56 Чтобы предотвратить агрегацию ЭР, Кир 2.1-канальная сигнальная последовательность экспорта ER (FCYENEV) была добавлена ​​в C-конец ArcLight. 57 ArcLight Q239 был слит с последовательностью саморасщепляющегося пептида T2A (GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP) затем следует mCherry с ядерной локализацией.Сайты рестрикции были вставляется между промотором, доменом датчика напряжения, флуоресцентным белковый домен и ядерный белок-метка ( ApaI , KpnI , EcoRI , SphI и NheI соответственно) для помощи в клонировании. Чтобы изучить влияние длины волны возбуждающего света на чувствительность к напряжению, использовались дополнительные зонды: epArcLight (Ecliptic pHluorin, сплавленный с CiVSD в позиции S249) и ArcLight S249 (Super Ecliptic pHluorin слился с CiVSD в положении S249, плазмида № 36855, Addgene).Для нейрональной экспрессии Марины, промотор GEVI CMV был заменен на hСинапсин.

    Целевые мутации аминокислот были введены с помощью набора для направленного мутагенеза QuikChange II XL (Agilent Technologies, Inc., Санта-Клара, Калифорния). Для каждого сайт-направленного мутагенеза библиотека, 96 колоний E. coli были отобраны и кДНК очищенный. Сложность каждой библиотеки была подтверждена секвенированием. 10% отобранных колоний. Мы обнаружили, что выборка из 96 конструкций будет содержать все 20 возможных аминокислот по определенному остатку, и, следовательно, не требует дорогостоящего и трудоемкого секвенирования определить каждую мутацию.Кроме того, в некоторых случаях сайт направлен библиотеки мутагенеза были получены с использованием системы InFusion (Clontech Laboratories, Inc., Маунтин-Вью, Калифорния). Мы обнаружили, что с этой системой выборка из 48 конструкций будет содержать все 20 возможных аминокислот по конкретному остатку. После функционального скрининга на полуавтоматическом платформе были секвенированы наиболее перспективные конструкции из каждого раунда и лучшие из них использовались в качестве шаблонов в будущих циклах библиотечного производства.

    Культура клеток

    Данное исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями в Руководстве по уходу и использованию лабораторных Животные Национального института здоровья.Протокол был утвержден Комитетом по уходу и использованию животных Pierce. Клетки HEK 293 (AATC, Манассас, штат Вирджиния) хранились в модифицированном Дульбекко Игле. среда (DMEM, с высоким содержанием глюкозы; Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) с добавками с 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури). Для функционального тестирования на платформе полуавтоматического скрининга зонды были экспрессированы в клеточной линии HEK со спонтанным пиком (любезный подарок от Доктор Адам Коэн из Гарвардского университета). 41 Клетки культивировали в среде DMEM/F12, 10% FBS, 1% пенициллин (100 ЕД/мл), стрептомицин (100 мкг/мл), генетицин (500 мкг/мл) и пуромицин (2 мкг/мл) (Sigma-Aldrich).Корковые нейроны были выделены из Эмбрионы мышей E16, поддерживаемые в нейробазальной среде с 0,5 мМ Glutamax-I и 1 мл добавки B-27 (Invitrogen) на 50 мл культуры Средняя. Во всех случаях клетки высевали либо на стеклянное дно 96-луночного черные чашки (Cellvis, Mountain View, CA) или на покровных стеклах 12 мм (Carolina Biological, Берлингтон, Северная Каролина), покрытые гидробромидом поли-d-лизина (Сигма-Олдрич). Культуры содержали во влажном инкубаторе. при 37 °C в среде с 5% CO2. Транзиторная трансфекция конструкций было достигнуто за счет использования половины рекомендуемого производителем количество ДНК (0.1 мкг на 96 лунок или 0,4 мкг на 12 мм покровное стекло в 24-луночной чашке) и Lipofectamine2000 (0,25 мкл на 96-луночный или 1 мкл на 24-луночный; Инвитроген).

    Функциональный Тестирование потенциальных датчиков

    Изготавливается по индивидуальному заказу полуавтоматическая платформа для скрининга была построена на основе Nikon Eclipse Инвертированный микроскоп Ti-E с системой Perfect Focus System и с объективом Nikon Plan Apo 20x 0,75 NA (Nikon, Токио, Япония) и система светодиодного освещения pE-300white CoolLED (CoolLED, Ltd., Андовер, Ю.К.) источник света. Камера визуализации, изготовленная по индивидуальному заказу был прикреплен к моторизованному этапу Prior Proscan II (Prior Scientific, Inc., Рокленд, Массачусетс) и поддерживали постоянную температуру (37 °C) и влажность пластин во время экспериментов. Все поезда изображений были собраны с помощью камеры Hamamatsu ORCA Flash 4.0 sCMOS (Hamamatsu, Япония) в частота кадров 50 или 100 Гц. Для конструкций на основе ArcLight (GFP) мы использовали фильтр возбуждения 472/30 нм, дихроичное зеркало 495 нм и эмиссионный фильтр 520/35 нм (Semrock, Rochester, NY).Для ядерной локализованную визуализацию mCherry мы использовали фильтр возбуждения 560/40 нм, Дихроичное зеркало 585 нм и эмиссионный фильтр 630/75 нм (Chroma Technologies Corp., Беллоуз-Фолс, штат Вирджиния). Для полевой стимуляции каждой отдельной скважины мы использовали изготовленный на заказ полевой электрод и приводную систему, прикрепленную на крышу камеры визуализации. Электростимуляция, визуализация рабочий процесс и обнаружение сигналов контролировались с помощью пользовательского приложения написано в LabView (National Instruments, Inc., Остин, Техас). Для сотового обнаружения, было собрано и проанализировано 16 изображений забоя скважины с помощью алгоритма идентификации клеток, который количественно определял флуоресценцию интенсивность ядерного локализованного mCherry.Четыре поля с наибольшим количество клеток затем выбиралось программой и использовалось для анализа. Для обнаружения сигнала была собрана серия изображений со скоростью 100 кадров в секунду. из предварительно выбранных полей представлений с использованием набора фильтров GFP. В течение сбор каждой серии изображений, фиксированный образец электростимуляции был применен к скважине. Эта процедура повторялась до тех пор, пока временные ряды изображения были записаны из всех 96 лунок. Интересующий регион (ROI) маска для каждой ячейки в пределах поля зрения создается пороговым значением алгоритм, примененный к каналу mCherry.«клеточная маска» был создан путем увеличения каждой из ядерных функций mCherry. А Трассировка средней интенсивности для каждой ячейки создается из временного ряда изображения, записанные с использованием набора фильтров GFP. Величина флуоресценции сигнал в каждой клетке определяли количественно (Δ F / F ), и оценивали различные значения производительности конструкции. ранжировать размер сигнала конкретной конструкции. Отдельные ячейки экспрессия одной и той же конструкции показала большие различия во флуоресценции амплитуды отклика.Мы сочли необходимым проверить каждую конструкцию по крайней мере на четырех отдельных пластинах, чтобы получить точную картину его представление. Мы также обнаружили, что максимальная амплитуда отклика на клеток и лунок был наиболее надежным индикатором конкретных конструкций производительность в последующих экспериментах с патч-клампами. значения для интенсивность света в состоянии покоя клеток НЕК, экспрессирующих GEVI ArcLight или Марина были получены из трасс средней интенсивности, записанных с использованием Фильтр GFP устанавливают в моменты времени, предшествующие стимуляции напряжением.Для каждого ячейке, значение интенсивности света в состоянии покоя является средним по трем кадрам.

