Переписки со шкурами: SLIV.photo — слив фото девушек с переписками и контактами — Вероника Назарова

Содержание

Слив Переписок Вк С Шкурами – Telegraph


>>> ПОДРОБНЕЕ ЖМИТЕ ЗДЕСЬ <<<

Слив Переписок Вк С Шкурами

Фото блондинки в черных чулках с голой писькой

Муж трахает и фотографирует пилотку жены

Трое парней и пьяная баба

Реальное домашнее фото голой жены

Фото изысканной бляди с голой писькой

Шкуры 2020 Фото Порно
Голые Шкуры В Контакте
Пацаны Разводят Шкур
Шкуры Саратова Вк
Порно Шкуры Россия
Шкура Мастурбирует Вк
Слив Шкур Вконтакте
Телеграмм Канал Шкуры Кавказа
Шкуры Москвы Вк Фото
Шкура Повелась На Тачку
Телеграмм Каналы 18 Шкуры
Голая Девушка На Шкуре Медведя
Порно Ебут Пьяную Шкуру
Шкуры Слитые Вк 16
Ебут Пьяную Русскую Шкуру
Слитые Видео Шкур В Вк
Слив Шкур Кавказа Порно
Слив Фото И Видео Шкур Малолеток
Порно Бывших Шкур Вк
Чекни Шкуру Телеграмм
Фото Разведенных Шкур
Po Rzhat Слив Шкур Телеграмм
Пьяную Шкуру Пустили По Кругу
Слив Шкур Малолетки 12
Развод Шкуры Переписка
Трахает Насильно Шкуру
Нетипичная Махачкала Шкуры Пьяные
Шкуры Спб Телеграмм Канал
Порно Молоденькие Русские Шкуры

Шкуры Барнаула Вконтакте
Смотреть Порно Трахают Шкуру
Трахнул Бухую Шкуру
Шкуры Малолетки Телеграмм
Слив Шкур 16 Вк
Слитые Шкуры Телеграм
Телеграмм Порно Шкуры
Русский Не Постановочный Анал Пьяных Шкур
Шкуры Днр Вк
Шкуры Вк 14 Лет
Пьяная Шкура Сосет Хуй
Слив Бывших Шкур Вк
Студентка Шкура Трахается С Парнем В Вк
Замужняя Шкура Порно
Шкуры Новосибирска Телеграмм
Трах Пьяных Шкур
Секс Ебет Шкуру
Рынок Шкур Инстаграм
Слив Шкур Бывших Девушек
Шкура Повелась На Бабки
Шкуры Махачкалы Вк

ВКонтакте – универсальное средство для общения и поиска друзей и одноклассников, которым ежедневно пользуются десятки миллионов человек . Мы хотим, чтобы друзья, однокурсники, одноклассники, соседи и коллеги всегда оставались в контакте . 

ВКонтакте – универсальное средство для общения и поиска друзей и одноклассников, которым ежедневно пользуются десятки миллионов человек . Мы хотим, чтобы друзья, однокурсники, одноклассники, соседи и коллеги всегда оставались в контакте . 

. Шкуры из твоего города запись закреплена . 22 в 17:15 .  с ней можете в конце слива В процессе диалога накидала горячих фоточек .  Молодая и очень сочная малышка Познакомились и общались в вк, очень легкая и уверенная) Сама перевела разговор к теме . . 

ВКонтакте – универсальное средство для общения и поиска друзей и одноклассников, которым ежедневно пользуются десятки миллионов человек . Мы хотим, чтобы друзья, однокурсники, одноклассники, соседи и коллеги всегда оставались в контакте . 

Я думала что в реале такого не бывает, я думала что все переписки фэйки . Как мне теперь с ней общаться, я не знаю . . интересно, что  В универе кто-нибудь сфотографировал бы объявление и все равно запостил бы в вк, а если узнали в универе, то об этом узнают абсолютно все ее . . 

Аналитика телеграм канала ‘Слив шкур (18+)’ — 36379 подписчиков .  ⚠ Слив фото и видео бывших девушек, содержанок, шкур с района и тд . 📲 Большая база приватных и интимных фотографий и видео девушек и женщин не только России и стран СНГ, но и всего мира . 

Регистрация: 13 .06 .11 Сообщений: 1861 . интересно, это все приколы или действительно там только такая гопота? Почему я с бывшей познакомился в аське и у нас девять лет все было охуенно? И мы беседовали о книгах и фильмах, о музыке и обо всем . И я не слал ей свой . . 

Горячий слив из вк .  Но бляя, баба ахуительная, есть стр вк (не удаленная), переписка, интим фотки и интим видео(аж 3 видео) кароче если найдется 10 похотливцев, я сливаю как нех делать <3 Пишите под темой плиз, шобы народ видел . рили скину . 

Переписки .  Слив фото 18+ . Зещено размещение ЦП и жесткой порнографии!  фотки шкуры .  Слив вк . 

Слив школьниц малолеток телеграм, школьницы, шкуры телеграмм, алина фулл, телеграм каналы со сливами 14, 18+ телеграм каналы  Лучшие сливы школьниц малолеток шкур с приват каналов . По вопросам рекламы писать @azimuth447 Слив малолеток, телеграм канал . . 

-12-16 00:14:15 @mam в Картинки с надписями . (18+) СМС-переписка с девушкой, которая смотрела много фильмов для взрослых (11 фото) . почитать прикольное юмор цитаты . 

Давно ищу сливы блогерш, слитые переписки , но не могу найти . Все говорят про слив Карины Акарелян, даже СМН в видео у канала Дымоход сказал про слив её переписок с мамой, но я хз где это искать .  Киньте id или названия . Можно ТГ каналы, группы вк и т . д . 

Слив шкур и стримерш, с фото перепиской и контактами . На сайте представлены слив девушек со всех городов России . Слитые фото и видео блогерш со всего рунета . Сливы содержанок, бывших девушек на любой вкус . Удобное пользование сайтом и фильтр по городам . 