    Цельноклеточный заплаточный зажим Электрофизиология

    Микроэлектрод записи проводились в перфузионной камере с температурой ванны поддерживается на уровне 33–35 ° C с помощью контроллера с обратной связью по температуре (Warner Instruments, Хамден, Коннектикут). Раствор для ванны содержал: 129 мМ NaCl, 4 мМ KCl, 1 мМ CaCl2, 1 мМ MgCl2, 10 мМ d-глюкозы, и 10 мМ HEPES, pH 7,4, и доводили до 310 мОсм с помощью сахарозы. Мы использовали стеклянную накладную пипетку 3–5 МОм (капиллярную трубку с 1.5/0,75 мм OD/ID-World Precision Instruments, Сарасота, Флорида), что натягивали с помощью съемника микропипеток типа P-97 Flaming/Brown (Sutter Инструментальная компания, Новато, C). Для записей патчей целых клеток HEK293, раствор пипетки содержал 125 мМ К-глюконата, 8 мМ NaCl, 0,6 мМ MgCl2, 0,1 мМ CaCl2, 1 мМ EGTA, 4 мМ Mg-ATP, 0,4 Na-GTP и 10 мМ HEPES, рН 7,2 и доведен до ~290 мОсм. Записи с зажимом напряжения в цельноклеточной конфигурации выполняли с помощью MultiClamp 700B. усилитель (Molecular Devices, LLC, Саннивейл, Калифорния) с удерживающим потенциалом −70 мВ.Спонтанная активность культивируемых корковых нейронов был записан в режиме фиксации тока без удержания подачи тока. Пипеточный раствор для регистрации нейронов содержал: 130 мМ K-глюконата, 10 мМ KCl, 4 мМ Mg-АТФ, 0,3 мМ Na2-GTP, 10 мМ HEPES и 10 мМ Na-фосфокреатин, рН 7,3 и доведен до ~310 мОсм. Визуализация была выполнена на прямой микроскоп Olympus BX61WI, использующий LUMFL 60× NA 1,10 или водоиммерсионный объектив LUMPlan FL 40× N.A. 0,80 (Олимп, Уолтем, Массачусетс). В экспериментах с лазерным светом все производные от ArcLight конструкции возбуждали лазером 488 нм мощностью 50 мВт (DL488-050, CrystaLaser, Рино, Невада), с использованием дихроичного зеркала 495 нм и эмиссионного фильтра 520/35 нм. (Семрок).Свет возбуждения, измеренный на препарате, составлял 18 мВт/мм 2 и регулировался для каждой записи с использованием непрерывного кругового фильтр нейтральной плотности (ThorLabs, Inc., Ньютон, Нью-Джерси) до минимума требуется для записи оптических сигналов. Для экспериментов, в которых конструкции были возбуждены светом с длиной волны 400 или 488 нм, мы использовали свет SOLA. Светодиодный источник света двигателя (Lumencor, Inc., Бивертон, Орегон). Возбуждение свет, измеренный на препарате, составил 8,5 мВт/мм 2 . Для возбуждения при 400 нм использовали фильтр возбуждения ET405/40 нм, дихроичный T495lprx нм зеркало и эмиссионный фильтр 525/50 нм (Chroma Technologies Corp.). Для экспериментов с возбуждением светом 488 нм мы использовали 469/35 нм. фильтр возбуждения, дихроичное зеркало 497 нм и эмиссионный фильтр 525/39 нм (Семрок). Объективное изображение проецировалось на 80× 80-пиксельный чип камеры НейроПЗС-СМ, управляемый программным обеспечением НейроПлекс (Redshirt Imaging, Декейтер, Джорджия). Для уменьшения изображения мы использовали либо зум-система Optem A45731 0,13, либо крепление Optem C-to-C 25-70-54 0,383 (Qioptiq LINOS, Уолтем, Массачусетс). Изображения всех типов клеток были записывается с частотой кадров 125, 500 или 1000 Гц и изображается оптическим трассы были простыми пространственными средними значениями интенсивности всех пикселей в пределах область интереса (ROI), с сигналами, обработанными как ранее сообщил 10,58 с двойной экспоненциальной аппроксимацией/вычитанием используется для компенсации быстрого и медленного фотообесцвечивания.Все следы одиночные испытания. SNR рассчитывали как максимальную реакцию флуоресценции. к потенциалу действия (как определено записью пэтч-кламп), разделенному по SD базовой флуоресценции. Изначально мы использовали НейроПлекс. программное обеспечение (RedShirtImaging, GA) для просмотра последовательностей изображений и вывода оптические и электрофизиологические записи. Данные были далее обработаны и статистически проанализированы с помощью Igor Pro 6 (Wavemetrics, ИЛИ) и Numbers (Apple, Inc., Калифорния).

    Статистический анализ

    Результаты выражены как средние ± SEM, как указано в подписях к рисункам.Статистическая значимость оценивали с помощью теста Стьюдента t с использованием Программное обеспечение IgorPro (Wavemetrics, OR).

    Границы | Дифференциация пациентов с сердечной недостаточностью по соотношению масштабных показателей интервалов между сокращениями сердца

    Введение

    Реальный жизненный опыт предупреждает нас о том, что пациенты не имеют одинакового клинического ответа на один и тот же режим лечения и что традиционно принятые клинические параметры не являются достаточно хорошими предикторами успеха проводимой терапии.Это также относится к различным направлениям лечения сердечной недостаточности (СН). Например, несмотря на наличие передовых методов визуализации и строгих клинических, эхокардиографических и электрокардиографических критериев для отбора пациентов с СН и показаний к имплантации устройства сердечной ресинхронизирующей терапии, до сих пор у 20–40% этих пациентов нет положительного ответа на это терапии (Dhesi et al., 2017). Следовательно, в этой области необходимо найти новые способы разделения пациентов с СН с целью определения группы из них, которые получат наибольшую пользу от сердечной ресинхронизирующей терапии.

    Как собственная частота сердечных сокращений, так и ее модуляция в первую очередь определяются изменениями вегетативного тонуса. Вегетативным тонусом называется общая скорость активности вегетативной нервной системы (ВНС), и считается, что он относится к ее длительной активности. Принято считать, что измерения линейных переменных во временной и частотной областях вариабельности сердечного ритма (ВСР) являются простыми и практичными инструментами для оценки вегетативной функции (Akselrod et al., 1981; Task Force of the ESC and the NASPE, 1996).Однако внедрение методов, основанных на нелинейной динамике, для анализа ВСР продемонстрировало новое взаимодополняющее понимание динамической и структурной природы сигналов ВСР (Eke et al., 2002, 2012; Sassi et al., 2015; Platiša et al., 2016). ). Поскольку несколько механизмов регуляции сердечного ритма действуют в разных временных масштабах и демонстрируют масштабирование, классические методы линейного анализа сигналов часто не подходят для количественной оценки сложного состава ВСР, который далек от простой периодичности. Одной из представленных групп нелинейных мер при количественной оценке сложной физиологической динамики является группа фрактальных мер, которые используются для оценки самоаффинности колебаний сердечного ритма в нескольких временных масштабах.Фрактальная организация динамики здорового синусового ритма представляет собой сложный результат линейных и нелинейных процессов, обычно обладающих нестационарными свойствами. Долгосрочные свойства масштабирования временных рядов между циклами были впервые количественно определены масштабным показателем ( β ) как наклон линии регрессии отношения мощности к частоте на логарифмическом графике (Kobayashi and Musha, 1982; Saul et al. , 1987). Как правило, показатель масштабирования по степенному закону обычно рассчитывается в частотной области как β или во временной области как показатель Херста ( H ) (Bassingthwaighte et al., 1994; Эке и др., 2000). Метод анализа флуктуаций без тренда (DFA), основанный на модифицированном среднеквадратичном анализе случайного блуждания, был предложен для оценки внутренних корреляционных свойств сложной сердечной системы, где показатель масштабирования ( α ), равный примерно 1, указывает на фракталоподобность. поведение здоровой динамики сердечного ритма (Peng et al., 1995). Полученный показатель аналогичен показателю Херста, за исключением того, что DFA также может применяться к нестационарным сигналам. С помощью этого метода наличие корреляций в колебаниях интервалов сердечных сокращений можно количественно определить с помощью краткосрочных и долгосрочных масштабных показателей ( α 1 и α 2 ) в двух различных линейных областях, которые определяют диапазон свойства краткосрочной и долгосрочной корреляции.

    Помимо монофрактальной сложности, мультифрактальный анализ, введенный Ivanov et al. (1999) открыли новую информацию о физиологической сложности сигналов ВСР. Мультифрактальная сложность возникает из-за большого количества локальных скейлинговых показателей, физиологическую подоплеку которых объясняли участием сопряженных каскадов обратных связей в здоровой сердечной системе. Мор, Амарал и др. (2001) показали значительное влияние парасимпатического контроля на мультифрактальные свойства ВСР, где введение атропина приводило к заметной потере мультифрактальности.Снижение мультифрактальности выявлено и при патологии, у больных с застойной СН (Иванов и др., 1999). Кроме того, Сильва и соавт. (2014) обнаружили, что потеря мультифрактальности может указывать на нарушение фракции выброса левого желудочка (ФВЛЖ) у пациентов, перенесших острый инфаркт миокарда. Одна из более поздних работ Иванова и соавт. (2009) показали, что физиологические или физические системы с похожим 1/ f масштабным поведением могут различаться по разным уровням сложности, которые зависят от природы механизмов контроля.Необходимость разработки новых методов обнаружения сети между отдельными системами органов, а также между сетью связанных механизмов контроля в ответ на изменения в (пато)физиологических условиях была признана в предложенной междисциплинарной области, известной как сетевая физиология (Lin и др., 2016; Иванов и др., 2017). Эта новая область фокусируется на понимании физиологических функций с помощью новой теоретической основы и аналитического формализма.

    Фрактальный взгляд на физиологию стал основой для понимания и управления физиологическими сетями, в которых существовали как гомеостатические, так и аллометрические механизмы контроля (West, 2009).Гомеостатический контроль имеет характер отрицательной обратной связи, которая является локальной и быстрой, в то время как аллометрический контроль может учитывать дальнодействующие взаимодействия в сложных явлениях (West, 2010). Поэтому в последнее время при моделировании динамики и управления сложными физиологическими явлениями все чаще применяется дробное исчисление (Богдан и др., 2013). Кроме того, были предприняты попытки реконструировать сеть между физиологическими процессами, когда некоторые физиологические сигналы еще не наблюдаются, но зафиксировать их дробное поведение с помощью производных дробного порядка (Gupta et al., 2018).

    В этом исследовании мы проанализировали гетерогенность пациентов с СН с помощью различных методов анализа ВСР. Более того, мы изучили потенциал соотношения краткосрочных и долгосрочных показателей масштабирования для дифференциации подгрупп пациентов с СН с различными свойствами краткосрочной и долгосрочной корреляции. Мы также рассчитали стандартные линейные показатели ВСР с двойной целью. Во-первых, чтобы показать, что наши данные согласуются с ранее опубликованными результатами (их снижение и изменения у пациентов с СН), а во-вторых, чтобы помочь нам выявить физиологическую подоплеку полученных результатов.

    Материалы и методы

    Субъекты

    Группу больных СН составили 46 больных (девять женщин) со средним возрастом 59 ± 2 года (диапазон 37–78 лет). У всех пациентов была СН со сниженной ФВ ЛЖ, в среднем ниже 30%. Все они имели синусовый ритм без каких-либо наджелудочковых или желудочковых нарушений ритма, включая наджелудочковые и желудочковые экстрасистолы. Большинство из них относились к функциональному классу NYHA II (36 пациентов), а 10 пациентов имели худшую функциональную способность (NYHA III).Большинство пациентов с СН в этом исследовании получали оптимальную терапию СН, включая β-блокаторы, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) и блокаторы альдостерона. К больным всегда применялся индивидуальный терапевтический подход, а это означает, что пациенты получали не только рекомендованные в методических рекомендациях, но и максимально переносимые дозы препаратов, и редко, при наличии определенных противопоказаний, отменяли некоторые из ранее упомянутой группы препаратов. остался вне терапии.Контрольную группу здоровых людей составили 35 добровольцев (17 женщин) со средним возрастом 44 ± 2 года (от 35 до 59 лет). Все испытуемые были некурящими, без истории болезни. Этический комитет медицинского факультета Белградского университета одобрил это исследование (Ref. Numb. 29/III-5).

    Экспериментальный протокол и сбор данных

    Эксперименты проводились утром между 7:00 и 10:00 в тихой обстановке в Центре кардиостимуляторов Клинического центра Сербии и в Лаборатории биосигналов Института биофизики медицинского факультета Белградского университета.Регистрировали данные 20-минутной электрокардиограммы (ЭКГ) и дыхательных сигналов с частотой дискретизации 1 кГц с использованием программного обеспечения Biopac и AcqKnowledge 3.9.1 (BIOPAC System, Inc., Санта-Барбара, Калифорния, США). Данные ЭКГ собирали с помощью модуля усилителя электрокардиограммы ECG 100C. Использовалась классическая одноканальная ЭКГ для измерения отведения I на основе трех электродов, размещенных на левом и правом плече и на правой ноге. Модуль усилителя респираторной пневмограммы RSP 100C с датчиком TSD 201, прикрепленным к ремню (регулируемый нейлоновый ремешок), использовался для измерения расширения и сокращения брюшной полости.Датчик располагали на животе в точке минимальной окружности (максимальный выдох). Перед измерением испытуемые были расслаблены, лежали на спине и дышали с частотой спонтанного дыхания. Интервалы между ударами (RR) и интервалы между вдохами были извлечены из записанных сигналов с использованием инструмента Pick Peaks из Origin 6.0 (Microcal Origin, Нортгемптон, Массачусетс, США). Частота дыхания (ЧД) была получена как величина, обратная среднему интервалу между вдохами.

    Анализ ВСР во временной области

    Несколько стандартных параметров ВСР во временной области были определены из временных рядов интервалов RR с помощью нашей программы Matlab: (1) стандартное отклонение интервалов RR (SDNN), (2) среднеквадратическая разница между последовательными интервалами RR и (3) ) процент интервалов RR, которые были длиннее более чем на 50 мс, чем следующий за ним интервал RR (pNN50) (Task Force of the ESC and the NASPE, 1996).

    Анализ в частотной области

    Анализ вариабельности сердечного ритма в частотной области был выполнен с использованием программы Origin 6.0 (Microcal Origin, Нортгемптон, Массачусетс, США) (Platiša and Gal, 2006; Kapidžić et al., 2014). Ряды интервалов RR были повторно отобраны с использованием среднего значения RR для каждого субъекта. Плотности спектра мощности были получены с использованием БПФ с окном Ханнинга (Microcal Origin, Нортгемптон, Массачусетс, США). Абсолютные значения спектральных составляющих определялись путем интегрирования спектра мощности в диапазоне полной мощности (TP, 0.0033–0,4 Гц), очень низкой частоты (VLF, 0,0033–0,04 Гц), низкой частоты (LF, 0,04–0,15 Гц) и высокой частоты (HF, 0,15–0,4 Гц) (Целевая группа ESC и NASPE, 1996 г.). ). Сила вариабельности RR в диапазоне VLF связана с долговременными механизмами регуляции, связанными с терморегуляцией, ренин-ангиотензиновой системой и другими гуморальными факторами (Task Force of the ESC and the NASPE, 1996). Физиологическая интерпретация НЧ-спектральной составляющей до сих пор вызывает споры, поскольку в этом показателе участвуют как симпатические, так и парасимпатические нервы (Task Force of the ESC and the NASPE, 1996; Billman, 2011), в то время как мощность ВЧ-спектра обычно считается маркером парасимпатической активности. активация (Аксельрод и др., 1981; Биллман, 2011). Для достижения нормального распределения данных был взят натуральный логарифм спектральной мощности в абсолютных единицах. Относительные единицы спектральной мощности вычислялись путем деления каждой спектральной составляющей на сумму всех трех спектральных мощностей.

    Анализ колебаний без тренда (DFA)

    Модификация анализа модели случайного блуждания использовалась для количественной оценки фракталоподобных свойств масштабирования временных рядов интервалов RR (Peng et al., 1995). Среднеквадратические флуктуации интегрированных и линейных данных без тренда F ( n ) были измерены в окнах наблюдения различных размеров n , а затем нанесены на график в зависимости от размера окна в логарифмическом масштабе.Поведение по степенному закону было количественно определено как наклон линии линейной регрессии, log F ( n ) ~ α log n . Этот наклон определяется как показатель степени масштабирования α . В этом исследовании функция колебаний без тренда F ( n ) была рассчитана с использованием алгоритма PhysioNet (Goldberger et al., 2000). Краткосрочный показатель масштабирования α 1 вычислялся по размеру окна n = (4–16), а долгосрочный показатель масштабирования α 2 вычислялся по размеру окна n ≥ 16.Показатели масштабирования оценивали со стандартными ошибками, а коэффициент детерминации ( R 2 ) рассчитывали в OriginPro 8 (OriginLab Corporation, Нортгемптон, Массачусетс, США). α < 0,5 характеризует сигнал с антикорреляциями (с более сильными антикорреляциями, когда α ближе к 0). Если α = 0,5, корреляции отсутствуют, и сигнал представляет собой (гауссовский) белый шум; если α ≈ 1 представляет 1/ f шума и если α = 1.5 сигнал представляет собой случайное блуждание (броуновское движение) (Peng et al., 1995; Bashan et al., 2008).

    Асимметрия графика Пуанкаре

    Типичный график Пуанкаре ВСР (PP) представляет собой точечную диаграмму RR i+1 = f ( RR i ). Два стандартных параметра SD1 и SD2, называемые дескрипторами PP, описывают распределение точек по двум диагоналям. Принято считать, что SD1 описывает вариабельность мгновенных интервалов сердечных сокращений и количественно оценивает краткосрочную ВСР, тогда как SD2 количественно определяет долгосрочную ВСР.Коэффициент корреляции Пирсона PP, обозначенный как r , измерял связь между всеми парами ( RR i , RR i +1 ) во временном ряду интервалов RR одного субъекта. Помимо превосходных возможностей визуализации и количественной оценки краткосрочной и долгосрочной информации о ВСР, стандартная методика PP выявила асимметрию как один из неиспользованных физиологических феноменов у здоровых людей в состоянии покоя (Piskorski and Guzik, 2007). Гузик и др. (2006) расширили стандартный дескриптор SD1 (рассеивание PP по линии идентичности, y = x ) до двух новых более тонких дескрипторов SD1 вверх и SD1 вниз .Вкратце, характер ЧСС при ускорении отличается от характера замедления, т. е. в замедлении вклад точек выше линии тождества ( RR i < RR i +1 ) выше чем у точек под линией ( RR i > RR i +1 ). Они ввели две переменные C вверх и C вниз :

    Кубок=SD1up2SD12     (1)

    Cdown=SD1down2SD12     (2)

    , которые определяют относительный вклад SD 1 вверх и SD 1 вниз в SD1.Анализ PP интервалов RR был выполнен с помощью нашей программы Matlab (The MathWorks Inc., США). Связь между C up ( C down ) и способностью Бауэра к замедлению (ускорению) (Bauer et al., 2006) объясняется в дополнительных материалах.

    Статистика

    Нормальное распределение данных исследовали с помощью критерия Шапиро-Уилка (подходит для небольшого размера выборки до 50 человек). Мы использовали натуральный логарифм спектральных мощностей для получения их нормированных значений.Кластерный анализ K-средних с евклидовой мерой расстояния проводился для непрерывной переменной – отношения показателей масштабирования α 1 / α 2 . Однофакторный дисперсионный анализ применялся для выявления значимой разницы в средних значениях каждой переменной или параметра: (1) между контрольной группой и группой HF; (2) между четырьмя кластерами в группе HF с апостериорным тестом Bonferroni ; и (3) между контролем и каждым кластером HF с помощью теста Bonferroni post hoc .Был применен множественный регрессионный анализ, чтобы определить, какие переменные и параметры предсказывают соотношение показателей масштабирования у пациентов с СН. Статистический анализ был выполнен с использованием пакета IBM Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) версии 19.0. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка. P <0,05 использовали как статистически значимое.