Мы хотим читать чужие сообщения в вк . Поэтому сразу же переходим на страницу с API  Но думаю, суть вы уловили . Позже выложу доработанный вариант кражи токена вк с  UDP 24 .02 .2020 Я не предлагаю услуги по сливу переписок, ко мне не нужно долбиться в телегу! 

Слив шкур . Автор темы Oz_331 . 

Сливы шкур/школьниц . 469 members . 

Девушку очень жестоко развели в переписке в социальной сети . Хотя, если посмотреть с другой стороны, она сама виновата . В наше время нужно быть более порядочной, или, как минимум, аккуратной в подобных ситуациях .
Охотник на шкур . Однажды мы с женой поняли, что наш брак зашёл в тупик и пора расстаться . Детей — нет, оба вполне обеспеченные люди и делёжка имущества не особо . 

HackWhore — Слив фото и видео шкур и малолеток со всех городов . На сайте предоставлены слитые фото и видео шкур , малолеток, бывших девушек с их контактами vk, телефоном .  Новые сливы фото и видео шкур добавляются ежедневно . 

Один парень выкладывал переписки с разводом девушек на секс . Все это оказалось фейком . Так что, не поддавайтесь на подобные разводы, скрины можно легко подделать в любом графическом редакто . 

ВКонтакте – универсальное средство для общения и поиска друзей и одноклассников, которым ежедневно пользуются десятки миллионов человек . Мы хотим, чтобы друзья, однокурсники, одноклассники, соседи и коллеги всегда оставались в контакте . 

ВКонтакте – универсальное средство для общения и поиска друзей и одноклассников, которым ежедневно пользуются десятки миллионов человек . Мы хотим, чтобы друзья, однокурсники, одноклассники, соседи и коллеги всегда оставались в контакте . 

. Шкуры из твоего города запись закреплена . 22 в 17:15 .  с ней можете в конце слива В процессе диалога накидала горячих фоточек .  Молодая и очень сочная малышка Познакомились и общались в вк, очень легкая и уверенная) Сама перевела разговор к теме . . 

ВКонтакте – универсальное средство для общения и поиска друзей и одноклассников, которым ежедневно пользуются десятки миллионов человек . Мы хотим, чтобы друзья, однокурсники, одноклассники, соседи и коллеги всегда оставались в контакте . 

Я думала что в реале такого не бывает, я думала что все переписки фэйки . Как мне теперь с ней общаться, я не знаю . . интересно, что  В универе кто-нибудь сфотографировал бы объявление и все равно запостил бы в вк, а если узнали в универе, то об этом узнают абсолютно все ее . . 

Аналитика телеграм канала ‘Слив шкур (18+)’ — 36379 подписчиков .  ⚠ Слив фото и видео бывших девушек, содержанок, шкур с района и тд . 📲 Большая база приватных и интимных фотографий и видео девушек и женщин не только России и стран СНГ, но и всего мира . 

Регистрация: 13 .06 .11 Сообщений: 1861 . интересно, это все приколы или действительно там только такая гопота? Почему я с бывшей познакомился в аське и у нас девять лет все было охуенно? И мы беседовали о книгах и фильмах, о музыке и обо всем . И я не слал ей свой . . 

Горячий слив из вк .  Но бляя, баба ахуительная, есть стр вк (не удаленная), переписка, интим фотки и интим видео(аж 3 видео) кароче если найдется 10 похотливцев, я сливаю как нех делать <3 Пишите под темой плиз, шобы народ видел . рили скину . 

Переписки .  Слив фото 18+ . Зещено размещение ЦП и жесткой порнографии!  фотки шкуры .  Слив вк . 

Слив школьниц малолеток телеграм, школьницы, шкуры телеграмм, алина фулл, телеграм каналы со сливами 14, 18+ телеграм каналы  Лучшие сливы школьниц малолеток шкур с приват каналов . По вопросам рекламы писать @azimuth447 Слив малолеток, телеграм канал . . 

-12-16 00:14:15 @mam в Картинки с надписями . (18+) СМС-переписка с девушкой, которая смотрела много фильмов для взрослых (11 фото) . почитать прикольное юмор цитаты . 

Давно ищу сливы блогерш, слитые переписки , но не могу найти . Все говорят про слив Карины Акарелян, даже СМН в видео у канала Дымоход сказал про слив её переписок с мамой, но я хз где это искать .  Киньте id или названия . Можно ТГ каналы, группы вк и т . д . 

Слив шкур и стримерш, с фото перепиской и контактами . На сайте представлены слив девушек со всех городов России . Слитые фото и видео блогерш со всего рунета . Сливы содержанок, бывших девушек на любой вкус . Удобное пользование сайтом и фильтр по городам . 

Мы хотим читать чужие сообщения в вк . Поэтому сразу же переходим на страницу с API  Но думаю, суть вы уловили . Позже выложу доработанный вариант кражи токена вк с  UDP 24 .02 .2020 Я не предлагаю услуги по сливу переписок, ко мне не нужно долбиться в телегу! 

Слив шкур . Автор темы Oz_331 . 

Сливы шкур/школьниц . 469 members . 

Девушку очень жестоко развели в переписке в социальной сети . Хотя, если посмотреть с другой стороны, она сама виновата . В наше время нужно быть более порядочной, или, как минимум, аккуратной в подобных ситуациях .
Охотник на шкур . Однажды мы с женой поняли, что наш брак зашёл в тупик и пора расстаться . Детей — нет, оба вполне обеспеченные люди и делёжка имущества не особо . 

HackWhore — Слив фото и видео шкур и малолеток со всех городов . На сайте предоставлены слитые фото и видео шкур , малолеток, бывших девушек с их контактами vk, телефоном .  Новые сливы фото и видео шкур добавляются ежедневно . 

Один парень выкладывал переписки с разводом девушек на секс . Все это оказалось фейком . Так что, не поддавайтесь на подобные разводы, скрины можно легко подделать в любом графическом редакто . 


Крупнейший канал эскорт-услуг заблокировали после жалобы на слив фото и личных данных девушек, но это ничего не меняет

Известный Telegram-канал об эскорт-услугах «Рынок шкур» был заблокирован. В последние годы эта деятельность стала обычным и вполне законным бизнесом, который, впрочем, тесно граничит с проституцией и балансирует на грани правового поля. Эксперты считают, что в 99% случаев соответствующие объявления – не более чем прикрытие для интим-услуг.