    Результаты

    В таблице 1 представлены клинически значимые данные пациентов с СН и описательные статистические результаты для всех линейных и нелинейных показателей ВСР в здоровой контрольной группе и у пациентов с СН.Можно отметить, что, как и ожидалось, у пациентов с СН статистически значимо снижены значения линейных показателей вегетативного сердечного контроля по сравнению со здоровой контрольной группой. Тем не менее, некоторые количественные показатели свойств ВСР статистически не отличались между группами ( C вверх по и C по сравнению с , а также краткосрочный показатель степени масштабирования α 1 ). Кроме того, у более молодых контрольных субъектов частота сердечных сокращений была выше, чем у пациентов с СН (90–210 p 90–211 < 0.01).

    Таблица 1. Антропометрические данные, клинические параметры, а также линейные и нелинейные параметры интервалов сердечных сокращений у здоровых лиц контрольной группы и пациентов с сердечной недостаточностью.

    С помощью прикладного кластерного анализа мы обнаружили, что соотношение краткосрочных и долгосрочных экспонент масштабирования, α 1 / α 2 , в значительной степени способно дифференцировать четыре кластера пациентов с СН. Все кривые функций флуктуаций без тренда F ( n ), построенные в зависимости от размера сегмента n на логарифмическом графике, представлены на рисунке 1 для здоровых субъектов и на рисунке 2 для четырех групп пациентов с СН.Значения расчетных индексов масштабирования для каждого пациента в каждом кластере группы СН можно найти в таблицах 2–5.

    Рис. 1. Флуктуационные функции F ( n ) без тренда для временных рядов интервалов между биениями (приблизительно N = 1200 отсчетов) в зависимости от размера сегмента n на логарифмическом графике в контрольной группе здоровые субъекты. Пунктирная линия разделяет два диапазона, в которых были определены показатели масштабирования ( n = 16).

    Рис. 2. Флуктуационные функции без тренда F ( n ) для временных рядов интервалов между биениями в зависимости от размера сегмента n на логарифмическом графике; в первом (A) , втором (B) , третьем (C) и четвертом (D) кластерах пациентов с сердечной недостаточностью. Пунктирные линии разделяют два диапазона, в которых были определены показатели масштабирования ( n = 16). Расчетные масштабные показатели с коэффициентом детерминации для каждого пациента в каждом кластере приведены в табл. 2–5.

    Таблица 2. Расчетные значения краткосрочных ( α 1 ) и долгосрочных ( α 2 ) индексов масштабирования в первом кластере пациентов с сердечной недостаточностью.

    Таблица 3. Расчетные значения краткосрочных ( α 1 ) и долгосрочных ( α 2 ) индексов масштабирования во втором кластере пациентов с сердечной недостаточностью.

    Таблица 4. Расчетные значения краткосрочных ( α 1 ) и долгосрочных ( α 2 ) индексов масштабирования в третьем кластере пациентов с сердечной недостаточностью.

    Таблица 5. Расчетные значения краткосрочных ( α 1 ) и долгосрочных ( α 2 ) индексов масштабирования в четвертом кластере пациентов с сердечной недостаточностью.

    В таблице 6 представлены результаты кластерного анализа со средними и стандартными ошибками всех линейных и нелинейных индексов ВСР для каждого кластера. Усредненные значения краткосрочного показателя скейлинга ( α 1 ), долговременного показателя скейлинга ( α 2 ), а также их соотношение для каждого кластера и контрольной группы здоровых лиц представлены на рис. 3. .Видно, что у больных СН со сниженным вегетативным сердечным контролем взаимодействие различных корреляционных свойств сердечного ритма в краткосрочном и долгосрочном масштабах определяет четыре независимые подгруппы. При сравнении кластеров с контрольной группой мы обнаружили, что нет достоверной разницы ни в α 1 , ни в соотношении α 1 / α 2 между контролем и 2-м кластером, в то время как α между контролем и 2-м кластером, а α 2 в контрольной группе было значительно ниже, чем в первых двух кластерах (рис. 3).

    Таблица 6. Сравнение клинических данных, а также линейных и нелинейных измерений ВСР между четырьмя группами пациентов с сердечной недостаточностью.

    Рисунок 3. Средние значения плюс стандартные ошибки краткосрочной экспоненты масштабирования ( α 1 ), долгосрочной экспоненты масштабирования ( α 2 ) и их отношение α 1 1 α 2 в контрольной группе и четырех кластерах пациентов с сердечной недостаточностью. ∗∗ p < 0,01 ( α 1 против α 2 ). Значения краткосрочной экспоненты масштабирования ( α 1 ) значительно различались между контрольной группой и тремя кластерами (1-й, 3-й и 4-й), p <0,01. Значения долгосрочного масштабного показателя ( α 2 ) значительно различались между контрольной группой и двумя кластерами (1-й и 2-й), p <0,01. Соотношение α 1 / α 2 достоверно различалось между контрольной группой и двумя кластерами (1-й и 4-й), p < 0.01, и с тенденцией к статистической значимости с 3-м кластером ( р = 0,07). После сравнения только между кластерами для α 1 мы получили следующие значения: (1-й vs. 2-й, 1-й vs. 3-й и 1-й vs. 4-й, p ≤ 0,01). Для α 2 мы получили: (1-е против 4-го, p < 0,01) и (2-е против 3-го, p = 0,06 и для 2-го против 4-го, p < 0.01). Для отношения α 1 / α 2 все сравнения были статистически значимыми ( p < 0,01).

    Сравнение показателей динамики сердечного ритма между пациентами с СН показало, что достоверной разницы между временными показателями ВСР и между абсолютными значениями спектральных составляющих нет. Однако мы обнаружили существенную разницу между подгруппами в относительных значениях спектральных мощностей, а также в их сравнении с контрольной группой (рис. 4).Результаты статистического анализа можно найти в подписи к Рисунку 4. Также нет существенной разницы в отношении возраста, NYHA, ФВ ЛЖ или частоты дыхания между пациентами кластеров (Таблица 6).

    Рис. 4. Распределение относительных спектральных компонент в кластерах определяется отношением показателей масштабирования. Значения даны как среднее плюс стандартные ошибки. Относительная спектральная компонента VLF (rVLF) значительно различалась между контрольной группой и двумя кластерами (2-й и 3-й), p < 0.01. Относительный спектральный компонент LF (rLF) достоверно различался между контрольной группой и тремя кластерами (1-й, 2-й и 3-й), 90–210 p 90–211 < 0,01. Относительная спектральная составляющая HF (rHF) достоверно различалась между контрольной группой и двумя кластерами (1-м и 3-м), p < 0,05, и с тенденцией к статистической значимости с 4-м кластером ( p = 0,08). Значимые и близкие к значимым различия сравнения между кластерами пациентов с сердечной недостаточностью относятся к рВЛЧ (1-е и 3-е место).2-й, p = 0,07 и 1-й против 3-го, p = 0,08), для rLF (1-й против 4-го, p < 0,01 и 2-й против 4-го, p = 0,01), и для rHF (1-й против 2-го, 1-й против 3-го и 1-й против 4-го, p <0,01).

    Дескрипторы графика Пуанкаре SD1 и SD2 показали, что они не смогли разделить пациентов в полученных кластерах, но была тенденция к статистической значимости их отношения SD2/SD1 (таблица 6 и рисунок 5). Переменные асимметрии C вверх и C вниз , определенные по графикам Пуанкаре, свидетельствовали о том, что пациентов с СН можно было разделить только на две подгруппы: одну с доминирующим механизмом замедления и вторую, где не было статистической разницы. между замедлением и ускорением регуляторных механизмов (рис. 6).Мы также обнаружили, что нет статистической разницы между контрольной группой и каждым кластером в C вверх и C вниз .

    Рисунок 5. Репрезентативный пример графика Пуанкаре в первом (A) , втором (B) , третьем (C) и четвертом (D) кластерах пациентов с сердечной недостаточностью с PP для одного здоровая тема. У пациента из первого кластера SD1 = 10,10 мс, SD2 = 12,80 мс, C до = 62.72% и C вниз = 37,28%. У пациента из второго кластера SD1 = 7,50 мс, SD2 = 22,30 мс, C вверх = 47,42% и C вниз = 52,58%. У пациента из третьего кластера SD1 = 4,90 мс, SD2 = 35,30 мс, C вверх = 53,8% и C вниз = 46,2%. У пациента из четвертого кластера SD1 = 3,1 мс, SD2 = 17,7 мс, C вверх = 42,63% и C вниз = 57.37%. Контрольный субъект имел SD1 = 13 мс, SD2 = 32 мс, C вверх = 57,42% и C вниз = 42,76%.

    Рис. 6. Переменные Гузика асимметрии в кластерах больных сердечной недостаточностью. Данные представлены как средние значения плюс стандартные ошибки. ∗∗ p < 0,01, p < 0,05 ( C вверх против C вниз 8 ). Достоверной разницы между контрольной группой и каждым из кластеров с больными сердечной недостаточностью нет.

    Был проведен множественный регрессионный анализ для определения предикторов отношения α 1 / α 2 . Мы обнаружили, что относительная спектральная мощность (rHF и rVLF), LVEF, нормализованная общая спектральная мощность и частота дыхания статистически значимо предсказывали ) = 20,966, р < 0,01, R 2 = 0,724 (табл. 7).Этот результат свидетельствует о сложном физиологическом фоне соотношения скейлинговых показателей, включающих в себя относительный кардиальный блуждающий и центральный вегетативный контроль, механическую эффективность левого желудочка, общую вариабельность, а также модуляторный эффект дыхательного процесса.

    Таблица 7. Множественный регрессионный анализ с предикторами для отношения краткосрочных и долгосрочных экспонент масштабирования.

    Обсуждение

    В последние несколько десятилетий метод DFA, т.е.т. е., краткосрочные и долгосрочные экспоненты масштабирования по отдельности, продемонстрировали больший прогностический потенциал при некоторых сердечных заболеваниях, чем любой параметр из анализа ВСР. В этом исследовании мы обнаружили, что у пациентов с СН краткосрочные и долгосрочные корреляционные свойства, определяемые количественными показателями масштабирования, могут постепенно изменяться в противоположных направлениях. Введен новый параметр — соотношение краткосрочных и долговременных корреляционных свойств колебаний сердечных сокращений, который может быть использован в качестве интегративного показателя регуляторных механизмов сердца у больных с СН.Этот параметр способен дифференцировать четыре кластера, которые невозможно просто классифицировать по некоторым клиническим параметрам (ФВЛЖ или NYHA) или исключительно по линейным и нелинейным показателям вегетативного сердечного контроля.

    Открытие для первого кластера может быть хорошим примером ранее обнаруженных взаимодействий между краткосрочными и долгосрочными механизмами сердечно-сосудистого контроля при определенных патологических состояниях (Hoyer et al., 2007). А именно, Хойер и др. (2007) показали, что сердечно-сосудистая система включает в себя доминирующие краткосрочные и долгосрочные механизмы контроля, которые находятся в оптимальном состоянии в нормальных здоровых условиях.При патологических состояниях, реализующихся при повышенном коллапсе короткой петли обратной связи, выявлена ​​обратная связь между их хаотичностью. Как присущий системе тип перенастройки, краткосрочная случайность увеличилась, а долговременная — уменьшилась. Мы обнаружили, что в первом кластере пациентов с СН отношение скейлинговых показателей имело наименьшее значение; α 1 был значительно снижен и значительно ниже, чем α 2 . Кратковременный масштабирующий показатель показал большую клиническую дискриминацию различных сердечных заболеваний.Снижение α 1 указывает на потерю фрактальной организации интервалов между сокращениями сердца и является хорошим предиктором смертности у постинфарктных пациентов (Huikuri et al., 2000; Tapanainen et al., 2002), специфическим фактором риска для смерти от сердечно-сосудистых заболеваний у пожилых людей и было предложено в качестве надежного предиктора для пациентов с СН (Ho et al., 1997; Mäkikallio et al., 2001). При таком состоянии сердечной системы со сниженной активностью ВНС потеря краткосрочных корреляций в интервалах сердечных сокращений может быть следствием снижения способности сердечно-сосудистой адаптации, тонуса блуждающего нерва (высокий процент rHF) и/или изменений паттерна дыхания, не зависящих от частоты дыхания.Это интересное открытие, потому что имеется много данных о факторах, влияющих на частоту дыхания при СН, таких как воздействие некоторых лекарств, таких как седативные средства, или ФВ ЛЖ, NYHA, некоторые заболевания легких, но мы недостаточно узнали об изменениях в частоте дыхания. модели дыхания (Forleo et al., 2015). В наших более ранних работах мы показали, что фрактальная организация динамики интервалов между сокращениями также может быть изменена некоторыми физиологическими процессами, такими как стояние, упражнения и восстановление (Платиша и Гал, 2008).Кроме того, в нашем исследовании с произвольным дыханием на разных частотах дыхания мы обнаружили уменьшение α 1 с увеличением частоты дыхания (Platiša and Gal, 2010). Перакакис и др. (2009) также показали, что частота дыхания может исказить оценку свойств краткосрочного фрактального масштабирования.

    По сравнению с контролем у пациентов из этого кластера усиливаются фрактальные долговременные корреляции ( α 2 увеличились). В некоторых предыдущих исследованиях сообщалось об изменении поведения фрактального масштабирования с возрастом, когда оба показателя масштабирования увеличивались с возрастом (Ryan et al., 1994; Липсиц, 1995; Пиккуямса и др., 1999). Этот тип корреляций обычно связан с жесткостью регуляторных механизмов с пониженной способностью к контролю. По показателям асимметрии Гузика у этих пациентов также сохранялась асимметрия короткой ВСР, как это наблюдается у здоровых лиц, что указывает на то, что доминирующий механизм замедления имел иной характер, чем механизм/ы ускорения (Guzik et al., 2006). Относительные спектральные мощности очень низкочастотной (rVLF) и высокочастотной (rHF) областей имели близкие процентные значения, и мы предположили, что механизмы регуляции в этом диапазоне частот в равной степени вовлечены в состояние сниженного вегетативного контроля сердца в результате перестройки в механизмы управления системой.

    Во втором кластере мы не обнаружили статистически значимого пересечения между скейлинговыми показателями (фрактальные корреляции очень похожи в обоих диапазонах). Этот кластер очень похож на контрольную группу, но со значительно более высоким показателем долгосрочного масштабирования α 2 . Однако сравнение распределений относительных спектральных мощностей выявило сходную рВЧ, но со значительной реорганизацией рЛЧ и рВЛЧ и с доминированием более медленного механизма регуляции из области очень низких частот у этих больных СН.Более того, асимметрия не достигалась, и картина механизмов кратковременного торможения и ускорения не различалась. Можно лишь предположить, что пациенты из второго кластера находились в состоянии с некоторыми развитыми компенсаторными механизмами регуляции сердечной деятельности.

    Что касается отношения между показателями масштабирования, третий и четвертый кластеры были схожими, т. е. краткосрочный показатель масштабирования значительно выше, чем долгосрочный. По сравнению с контрольной группой α 1 постепенно увеличивались, в то время как α 2 оставались статистически неизменными.Этот тип взаимодействия между кратковременной и долговременной случайностью при HF как патологическом состоянии, также может быть другим типом внутренней перестройки системы, здесь в противоположном направлении по сравнению с первым кластером. В литературе можно найти, что увеличение α 1 обычно связано с отдергиванием блуждающего нерва (Tulppo et al., 2001; Castiglioni et al., 2011), но при этом ВЧ состояниях, вероятно, с сохраненными петлями обратной связи регулирующие механизмы. Тенденция к снижению α 2 в четвертом кластере может быть связана с дисфункцией синусового узла (Shin et al., 2011) или блокада β-рецепторов (Castiglioni et al., 2011). Считается, что сложность колебаний интервалов между сокращениями обусловлена ​​исключительно активностью ВНС, а количественные линейные и нелинейные параметры ВСР являются кванторами модуляторных механизмов ВНС. Однако недавно опубликованные данные показали, что интервалы между сокращениями отражают внутреннюю сложность, происходящую из клеток синоатриального узла (Ponard et al., 2007; Yaniv et al., 2013), которая обычно интегрирована в общую сложность сердечного ритма.Следовательно, Янив и соавт. (2013) пришли к выводу, что ВСР определяется внутренними свойствами клеток синоатриального узла и конкурирующими влияниями двух ветвей вегетативной нервной системы. Благодаря этим выводам важность оценок долгосрочного показателя масштабирования возросла. Хотта и др. (2005) показали, что α 2 является более мощным показателем для прогнозирования сердечной заболеваемости и смертности. В исследовании Shin et al. (2011) долгосрочная экспонента шкалирования была единственным параметром, способным различать различия в динамике сердечного ритма между пациентами с дисфункцией синусового узла.Они пришли к выводу, что уменьшенное значение α 2 является надежной мерой и может быть дополнительным инструментом для улучшения диагностических характеристик при обнаружении дисфункции синусового узла. Вопрос заключается в том, можно ли применить это открытие к нашим пациентам, потому что они в основном лечились высокоселективными бета-блокаторами, тогда как в ранее упомянутом исследовании для блокирования бета-рецепторов использовался неселективный пропранолол. Также у здоровых лиц в значительно меньшей степени такие изменения показателей скейлинга характеризуют как возрастную деградацию интегрированных систем физиологической регуляции (Iyengar et al., 1996). У наших пациентов, вероятно, наблюдалось наложение обоих эффектов, которые более выражены в четвертом кластере. Причина снижения α 2 может быть связана с каким-то другим физиологическим фоном (рис. 2D). У шестого и восьмого пациента даже при статистически подтвержденном линейном регрессионном анализе можно было выявить новый режим масштабирования, который, вероятно, связан с каким-то более медленным механизмом регуляции. К сожалению, нашего временного ряда продолжительностью 20 мин с примерно 2 10 точками не хватило для выявления этого режима у всех пациентов четвертого кластера.

    Можно заметить, что третий и четвертый кластеры различаются по распределению переменных асимметрии. Если в третьем кластере была асимметрия, то в четвертом кластере кратковременная асимметрия перестала существовать. Чтобы прояснить все эти результаты, необходимо провести будущие исследования с более длительными записями и/или фармакологическим признанием.