На минувшей неделе администрация популярного мессенджера Telegram заблокировала канал «Рынок шкур». Там публиковалась информация о девушках, якобы оказывающих эскорт-услуги, а также о проститутках Москвы и других городов, отзывы, фото, видео, переписки и так далее. На канал было подписано порядка 240 тысяч пользователей. В настоящее время он недоступен — при попытке входа появляется предупреждение: «Этот канал недоступен, так как нарушал правила Telegram».

Известно, что канал был заблокирован вскоре после жалобы девушки, чьи фотографии и личные данные оказались там размещены. Юрист, представляющий ее интересы, обратился в Apple и Telegram, и в итоге «Рынок шкур» прекратил свою работу. К слову, прецеденты блокировки из-за утечки личных данных были в Telegram и ранее: это коснулось каналов, выкладывавших в публичный доступ телефоны и адреса участников протестов в России или распространявших домашние адреса и телефоны судей, прокуроров, журналистов и медиаменеджеров.

Эскорт-разоблачение

Канал «Рынок шкур» начал активно развиваться в конце 2017 года. Его автор заявил, что разоблачает моделей, зарабатывающих путем оказания эскорт-услуг. Он обещал раскрыть имена популярных девушек, задействованных в этой сфере, а также рассказать о них правду и слить доказательства – переписки, фотографии и видео. И такие доказательства действительно там появлялись.

Как удалось выяснить журналистам, владелица канала занимается разоблачением эскортниц, так как ее раздражает аморальное поведение многих молодых девушек, которые приходят в эту сферу за легкими деньгами. Но «Рынок шкур» завоевал огромную популярность и среди тех, кого интересует не собственно эскорт, а вопрос, как найти проститутку. То есть, канал, по сути, напрямую способствовал тому, чтобы предложение нашло свой спрос.

В 2020-м году появилась информация о том, что канал будто бы шантажирует девушек имеющимся на них компроматом, обещая публикацию их фото и данных в «черном списке» проституток и эскортниц. Так, например, в июне Telegram-канал «Медиавойны» рассказал о заявлении в полицию против руководства «Рынка шкур», поданном моделью Мирой Дрогул. Впоследствии оказалось, что претензии есть не только у нее. Девушки утверждали, что канал требовал у них платы за отказ от публикации или удаление компрометирующей их информации.

Среди тех, чьи имена в нелестном свете упоминал «Рынок шкур», известная певица Анна Седокова, чья свадьба с отцом одного из ее детей будто бы сорвалась неспроста, модель Виктория Лопырева, якобы запугивавшая автора постов прокуратурой, бывшая участница шоу «Дом-2» Анастасия Ковалева, о которой написали, что ее брат, появляющийся на фото в соцсетях, на самом деле является ее сыном, а сама она отличается, мягко говоря, легкомысленным поведением, а также огромное количество не столь широко известных персон. По словам владелицы канала, в каких-то случаях интересующую ее информацию получает она сама, так как вращается примерно в тех же кругах, что и девушки, в каких-то – ее друзья, немало историй приходит и от «доброжелателей», и все они, по ее утверждению, проходят тщательную проверку. Она также отмечала, что часто сталкивалась с просьбами опубликовать заказной материал – чтобы испортить чью-то репутацию или, напротив, напомнить публике о той или иной персоне с помощью «черного пиара», но не соглашалась на подобное сотрудничество.

По теме

802

Военные Таджикистана и Киргизии устроили перестрелку на границе. После инцидента очевидцы сняли процесс стягивания к границе военной техники.

Почти как аренда

Уже довольно давно эскорт превратился в обычный бизнес, которым сложно кого-то удивить. Те, кто предлагает такие услуги (чаще всего это девушки, но встречаются и молодые люди), ищут возможность хорошо заработать и обеспечить себе «красивую жизнь». В большинстве случаев эскорт по умолчанию означает и секс-услуги, но не всегда – именно поэтому не всех эскортниц устраивает сравнение с проститутками.

Насколько высоко оплачиваются услуги эскортниц – зависит от уровня девушек. Преимуществами будут яркая внешность, хорошая физическая форма, образованность, знание иностранных языков, знание этикета, умение танцевать и так далее. Поэтому те, кто хочет оставаться востребованными, вынуждены соответствовать довольно высокой планке: это регулярный фитнес и диеты, бьюти-процедуры, пластика, знакомство с актуальными новинками кино, музыки и литературы, а также с тенденциями в бизнесе и политике.

Если говорить о правовом аспекте, эскорт-услуги не выходят за рамки законодательства. Другой вопрос, что едва ли представители этой сферы фиксируют свой доход и платят с него налоги. Но если речь идет о занятии проституцией под видом эскорта, это уже совсем другая – противозаконная – история. Эксперты отмечают, что пока девушка, позиционирующая себя как эскортница, просто сопровождает клиента на мероприятия, она не нарушает закон. Как только она вступает с ним в половую связь, ее действия уже считаются административным правонарушением. А вот организация притона, вовлечение в занятие проституцией и распространение информации о секс-услугах – это уже уголовное дело. Вероятно, именно с последним пунктом и связана блокировка «Рынка шкур» — ведь там появлялась проверенная информация о женщинах, готовых к встречам с обеспеченными клиентами.

Как известно, спрос рождает предложение. Кто же становится клиентами эскортниц, и почему услуги последних остаются востребованными? По мнению экспертов, «профессиональное сопровождение» — это своего рода элемент имиджа, присущий представителям определенного круга, практически аксессуар, который показывает уровень человека, подчеркивая его успешность. Иногда эскортниц привлекают для того, чтобы придать более неформальный тон деловой встрече и так далее. Наконец, бывают мероприятия, на которые не каждый бизнесмен или чиновник будет готов взять с собой жену, но не хочет появляться в одиночестве.

Кроме того, в кругах, где вращаются потребители эскорт-услуг, люди чаще всего имеют высокий доход, но при этом не располагают большим количеством свободного времени. Поэтому упрощенный вариант отношений с противоположным полом играет им на руку.