    Мы также заметили, что даже у более молодых субъектов контрольной группы частота сердечных сокращений была выше, чем у пациентов с сердечной недостаточностью. Если известно, что основной патофизиологической особенностью СН является дисбаланс ВНС с повышенной симпатической активностью, то можно ожидать, что у пациентов с СН частота покоя будет выше, чем у контрольных субъектов (Hori and Okamoto, 2012).Однако все пациенты с СН в этом исследовании получали β-адреноблокаторы, а некоторые из них дополнительно получали антиаритмические препараты, такие как амиодарон или дигоксин. Таким образом, у всех этих больных имело место ятрогенное снижение частоты сердечных сокращений. Также в предыдущем исследовании мы обнаружили, что у пациентов с СН с синусовым ритмом и без желудочковых экстрасистол частота сердечных сокращений значительно ниже, чем у пациентов с СН с аритмиями, как желудочковыми, так и наджелудочковыми (Radovanović et al., 2018). Наконец, следует добавить, что некоторые исследователи предполагают существование избирательности влияния старения на вегетативную функцию у здоровых людей; точнее, они считают, что симпатическая функция остается неизменной с возрастом (Parachar et al., 2016).

    Результаты множественного регрессионного анализа показали, что соотношение масштабных показателей было достоверно предсказано с небольшими изменениями в пяти независимых измерениях, которые определили четыре кластера пациентов с СН. Сравнение значений стандартизованного коэффициента регрессии β показало, что относительные спектральные компоненты, rHF и rVLF, имеют сильную отрицательную связь с отношением масштабных показателей. Относительная сила связи ФВЛЖ и лнТП при этом соотношении была значительно слабее, а при БФ – самой слабой.

    Признанная гетерогенность у пациентов с СН указывает на необходимость внедрения новых подходов в анализ сердечной динамики, которые будут включать взаимодействие с другими сопряженными физиологическими системами (Иванов и др., 2017; Kuhnhold и др., 2017). При этом патологическом состоянии анализ сердечно-мозговых взаимодействий имеет особое значение из-за распознавания и количественной оценки изменений нейропластичности в динамике интеграторов ствола мозга.

    Ограничения

    Существенным ограничением этого исследования является статистически значимая разница в возрасте между здоровыми людьми из контрольной группы и пациентами с СН.Известно, что старение, как и болезни, сопровождается значительными изменениями сердечно-сосудистой системы, как структурными, так и функциональными, хотя есть исследования, указывающие на то, что фрактальная временная организация сердечной динамики не нарушается при здоровом старении (Ferrari, 2002; Schmitt et al., 2002). др., 2009). Достоверно то, что с возрастом повышается симпатическая активность, снижается активность ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, снижается дыхательная синусовая аритмия и ВСР, а также эффективность сердечно-сосудистых и сердечно-легочных рефлексов (Ferrari, 2002; Voss et al., 2015). Некоторые из этих изменений также характерны для HF, и поэтому большой проблемой является отделение изменений, действительно зависящих от HF, от изменений, возникающих при старении. Однако мы не смогли сопоставить возраст наших пациентов с СН и контрольной группы, поскольку было невозможно отобрать лиц без анамнеза, даже без каких-либо факторов риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, среди тех, кто был ближе по возрасту к пациентам с СН. В нашем исследовании пациентам назначали комбинацию препаратов из групп препаратов, рекомендованных для лечения СН.Различия между пациентами в дозах данных препаратов остаются неизбежным ограничением данного исследования, поскольку назначаемая доза препарата определялась сопутствующими заболеваниями, которых у наших пациентов было много.

    После этого исследования необходимо изучить клинический потенциал соотношения краткосрочных и долгосрочных показателей масштабирования, что послужило основанием для разделения пациентов с СН. Мы хотим определить, получают ли пациенты одного из этих кластеров большую пользу от сердечной ресинхронизирующей терапии.Результаты множественного регрессионного анализа, а точнее тот факт, что исследуемое соотношение находится в центре нервных, сердечных и респираторных влияний, подталкивают нас к тому, что этот параметр может способствовать лучшему отбору кандидатов на эту терапию, а также быть параметром на на которые мы будем опираться при оптимизации программирования устройства в последующий период. В будущем это соотношение потенциально может быть использовано алгоритмом устройства, который будет автоматически оптимизировать его работу.Это, несомненно, станет темой нашего следующего исследования.

    Заключение

    Наши результаты показали, что в интегральном кардиальном контроле, определяемом соотношением краткосрочных и долгосрочных коэффициентов масштабирования, помимо нейрокардиального контроля, существенно участвуют механические свойства сердца и модулирующий эффект частоты дыхания. Это соотношение позволяет дифференцировать четыре кластера больных СН с синусовым ритмом, не различающихся по вегетативному контролю сердца, возрасту, ФВ ЛЖ и классу по NYHA.

    Заявление об этике

    Это исследование было проведено в соответствии с рекомендациями Хельсинкской декларации. Протокол был одобрен Этическим комитетом медицинского факультета Белградского университета (Ref. Numb. 29/III-5). Все субъекты дали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией.

    Вклад авторов

    MP, NR и SP разработали концепцию исследования. MP и NR разработали эксперименты, провели исследование, написали рукопись, а также собрали и проанализировали данные.А.К. разработал программу для расчета дескрипторов графика Пуанкаре и переменных асимметрии. ГМ и СП провели диспансеризацию и набор пациентов. Все авторы обсудили, отредактировали и утвердили окончательную и исправленную версию рукописи.

    Заявление о конфликте интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Дополнительный материал

    Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphys.2019.00570/full#supplementary-material

    Сноски

    1. https://physionet.org/physiotools/dfa/

    Каталожные номера

    Аксельрод С., Гордон Д., Убель Ф. А., Шеннон Д. К., Баргер А. С. и Коэн Р. Дж. (1981). Анализ спектра мощности колебаний частоты сердечных сокращений: количественный анализ сердечно-сосудистого контроля от удара к удару. Наука 213, 220–222.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Амарал, Л.А.Н., Иванов П.С., Аояги Н., Хидака И., Томоно С., Голдбергер А.Л. и соавт. (2001). Независимые от поведения особенности сложной динамики сердечных сокращений. Физ. Преподобный Летт. 86:6026.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Башан, А., Барч, Р., Кантельхардт, Дж. В., и Хавлин, С. (2008). Сравнение методов удаления тренда для анализа колебаний. Physica A 387, 5080–5090.

    Академия Google

    Bassingthwaighte, J.B., Liebovitch, L.С. и Уэст, Б.Дж. (1994). Фрактальная физиология. Оксфорд: Издательство Оксфордского университета.

    Академия Google

    Бауэр, А., Кантельхардт, Дж. В., Бартель, П., Шнайдер, Р., Макикаллио, Т., Ульм, К., и соавт. (2006). Способность к замедлению сердечного ритма как предиктор смертности после инфаркта миокарда: когортное исследование. Ланцет 367, 1674–1681.

    Академия Google

    Биллман, GE (2011). Вариабельность сердечного ритма – историческая перспектива. Фронт. Физиол. 2:86. doi: 10.3389/fphys.2011.00086

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Богдан П., Джейн С. и Маркулеску Р. (2013). Контроль вариабельности сердечного ритма с помощью кардиостимулятора: перспектива киберфизической системы. ACM Транс. Встроить вычисл. Сист. 12:50. дои: 10.1145/2435227.2435246

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Castiglioni, P., Parati, G., Di Rienzo, M., Carabalona, ​​R., Cividijan, A., Quintin, L., et al.(2011). Показатели шкалы и частота сердечных сокращений во время вегетативной блокады, оцененные с помощью анализа колебаний без тренда. J. Physiol. 589, 355–369. doi: 10.1113/jphysiol.2010.196428

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Дези, С., Локвуд, Э., и Сандху, Р. К. (2017). Устранение проблем с сердечной ресинхронизирующей терапией у пациентов, не ответивших на лечение. Кан. Дж. Кардиол. 33, 1060–1065. doi: 10.1016/j.cjca.2017.04.007

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эке, А., Herman, P., Bassingthwaighte, J., Raymond, G., Percival, D.B., Cannon, M.J., et al. (2000). Физиологические временные ряды: отличие фрактальных шумов от движений. Пфлюг. Арка 439, 403–415. doi: 10.107/s0042495

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эке А., Герман П., Кочиш Л. и Козак Л. Р. (2002). Фрактальная характеристика сложности временных физиологических сигналов. Физиол. Изм. 23, Р1–Р38.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Эке, А., Герман П., Санганахалли Б.Г., Хайдер Ф., Мукли П. и Надь З. (2012). Подводные камни фрактального анализа временных рядов: фМРТ BOLD как пример. Фронт. Физиол. 3:417. doi: 10.3389/fphys.2012.00417

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Феррари, Австралия (2002). Модификация сердечно-сосудистой системы с возрастом. утра. Дж. Гериатр. Кардиол. 11, 30–33.

    Академия Google

    Форлео, Г. Б., Сантини, Л., Камполи М., Малаваси М., Скачча А., Меникелли М. и др. (2015). Долгосрочный мониторинг частоты дыхания у пациентов с сердечной недостаточностью: исследование мультипараметрической оценки сердечной недостаточности у пациентов с имплантированным кардиовертер-дефибриллятором (MULTITUDE-HF). Дж. Интерв. Карта. Электрофизиол. 43, 135–144. doi: 10.1007/s10840-015-0007-3

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Goldberger, A.L., Amaral, L.A.N., Glass, L., Hausdorff, J.M., Иванов П.С., Марк Р.Г. и соавт. (2000). PhysioBank, физиоинструментарий и физионет. компоненты нового исследовательского ресурса для сложных физиологических сигналов. Тираж 101, e215–e220.