Тема эскорта активно форсируется в прессе, на телевидении и в сети, но складывается ощущение, что подобные инфоповоды – это пиар, устроенный некими людьми, стоящими за этим бизнесом. Самим девушкам подобная слава отнюдь не на руку – ведь когда-нибудь они, возможно, захотят выйти из игры, а вернуть репутацию будет уже невозможно.

Несмотря на закрытие главного канала об эскорт-услугах, в сети немало ресурсов, которые делают то же самое – даже их названия перекликаются с «Рынком шкур» или вовсе его дублируют. Поэтому, даже если кто-то и лишился хорошо раскрученного рынка продаж, это не станет фатальной потерей. Но и тем, кто пытается бороться с собственной дурной славой с помощью блокировок, это не слишком поможет: все данные переходят с одной площадки на другую, и даже если заплатить за удаление фотографий и личных данных, особой роли это не сыграет — интернет помнит все.

Telegram заблокировал канал об эскортницах «Рынок шкур» — Daily Storm

Администрация мессенджера Telegram заблокировала канал «Рынок шкур», где публиковали информацию о девушках, которые якобы занимаются эскорт-услугами и проституцией. Число подписчиков канала насчитывало почти 240 тысяч. Сейчас он недоступен, при попытке зайти в него система выдает предупреждение: «Этот канал недоступен, так как нарушал правила Telegram». 

Первые записи в Telegram-канале «Рынок шкур» появились в ноябре 2017 года. Автор заявлял, что разоблачает моделей, которые зарабатывают на эскорт-услугах. «Для тех, кто впервые на моем канале. В моих постах вы узнаете, какие популярные девушки промышляют эскортом, и всю правду об их жизни от начала до конца. Фотки, переписки, видео — все это ждет вас прямо здесь», — говорилось в приветствии посетителям.

 

В 2018-м телеканал «360» связался с владелицей канала. Ею оказалась девушка с инициалами Н.Г. Барышня. Она рассказала, что решила заняться темой эскорт-услуг, поскольку ее раздражает огромное количество молодых женщин, забывающих про воспитание и моральные устои. В заблокированном Telegram-канале публиковалась переписка и другие доказательства того, что героини занимаются эскорт-услугами.

 

В 2020-м стала появляться информация о шантаже девушек со стороны канала. Telegram-канал «Медиавойны» в июне сообщал, что модель Мира Дрогул подала заявление в полицию на владельцев канала за вымогательство. Позднее нашлись и другие жертвы. Правоохранители начали расследование. По словам пострадавших, «Рынок шкур» требовал у них деньги за удаление «нелицеприятной информации».

В декабре Daily Storm поговорил с владельцами «сливных» Telegram-каналов о тайной жизни кумиров зумеров. В ходе общения удалось выяснить, что аудиторию видеоблогеров чаще интересует более жесткий контент — «зашквары», доказательства того, что их кумиры — далеко не ангелы. Спрос на грязное белье знаменитостей спровоцировал рост популярности в социальных сетях, и мессенджер Telegram не стал исключением, специализирующихся на сливах компромата на современных звезд: тиктокеров и YouTube-блогеров, Instagram-моделей, героев молодежных телесериалов. Отсутствие цензуры позволяет редакторам таких каналов публиковать то, что оставляют за скобками официальные СМИ: незаблюренные интимные фотографии блогеров, их матерную переписку, где они обсуждают покупку наркотиков.

Дуров заблокировал «Рынок шкур» | Общество

Известный Telegram-канал об эскорт-услугах «Рынок шкур» был заблокирован. В последние годы эта деятельность стала обычным и вполне законным бизнесом, который, впрочем, тесно граничит с проституцией и балансирует на грани правового поля. Эксперты считают, что в 99% случаев соответствующие объявления – не более чем прикрытие для интим-услуг.

На минувшей неделе администрация популярного мессенджера Telegram заблокировала канал «Рынок шкур». Там публиковалась информация о девушках, якобы оказывающих эскорт-услуги, а также о проститутках Москвы и других городов, отзывы, фото, видео, переписки и так далее. На канал было подписано порядка 240 тысяч пользователей. В настоящее время он недоступен — при попытке входа появляется предупреждение: «Этот канал недоступен, так как нарушал правила Telegram».

Известно, что канал был заблокирован вскоре после жалобы девушки, чьи фотографии и личные данные оказались там размещены. Юрист, представляющий ее интересы, обратился в Apple и Telegram, и в итоге «Рынок шкур» прекратил свою работу. К слову, прецеденты блокировки из-за утечки личных данных были в Telegram и ранее: это коснулось каналов, выкладывавших в публичный доступ телефоны и адреса участников протестов в России или распространявших домашние адреса и телефоны судей, прокуроров, журналистов и медиаменеджеров.

Эскорт-разоблачение

Канал «Рынок шкур» начал активно развиваться в конце 2017 года. Его автор заявил, что разоблачает моделей, зарабатывающих путем оказания эскорт-услуг. Он обещал раскрыть имена популярных девушек, задействованных в этой сфере, а также рассказать о них правду и слить доказательства – переписки, фотографии и видео. И такие доказательства действительно там появлялись.

Как удалось выяснить журналистам, владелица канала занимается разоблачением эскортниц, так как ее раздражает аморальное поведение многих молодых девушек, которые приходят в эту сферу за легкими деньгами. Но «Рынок шкур» завоевал огромную популярность и среди тех, кого интересует не собственно эскорт, а вопрос, как найти проститутку. То есть, канал, по сути, напрямую способствовал тому, чтобы предложение нашло свой спрос.

В 2020-м году появилась информация о том, что канал будто бы шантажирует девушек имеющимся на них компроматом, обещая публикацию их фото и данных в «черном списке» проституток и эскортниц. Так, например, в июне Telegram-канал «Медиавойны» рассказал о заявлении в полицию против руководства «Рынка шкур», поданном моделью Мирой Дрогул. Впоследствии оказалось, что претензии есть не только у нее. Девушки утверждали, что канал требовал у них платы за отказ от публикации или удаление компрометирующей их информации.

Среди тех, чьи имена в нелестном свете упоминал «Рынок шкур», известная певица Анна Седокова, чья свадьба с отцом одного из ее детей будто бы сорвалась неспроста, модель Виктория Лопырева, якобы запугивавшая автора постов прокуратурой, бывшая участница шоу «Дом-2» Анастасия Ковалева, о которой написали, что ее брат, появляющийся на фото в соцсетях, на самом деле является ее сыном, а сама она отличается, мягко говоря, легкомысленным поведением, а также огромное количество не столь широко известных персон. По словам владелицы канала, в каких-то случаях интересующую ее информацию получает она сама, так как вращается примерно в тех же кругах, что и девушки, в каких-то – ее друзья, немало историй приходит и от «доброжелателей», и все они, по ее утверждению, проходят тщательную проверку. Она также отмечала, что часто сталкивалась с просьбами опубликовать заказной материал – чтобы испортить чью-то репутацию или, напротив, напомнить публике о той или иной персоне с помощью «черного пиара», но не соглашалась на подобное сотрудничество.

Почти как аренда

Уже довольно давно эскорт превратился в обычный бизнес, которым сложно кого-то удивить. Те, кто предлагает такие услуги (чаще всего это девушки, но встречаются и молодые люди), ищут возможность хорошо заработать и обеспечить себе «красивую жизнь». В большинстве случаев эскорт по умолчанию означает и секс-услуги, но не всегда – именно поэтому не всех эскортниц устраивает сравнение с проститутками.

Насколько высоко оплачиваются услуги эскортниц – зависит от уровня девушек. Преимуществами будут яркая внешность, хорошая физическая форма, образованность, знание иностранных языков, знание этикета, умение танцевать и так далее. Поэтому те, кто хочет оставаться востребованными, вынуждены соответствовать довольно высокой планке: это регулярный фитнес и диеты, бьюти-процедуры, пластика, знакомство с актуальными новинками кино, музыки и литературы, а также с тенденциями в бизнесе и политике.

Если говорить о правовом аспекте, эскорт-услуги не выходят за рамки законодательства. Другой вопрос, что едва ли представители этой сферы фиксируют свой доход и платят с него налоги. Но если речь идет о занятии проституцией под видом эскорта, это уже совсем другая – противозаконная – история. Эксперты отмечают, что пока девушка, позиционирующая себя как эскортница, просто сопровождает клиента на мероприятия, она не нарушает закон. Как только она вступает с ним в половую связь, ее действия уже считаются административным правонарушением. А вот организация притона, вовлечение в занятие проституцией и распространение информации о секс-услугах – это уже уголовное дело. Вероятно, именно с последним пунктом и связана блокировка «Рынка шкур» — ведь там появлялась проверенная информация о женщинах, готовых к встречам с обеспеченными клиентами.

Как известно, спрос рождает предложение. Кто же становится клиентами эскортниц, и почему услуги последних остаются востребованными? По мнению экспертов, «профессиональное сопровождение» — это своего рода элемент имиджа, присущий представителям определенного круга, практически аксессуар, который показывает уровень человека, подчеркивая его успешность. Иногда эскортниц привлекают для того, чтобы придать более неформальный тон деловой встрече и так далее. Наконец, бывают мероприятия, на которые не каждый бизнесмен или чиновник будет готов взять с собой жену, но не хочет появляться в одиночестве.

Кроме того, в кругах, где вращаются потребители эскорт-услуг, люди чаще всего имеют высокий доход, но при этом не располагают большим количеством свободного времени. Поэтому упрощенный вариант отношений с противоположным полом играет им на руку.

Тема эскорта активно форсируется в прессе, на телевидении и в сети, но складывается ощущение, что подобные инфоповоды – это пиар, устроенный некими людьми, стоящими за этим бизнесом. Самим девушкам подобная слава отнюдь не на руку – ведь когда-нибудь они, возможно, захотят выйти из игры, а вернуть репутацию будет уже невозможно.

Несмотря на закрытие главного канала об эскорт-услугах, в сети немало ресурсов, которые делают то же самое – даже их названия перекликаются с «Рынком шкур» или вовсе его дублируют. Поэтому, даже если кто-то и лишился хорошо раскрученного рынка продаж, это не станет фатальной потерей. Но и тем, кто пытается бороться с собственной дурной славой с помощью блокировок, это не слишком поможет: все данные переходят с одной площадки на другую, и даже если заплатить за удаление фотографий и личных данных, особой роли это не сыграет — интернет помнит все.

<!— AddThis Button BEGIN —> <div> <a fb:like:layout=»button_count»></a> <a></a> <a g:plusone:size=»medium»></a> <a></a> </div> <script type=»text/javascript» src=»//s7.addthis.com/js/300/addthis_widget.js#pubid=54027941″></script> <!— AddThis Button END —>

Telegram заблокировал канал об эскортницах «Рынок шкур» — Рамблер/финансы

Администрация мессенджера Telegram заблокировала канал «Рынок шкур», где публиковали информацию о девушках, которые якобы занимаются эскорт-услугами и проституцией. Число подписчиков канала насчитывало почти 240 тысяч. Сейчас он недоступен, при попытке зайти в него система выдает предупреждение: «Этот канал недоступен, так как нарушал правила Telegram». 

Первые записи в Telegram-канале «Рынок шкур» появились в ноябре 2017 года. Автор заявлял, что разоблачает моделей, которые зарабатывают на эскорт-услугах. «Для тех, кто впервые на моем канале. В моих постах вы узнаете, какие популярные девушки промышляют эскортом, и всю правду об их жизни от начала до конца. Фотки, переписки, видео — все это ждет вас прямо здесь», — говорилось в приветствии посетителям.

В 2018-м телеканал «360» связался с владелицей канала. Ею оказалась девушка с инициалами Н.Г. Барышня. Она рассказала, что решила заняться темой эскорт-услуг, поскольку ее раздражает огромное количество молодых женщин, забывающих про воспитание и моральные устои. В заблокированном Telegram-канале публиковалась переписка и другие доказательства того, что героини занимаются эскорт-услугами.