    Академия Google

    Гупта Г., Пекито С. и Богдан П. (2018). Работа с неизвестными неизвестными: идентификация и выбор минимального восприятия для дробной динамики с неизвестными входными данными. архив

    Академия Google

    Гузик П., Пискорски Ю., Краузе, Т., Выкретович, А., и Высоцкий, Х. (2006). Асимметрия сердечного ритма по графикам Пуанкаре интервалов RR. Биомед. Тех. 51, 272–275.

    Академия Google

    Ho, K.K., Moody, G.B., Peng, C.K., Mietus, J.E., Larson, M.G., Levy, D., et al. (1997). Прогнозирование выживаемости пациентов с сердечной недостаточностью и контрольных лиц с использованием полностью автоматизированных методов получения нелинейных и условных показателей динамики сердечного ритма. Тираж 96, 842–848.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Хотта, Н., Оцука К., Мураками С., Яманака Г., Кубо Ю., Мацуока О. и др. (2005). Фрактальный анализ вариабельности сердечного ритма и смертности у пожилых людей, проживающих в сообществе: продольное исследование долголетия и старения в округе Хоккайдо (LILAC). Биомед. Фармацевт. 59, С45–С48.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Hoyer, D., Frank, B., Götze, C., Stein, P.K., Żebrowski, J., Baranowski, R., et al. (2007). Взаимодействия между краткосрочными и долгосрочными механизмами сердечно-сосудистого контроля. Хаос 17:015110.

    Академия Google

    Huikuri, H.V., Mäkikallio, T.H., Peng, C.K., Goldberger, A.L., Hintze, U., and Moller, M. (2000). Фрактальные корреляционные свойства динамики интервала R-R и смертности у больных с угнетением функции левого желудочка после перенесенной острой инфаркта миокарда. Тираж 101, 47–53.

    Академия Google

    Иванов П. К., Амарал Л. А. Н., Гольдбергер А. Л., Хавлин С., Розенблюм М. Г., Струзик З. и соавт. (1999). Мультифрактальность в динамике сердцебиения человека. Природа 6, 461–465.

    Академия Google

    Иванов, П. К., Лю, К. К. Л., Лин, А., и Барч, Р. П. (2017). «Физиология сети: от нейронной пластичности к взаимодействию сети органов», в Возникающая сложность из-за нелинейности, в физике, инженерии и науках о жизни , под редакцией Г. Мантика, Р. Ступ и С. Страмалья (Cham: Springer), 145 –165.

    Академия Google

    Иванов П.C., Ma, Q.D.Y., Bartsch, R.P., Hausdorff, J.M., Amaral, L.A.N., Schulte-Frohlinde, V., et al. (2009). Уровни сложности масштабно-инвариантных нейронных сигналов. Физ. Ред. E 79:041920.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Айенгар, Н., Пенг, С.-К., Морин, Р., Голдбергер, А.Л., и Липсиц, Л.А. (1996). Возрастные изменения фрактального масштабирования динамики интервалов между сокращениями сердца. утра. Дж. Физиол. 271, Р1078–Р1084.

    Академия Google

    Капиджич, А., Платиша М.М., Бойич Т. и Калаузи А. (2014). Нелинейные свойства сердечного ритма и дыхательного сигнала при стимулированном дыхании у здоровых лиц молодого и среднего возраста. Мед. англ. физ. 36, 1577–1584. doi: 10.1016/j.medengphy.2014.08.007

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Кобаяши М. и Муша Т. (1982). 1/f колебание периода сердечных сокращений. IEEE Trans. Биомед. англ. 29, 456–457.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Кунхольд, А., Шуман А., Барч Р., Убрих Р., Бартель П., Шмидт Г. и соавт. (2017). Количественная синхронизация сердечно-дыхательной фазы — сравнение пяти методов с использованием ЭКГ пациентов, перенесших инфаркт. Физиол. Изм. 38, 925–939. дои: 10.1088/1361-6579/aa5dd3

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лин, А., Лю, К.К.Л., Барч, Р., и Иванов, П.К. (2016). Ландшафт корреляции задержек выявляет характерные временные задержки ритмов мозга и сердечных взаимодействий. Фил. Транс. Р. Соц. А 374:20150182. doi: 10.1098/rsta.2015.0182

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Липсиц, Лос-Анджелес (1995). Возрастные изменения «сложности» сердечно-сосудистой динамики: потенциальный маркер предрасположенности к заболеванию. Хаос. 5:1995.

    Академия Google

    Mäkikallio, T.H., Huikuri, H.V., Hintze, U., Videbaek, J., Mitrani, R.D., Castellanos, A., et al. (2001). Фрактальный анализ и измерения вариабельности сердечного ритма во временной и частотной областях как предикторы смертности у пациентов с сердечной недостаточностью. утра. Дж. Кардиол. 87, 178–182.

    Академия Google

    Парашар Р., Амир М., Пахаре А., Рати П. и Чаудхари Л. (2016). Возрастные изменения вегетативных функций. Дж. Клин. Диагн. Рез. 10, CC11–CC15. doi: 10.7860/JCDR/2016/16889.7497

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Пэн, С.-К., Хавлин, С., Стэнли, Х.Е., и Голдбергер, А.Л. (1995). Количественная оценка показателей масштабирования и явлений пересечения в нестационарных временных рядах сердечных сокращений. Хаос 5, 82–87.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Перакакис, П., Тейлор, М., Мартинес-Ньето, Э., Ревити, И., и Вила, Дж. (2009). Смещение частоты дыхания во фрактальном анализе вариабельности сердечного ритма. биол. Физиол. 82, 82–88. doi: 10.1016/j.biopsycho.2009.06.004

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Пиккуямса, С. М., Мякикаллио, Т. Х., Сурандер, Л. Б., Райха, И. Дж., Пуукка, П., Скиття, Дж., и др.(1999). Динамика интервалов между сокращениями сердца от детства до старости. Тираж 100, 393–399.

    Академия Google

    Пискорский Дж. и Гузик П. (2007). Геометрия графика Пуанкаре интервалов RR и его асимметрия у здоровых взрослых. Физиол. Изм. 28, 287–300.

    Академия Google

    Платиша М.М., Бойич Т., Павлович С.У., Радованович Н.Н. и Калаузи А. (2016). Обобщенные графики Пуанкаре — новый метод оценки режимов нейронейрорегуляции сердца при фибрилляции предсердий и у здоровых людей. Фронт. Неврологи. 10:38.

    Академия Google

    Платиша М.М. и Гал В. (2006). Отражение регуляции сердечного ритма на линейных и нелинейных показателях вариабельности сердечного ритма. Физиол. Изм. 27, 145–154.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Платиша М.М. и Гал В. (2010). «Влияние частоты дыхания на краткосрочную экспоненту масштабирования и спектральные мощности серий интервалов RR», в материалах Proceedings of the 6th Conference of the European Study Group on Cardiovascular Oscillations , Berlin.

    Академия Google

    Понард, Дж. Г., Кондратьев, А. А., и Кучера, Дж. П. (2007). Механизмы внутренней изменчивости биений в культурах клеток сердца и модельных сетях кардиостимуляторов. Биофиз. J. 92, 3734–3752.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Радованович Н. Н., Павлович С. У., Милашинович Г., Кирчански Б. и Платиша М. М. (2018). Двунаправленные кардиореспираторные взаимодействия при сердечной недостаточности. Фронт. Физиол. 9:165.doi: 10.3389/fphys.2018.00165

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Райан С.М., Голдбергер А.Л., Пинкус С.М., Миетус Дж. и Липсиц Л.А. (1994). Гендерные и возрастные различия в динамике сердечного ритма: женщины сложнее мужчин? Дж. Ам. Сб. Кардиол. 24, 17:00–17:07.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Сасси Р., Черутти С., Ломбарди Ф., Малик М., Хуйкури Х., Пэн С.-К. и др. (2015). Достижения в области анализа сигналов вариабельности сердечного ритма: совместное заявление рабочей группы ESC по электронной кардиологии и Европейской ассоциации сердечного ритма, одобренное Азиатско-Тихоокеанским обществом сердечного ритма. Европас 17, 1341–1353. doi: 10.1093/europace/euv015

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сол, Дж. П., Альбрехт, П., Бергер, Р. Д., и Коэн, Р. Дж. (1987). Анализ долгосрочной вариабельности сердечного ритма: методы, масштабирование 1/f и последствия. Вычисл. Кардиол. 14, 419–422.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Шмитт, Д. Т., Штейн, П. К., и Иванов, П. К. (2009). Модель стратификации статических и масштабно-инвариантных динамических показателей колебаний сердечного ритма на разных стадиях сна у молодых и пожилых людей. IEEE Trans. Биомед. англ. 56, 1564–1573. doi: 10.1109/TBME.2009.2014819

    Резюме PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Шин, Д.Г., Ли, С.Х., Йи, С.Х., Ю, К.С., Хонг, Г.Р., Ким, У., и др. (2011). Разбивка показателя среднесрочного фрактального масштабирования при дисфункции синусового узла. Обр. J. 75, 2775–2780.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Сильва, Ф. М. Х. С. П., Сильва Филью, А. С., Кресенсио, Дж. С., Папа В. и Младший Л. Г. (2014). Потеря мультифрактальности как свидетельство нарушения фракции выброса левого желудочка у больных, перенесших острый инфаркт миокарда. Вычисл. Кардиол. 41, 413–416.