В 2020-м стала появляться информация о шантаже девушек со стороны канала. Telegram-канал «Медиавойны» в июне сообщал, что модель Мира Дрогул подала заявление в полицию на владельцев канала за вымогательство. Позднее нашлись и другие жертвы. Правоохранители начали расследование. По словам пострадавших, «Рынок шкур» требовал у них деньги за удаление «нелицеприятной информации».

В декабре Daily Storm поговорил с владельцами «сливных» Telegram-каналов о тайной жизни кумиров зумеров. В ходе общения удалось выяснить, что аудиторию видеоблогеров чаще интересует более жесткий контент — «зашквары», доказательства того, что их кумиры — далеко не ангелы. Спрос на грязное белье знаменитостей спровоцировал рост популярности в социальных сетях, и мессенджер Telegram не стал исключением, специализирующихся на сливах компромата на современных звезд: тиктокеров и YouTube-блогеров, Instagram-моделей, героев молодежных телесериалов. Отсутствие цензуры позволяет редакторам таких каналов публиковать то, что оставляют за скобками официальные СМИ: незаблюренные интимные фотографии блогеров, их матерную переписку, где они обсуждают покупку наркотиков.

Ранее Telegram заблокировал каналы с личными данными россиян, включая персональную информацию участников протестов, правоохранителей, журналистов и медиаменеджеров. Дуров пояснил, что блокировке каналов предшествовал тщательный анализ обстановки в России.

В начале февраля 2021 года компания Sensor Tower, занимающаяся аналитикой цифровых рынков, опубликовала данные, согласно которым Telegram в январе 2021 года стал самым скачиваемым неигровым приложением в мире, обогнав TikTok и WhatsApp. Количество скачиваний и установок мессенджера достигло отметки 63 миллиона, что почти в четыре раза больше аналогичных показателей в январе 2020-го. Сейчас в Telegram уже 570 миллионов пользователей, а сам мессенджер оценивается более чем в 20 миллиардов долларов.

Дуров заблокировал «Рынок шкур» — Newspot.ru

Известный Telegram-канал об эскорт-услугах «Рынок шкур» был заблокирован. В последние годы эта деятельность стала обычным и вполне законным бизнесом, который, впрочем, тесно граничит с проституцией и балансирует на грани правового поля. Эксперты считают, что в 99% случаев соответствующие объявления – не более чем прикрытие для интим-услуг.

На минувшей неделе администрация популярного мессенджера Telegram заблокировала канал «Рынок шкур». Там публиковалась информация о девушках, якобы оказывающих эскорт-услуги, а также о проститутках Москвы и других городов, отзывы, фото, видео, переписки и так далее. На канал было подписано порядка 240 тысяч пользователей. В настоящее время он недоступен — при попытке входа появляется предупреждение: «Этот канал недоступен, так как нарушал правила Telegram».

Известно, что канал был заблокирован вскоре после жалобы девушки, чьи фотографии и личные данные оказались там размещены. Юрист, представляющий ее интересы, обратился в Apple и Telegram, и в итоге «Рынок шкур» прекратил свою работу. К слову, прецеденты блокировки из-за утечки личных данных были в Telegram и ранее: это коснулось каналов, выкладывавших в публичный доступ телефоны и адреса участников протестов в России или распространявших домашние адреса и телефоны судей, прокуроров, журналистов и медиаменеджеров.

Эскорт-разоблачение

Канал «Рынок шкур» начал активно развиваться в конце 2017 года. Его автор заявил, что разоблачает моделей, зарабатывающих путем оказания эскорт-услуг. Он обещал раскрыть имена популярных девушек, задействованных в этой сфере, а также рассказать о них правду и слить доказательства – переписки, фотографии и видео. И такие доказательства действительно там появлялись.

Как удалось выяснить журналистам, владелица канала занимается разоблачением эскортниц, так как ее раздражает аморальное поведение многих молодых девушек, которые приходят в эту сферу за легкими деньгами. Но «Рынок шкур» завоевал огромную популярность и среди тех, кого интересует не собственно эскорт, а вопрос, как найти проститутку. То есть, канал, по сути, напрямую способствовал тому, чтобы предложение нашло свой спрос.

В 2020-м году появилась информация о том, что канал будто бы шантажирует девушек имеющимся на них компроматом, обещая публикацию их фото и данных в «черном списке» проституток и эскортниц. Так, например, в июне Telegram-канал «Медиавойны» рассказал о заявлении в полицию против руководства «Рынка шкур», поданном моделью Мирой Дрогул. Впоследствии оказалось, что претензии есть не только у нее. Девушки утверждали, что канал требовал у них платы за отказ от публикации или удаление компрометирующей их информации.

Среди тех, чьи имена в нелестном свете упоминал «Рынок шкур», известная певица Анна Седокова, чья свадьба с отцом одного из ее детей будто бы сорвалась неспроста, модель Виктория Лопырева, якобы запугивавшая автора постов прокуратурой, бывшая участница шоу «Дом-2» Анастасия Ковалева, о которой написали, что ее брат, появляющийся на фото в соцсетях, на самом деле является ее сыном, а сама она отличается, мягко говоря, легкомысленным поведением, а также огромное количество не столь широко известных персон. По словам владелицы канала, в каких-то случаях интересующую ее информацию получает она сама, так как вращается примерно в тех же кругах, что и девушки, в каких-то – ее друзья, немало историй приходит и от «доброжелателей», и все они, по ее утверждению, проходят тщательную проверку. Она также отмечала, что часто сталкивалась с просьбами опубликовать заказной материал – чтобы испортить чью-то репутацию или, напротив, напомнить публике о той или иной персоне с помощью «черного пиара», но не соглашалась на подобное сотрудничество.

Почти как аренда

Уже довольно давно эскорт превратился в обычный бизнес, которым сложно кого-то удивить. Те, кто предлагает такие услуги (чаще всего это девушки, но встречаются и молодые люди), ищут возможность хорошо заработать и обеспечить себе «красивую жизнь». В большинстве случаев эскорт по умолчанию означает и секс-услуги, но не всегда – именно поэтому не всех эскортниц устраивает сравнение с проститутками.

Насколько высоко оплачиваются услуги эскортниц – зависит от уровня девушек. Преимуществами будут яркая внешность, хорошая физическая форма, образованность, знание иностранных языков, знание этикета, умение танцевать и так далее. Поэтому те, кто хочет оставаться востребованными, вынуждены соответствовать довольно высокой планке: это регулярный фитнес и диеты, бьюти-процедуры, пластика, знакомство с актуальными новинками кино, музыки и литературы, а также с тенденциями в бизнесе и политике.

Если говорить о правовом аспекте, эскорт-услуги не выходят за рамки законодательства. Другой вопрос, что едва ли представители этой сферы фиксируют свой доход и платят с него налоги. Но если речь идет о занятии проституцией под видом эскорта, это уже совсем другая – противозаконная – история. Эксперты отмечают, что пока девушка, позиционирующая себя как эскортница, просто сопровождает клиента на мероприятия, она не нарушает закон. Как только она вступает с ним в половую связь, ее действия уже считаются административным правонарушением. А вот организация притона, вовлечение в занятие проституцией и распространение информации о секс-услугах – это уже уголовное дело. Вероятно, именно с последним пунктом и связана блокировка «Рынка шкур» — ведь там появлялась проверенная информация о женщинах, готовых к встречам с обеспеченными клиентами.

Как известно, спрос рождает предложение. Кто же становится клиентами эскортниц, и почему услуги последних остаются востребованными? По мнению экспертов, «профессиональное сопровождение» — это своего рода элемент имиджа, присущий представителям определенного круга, практически аксессуар, который показывает уровень человека, подчеркивая его успешность. Иногда эскортниц привлекают для того, чтобы придать более неформальный тон деловой встрече и так далее. Наконец, бывают мероприятия, на которые не каждый бизнесмен или чиновник будет готов взять с собой жену, но не хочет появляться в одиночестве.

Кроме того, в кругах, где вращаются потребители эскорт-услуг, люди чаще всего имеют высокий доход, но при этом не располагают большим количеством свободного времени. Поэтому упрощенный вариант отношений с противоположным полом играет им на руку.

Тема эскорта активно форсируется в прессе, на телевидении и в сети, но складывается ощущение, что подобные инфоповоды – это пиар, устроенный некими людьми, стоящими за этим бизнесом. Самим девушкам подобная слава отнюдь не на руку – ведь когда-нибудь они, возможно, захотят выйти из игры, а вернуть репутацию будет уже невозможно.

Несмотря на закрытие главного канала об эскорт-услугах, в сети немало ресурсов, которые делают то же самое – даже их названия перекликаются с «Рынком шкур» или вовсе его дублируют. Поэтому, даже если кто-то и лишился хорошо раскрученного рынка продаж, это не станет фатальной потерей. Но и тем, кто пытается бороться с собственной дурной славой с помощью блокировок, это не слишком поможет: все данные переходят с одной площадки на другую, и даже если заплатить за удаление фотографий и личных данных, особой роли это не сыграет — интернет помнит все.

Переписка с конченной шлюхой » Порно рассказы и эротические секс истории с фото

Наигравшись в малолеткой и её горлом я отправился на поиски более опытных шлюх. В идеале я хотел замужнюю женщину и большой грудью. Чтобы она в тайне от своего любимого была подстилкой для молодого парня. После нескольких неуверенных в себе дам я наткнулся на неё…

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13:14:11)

Привет

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 15: 02)

Привет. Как ты относишься к унижениям и боли?

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 15: 56)

Если написала тебе то наверное люблю это

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 17: 00)

Ск лет? Как зовут? Откуда ты?

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 17: 43)

36 оля донецк. А ты?

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 18: 18)

Саша. 22. Новосибирск. Ты замужем?

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 18: 34)

Нет. Давно в разводе.

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 19: 21)

Чем тебя так зацепил грязный секс?

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 21: 18)

Просто я конченная шлюха лет с 19. После развода я и вовсе стала рабыней для всех

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 22: 01)

Будешь теперь и моей вещью! Ясно?

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 22: 51)

Да господин

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 23: 24)

Вставай на четвереньки шмара!

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 24: 18)

Встала. Прогибаю спинку. Виляю задницей. Это всё ваше

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 25: 02)

Шлёпаю по заднице. Сую пальчик в попку. Подношу к твоему рту

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 25: 35)

Облизываю палец своего хозяина

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 26: 08)

Достаю поводок с ошейником. Одевай дырка

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 27: 18)

Гав гав. Мне нравится

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 28: 04)

Веду тебя за поводок по квартире к унитазу.

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 28: 56)

Ползу виляя своей жопой. Накажите свою тварь

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 29: 24)

Хватаю за шею. Бью по лицу. Опускаю твою голову в унитаз нажимаю на слив.

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 30: 18)

Захлебываюсь но терплю

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 31: 03)

Достаю голову. Размазываю по лицу потёкшую косметику.

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 31: 48)

Спасибо хозяин что вымыли мою сучью рожу

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 32: 32)

Облизывай толчок внутри свои языком!

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 33: 20)

Ммм слизываю. Чуствую себя конченной. Нравится унижать тётю?

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 34: 18)

Ещё как. Возьми ободок от унитаза и одень на шею

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 34: 45)

Одела. Боюсь представить что будет дальше хозяин

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 36: 01)

Ты всё верно себе представляешь. Будешь моим личным туалетом. Открой рот

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 37: 18)

Открыла рот высунула язык и преданно смотрю в глаза. Обоссы меня господин. Пожалуйста

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 38: 20)

Расстегиваю ширинку. Достаю член. Пускаю тебе в лицо струю жёлтой вонючей жидкости. Целюсь в открытый рот.