    Академия Google

    Tapanainen, J.M., Thomsen, P.E., Køber, L., Torp-Pedersen, C., Mäkikallio, T.H., Still, A.M., et al. (2002). Фрактальный анализ вариабельности сердечного ритма и смертности после острого инфаркта миокарда. утра. Дж. Кардиол. 90, 347–352.

    Академия Google

    Целевая группа ESC и NASPE (1996 г.). Стандарты вариабельности сердечного ритма. евро. Heart J. 17, 354–381.

    Tulppo, M.P., Mäkikallio, T.H., Seppännen, T., Shoemaker, K., Tutungi, E., Hughson, R.L., et al. (2001). Влияние фармакологической адренергической и вагусной модуляции на фрактальную динамику сердечного ритма. клин. Физиол. 21, 515–523.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Восс А., Шредер Р., Хайтманн А., Петерс А. и Перц С. (2015). Кратковременная вариабельность сердечного ритма — влияние пола и возраста у здоровых людей. PLoS One 10:e0118308. doi: 10.1371/journal.pone.0118308

    Резюме PubMed | Полнотекстовая перекрестная ссылка

    West, BJ (2009). «Управление с аллометрической точки зрения», в «Прогресс в управлении моторикой: междисциплинарная перспектива (достижения в области экспериментальной медицины и биологии)» , Vol. 629, изд. Д. Стернад (Нью-Йорк: Springer), 57–82.

    Академия Google

    West, BJ (2010). Фрактальная физиология и дробное исчисление: перспектива. Фронт. Физиол. 14:12. doi: 10.3389/fphys.2010.00012

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Янив Ю., Ляшков А. и Лакатта Э. Г. (2013). Фрактальная сложность вариабельности сердечного ритма за пределами нейротрансмиттеров и вегетативных рецепторов: передача сигналов, присущая клеткам водителя ритма синоатриального узла. Кардиоваскл. фарм. Открытый доступ. 2:111.

    Резюме PubMed | Академия Google

    Лейтмотив Профили исполнителей: Люк Пейнтер, Тамара Платиса, Саша Райшич и Quality Slippers

    ЛЮК ХУДОЖНИК | www.lukepainter.ca

    Restless использует проекцию и 3D-анимацию, чтобы затронуть часто напряженный и утомительный процесс перемещения мебели и создать пространство, которое помещает эти предметы интерьера в виртуальную неопределенность. Посетители номера Restless будут стоять в задней части движущегося грузовика и вглядываться в пространство, видя несколько предметов домашней обстановки и коробок, слегка парящих в воздухе; никогда полностью не соприкасается с землей.

    Пейнтер — художник и педагог, живущий и работающий в Торонто. Среди недавних выставок его работ: Revivalesque в Центре искусств Элора и Revival-esque в галерее Angell в Торонто. Он представлен Bonneau-Samames Art Contemporain в Марселе, Франция.


    ТАМАРА ПЛАТИСА + САСА РАЙШИЧ |
    www.tamaraplatisa.com | www.sasarajsic.com

    103°52’74″N 103°70’41″WE представляет собой сумму долготы и широты Торонто, Канада, и Хельсинки, Финляндия.Платиша будет выступать в Торонто, а Райшич будет находиться в Хельсинки. Они будут участвовать в разговоре по Skype и проецировать изображения друг друга на пустую стену. Они начнут рисовать портреты друг друга до тех пор, пока внешний фактор не помешает им продолжать. Изображения, которые создадут Платиша и Райшич, являются личными и отражают их физическое местоположение, движения в проекции и качество их интернет-соединений. В обмене линиями на стене они сделают неосязаемое осязаемым.

    Платиша и Райшич происходят из страны с бурной историей, границы которой регулярно перекраивались, прежде чем она прекратила свое существование. Они выросли в Югославии на закате социалистической эпохи, во время гражданской войны 1990-х годов. Художники из Торонто со степенью бакалавра искусств в области скульптуры и инсталляции Университета OCAD. В работе исследуется относительность близости и дистанции с точки зрения собственной коммуникации в инсталляционном, перформативном и видеоформате. Совместный дуэт обращается к своим общим материальным и нематериальным личным историям Югославии и несуществованию или исчезновению мест, проживания и, следовательно, дома, вместе пересматривая «повседневность» как пространство, где крах и восстановление происходят одновременно как так и по очереди.


    ПРОИЗВОДСТВО КАЧЕСТВЕННЫХ ТАПОЧЕК | www.qualityslippers.ca

    Бесконечность на ладони — это краткая история мира в хронометрированном перформансе, в котором делается попытка охватить всю человеческую историю в течение 12 часов Scotiabank Nuit Blanche. Шоу откроется в пустоте. К полуночи — проблеск нашей первой жизни на планете, а в 2 часа ночи — появление сложных организмов. Между 2 часами ночи и рассветом мы видим развитие доисторических животных, таких как динозавры, а в последние пятнадцать минут события появляются люди, цивилизации возникают и падают, и нам остается медитировать о мимолетной природе всего этого.Это произведение также будет включать живое выступление и серенаду певца и автора песен из Торонто Джоуи О’Нила.

    Quality Slippers Productions под руководством художественного руководителя Бекки О’Нил создает и производит оригинальные театральные постановки с упором на экспериментальные кукольные формы для взрослой аудитории. Исследуя структуру повествования, нетрадиционное повествование и истории, которые нас связывают, группа стремится реанимировать исторический жанр в новую современную практику. О’Нил получил степень бакалавра искусств в области драматургии в Университете Конкордия и учился у Питера Шумана в легендарном театре «Хлеб и кукла» в Гловере, штат Вермонт.Недавно ее работы в области мягкой скульптуры и коллажей были представлены на первой выставке Visual Fringe в Торонто. Премьера ее новейшей пьесы «Выход, преследуемый медведем» состоялась на фестивале SummerWorks в 2011 году. Прошлые работы также были представлены на Nuit Blanche Montreal, The Art Matters Festival, Pop Montreal, The Montreal Fringe и на Международном фестивале театров игрушек в Нью-Йорке.

    ###

    ЛЕЙТМОТИФ на Facebook [Лейтмотив | Scotiabank Nuit Blanche] LEITMOTIF в твиттере [Leitmotif2011]

    Благодарим Совет искусств Онтарио за поддержку LEITMOTIF

    LEITMOTIF возможен при энергичной совместной поддержке Advantage Car & Truck Rentals – www.преимуществоcarrentals.com

    LEITMOTIF также благодарит за поддержку, которую мы получаем от следующих спонсоров сообщества:

    Advantage Car & Truck Rentals, Напольные покрытия Barton, Belle Optical, Brock Carpet, Capital Espresso, Публичная библиотека города Торонто — отделение Parkdale, Common Sort, Free Radio Berkeley, Future Cinema Lab в Йоркском университете, Gladstone Café, The Gladstone Hotel, Надежда Неон, ООО, Imagine8, Ingrid Mueller Art + Concepts, Mangez, Mascot Café, Misfit Studio, Фонд биеннале в Сан-Паулу, OCADU, PARC, Parkdale Village BIA, Public Butter, Queen West Antique Centre, Queen West Subscape Inc, Rhino, Shop Girls, Studio Brilliante , Инициатива общественного пространства Торонто, The Workroom и энергичное сообщество Parkdale Village.

     

    Ярко-красный флуоресцентный белковый индикатор напряжения, сообщающий об активности нейронов в органотипических срезах мозга отдельные нейроны с высоким пространственным и временным разрешением.По сравнению с зелеными индикаторами напряжения на основе FP, индикатор напряжения на основе FP с ярким красным смещением обладает неотъемлемыми преимуществами более низкой фототоксичности, более низкого аутофлуоресцентного фона и совместимости с возбудимыми синим светом канальными родопсинами. Здесь мы сообщаем о ярко-красном флуоресцентном индикаторе напряжения (флуоресцентный индикатор для визуализации напряжения красного цвета; FlicR1) со свойствами, сравнимыми с лучшими доступными зелеными индикаторами. Для разработки FlicR1 мы использовали направленную эволюцию белка и рациональную инженерию для скрининга библиотек тысяч вариантов.FlicR1 достоверно сообщает об одиночных потенциалах действия (∼3% Δ

    F / F ) и отслеживает электрические колебания напряжения с частотой 100 Гц в диссоциированных нейронах гиппокампа крыс Sprague Dawley в отдельных записях испытаний. Кроме того, FlicR1 можно легко визуализировать с помощью широкопольной флуоресцентной микроскопии. Мы демонстрируем, что FlicR1 можно использовать в сочетании с родопсином канала с синим смещением для полностью оптической электрофизиологии, хотя фотоактивация хромофора FlicR1 синим светом представляет собой проблему для приложений, требующих пространственно перекрывающихся желтых и синих возбуждений.

    Post A Comment

    Ваш адрес email не будет опубликован.