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 39: 05)

Ммм обожаю пить мочу. Я ваш туалет господин

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 40: 18)

Полоскай горло хозяйской мочой

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 40: 49)

Стою на коленях и полоскаю рот. Глотаю её. Стою вся обоссаная

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 41: 46)

Я ещё не всё. Вставай на четвереньки. Беру воронку и сую в твой дымоход

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 42: 33)

Я ваша блядь. Делайте со мной что хотите. Руками раздвигаю булки шире

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 43: 32)

Ссу в твою жопу. Как только чуствую что достаточно то вынимаю воронку и приказываю пустить фонтан мочи аналом.

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 44: 17)

Напрягаюсь и струёй выпускаю мочу своего хозяина. Тётя чувствует что попала в умелые руки

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 45: 18)

Снова пальчиком ковыряюсь в анале. Патом сую второй третий четвёрный. Весь кулак

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 46: 31)

Ммм больно. Не разорвите мне жопу

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 47: 22)

Молчи шмара. Бью по заднице. Трахаю кулаком тебя

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 48: 01)

Ай ай ай. Пожалейте шлюху

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 48: 53)

Хозяин немного возбудился. Член набухает. Засовываю его в твоё раздолбленное очко

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 49: 21)

Трахните меня анально пожалуйста

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 50: 35)

Постепенно увеличиваю скорость движения. Засовываю по самые яйца.

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 51: 21)

Он большой. Чуствую что кишка лезет наружу от такого мощного анала

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 52: 40)

Долблю твоё дупло. Держу за волосы. Задираю твою голову и плюю в лицо

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 53: 24)

Да! Я ваша вещь. Выдери суку

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 54: 02)

Долблю свою взрослую анальную шалаву что есть сил. Хочу кончить прямо туда

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 55: 16)

Супер. Хотите сделать кремовый пирог?

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 56: 18)

Засовываю член на половину и кончаю. Много кончаю. Достаю член. Из дупла вытекает немного спермы

КоNчеNNая.Suка (05.01.2017 13: 58: 18)

Пукаю спермой на пол.

Domineering_Boss (05.01.2017 13: 59: 43)

Слизывай с пола проститутка.

Вы прочитали мою реальную переписку с реальной девочкой. Надеюсь вам понравится этот новый жанр рассказов. Ждите новых историй и новых девочек.

Skins Inc. CORRESP Correspondence

[Заголовок KIRKPATRICK & LOCKHART NICHOLSON GRAHAM LLP]

Через Эдгара и Факсимиле 9202, 9203 .

Отдел корпоративных финансов

Комиссия по ценным бумагам и биржам

Вашингтон, округ Колумбия 20549-0306

Re

Skins Inc.

Поправка № 2 к заявлению о регистрации в форме SB-2

№ файла 333-133406

От имени Skins Inc., корпорации в Неваде («Компания»), мы настоящим передаем для подачи в соответствии с Правилом 101 (а) Регламента ST, Поправка №3 («Поправка № 3») к Форме SB-2, первоначально поданной 19 апреля 2006 г., и с поправками, внесенными Поправками № 1 и 2 30 июня и 18 августа 2006 г., соответственно. Мы также отправляем вам через Federal Express любезные копии этого письма и Поправки № 3, в чистом и помеченном виде, чтобы показать изменения от Поправки № 2 к Заявлению о регистрации. Нам сообщили, что изменения в Поправке № 3 из Поправки № 2, представленные здесь в электронном формате, были помечены.

На основании рассмотрения Персоналом Поправки №2 Комиссия выпустила письмо с комментариями от 7 сентября 2006 г. Ниже приведены ответы Компании на письмо с комментариями в идентичной цифровой последовательности. Для удобства Комиссии каждый комментарий дословно повторяется, а за ним сразу же следует ответ Компании.

Поправка № 2 к заявлению о регистрации в форме SB-2

Результаты операций, стр. 22

Комментарий:

Мы отмечаем из обсуждения результатов вашей деятельности за трех- и шестимесячный периоды, закончившиеся 30 июня 2006 г., что вы в первую очередь относите увеличение чистого убытка за соответствующий предыдущий период к увеличению продаж, общих и административных расходов.Однако из раскрытия вами информации и сумм, представленных в финансовой отчетности, следует, что нереализованный убыток по производным инструментам также оказал значительное влияние на ваш чистый убыток. Пожалуйста, исправьте при необходимости.

Ответ:

Мы уважительно принимаем к сведению ваш комментарий и пересмотрели раскрытие, чтобы включить все основные причины увеличения чистого убытка за шесть месяцев, закончившихся 30 июня 206 г. .

Х. Кристофер Оуингс, эсквайр.

Комментарий:

Вы включаете обсуждение и анализ результатов вашей деятельности за три месяца, закончившихся 30 июня 2006 г., по сравнению с тремя месяцами, закончившимися 30 июня 2005 г. Однако, вы не представили и не обязаны представлять отчет о прибылях и убытках за эти периоды. Удалите, пожалуйста, это обсуждение и анализ.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий и опускаем обсуждение и анализ трех месяцев, закончившихся 30 июня 2006 и 2005 гг.

Комментарий:

Пожалуйста, исправьте индекс, чтобы четко указать, что финансовая отчетность принадлежит Skins Inc.

Ответ:

Мы уважительно приняли к сведению ваш комментарий и пересмотрели индекс, чтобы четко указать, что финансовая отчетность принадлежит Skins Inc., и указать точное название каждой финансовый отчет.

Отчет независимой зарегистрированной государственной бухгалтерской фирмы, стр. F-2

Комментарий:

Пожалуйста, попросите своих независимых бухгалтеров предоставить отчет, включающий пояснительный параграф который определяет характер повторных заявлений и отсылает читателя к примечанию 11, в котором подробно обсуждаются повторные утверждения.См. Разделы 508.16 и 420.12 Кодификации стандартов аудита AU.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий, и наши независимые аудиторы обновили свой отчет, включив в него пояснительный параграф, определяющий характер пересчета, и ссылку на Примечание 11.

Сводные балансовые отчеты, стр. F-3

Комментарий:

Похоже, что остаток добавочного капитала на 31 декабря 2004 г. Необходимо пересмотреть лицевую сторону ваших консолидированных балансов, чтобы соответствовать соответствующей сумме, представленной в консолидированных отчетах об акционерном капитале (дефиците) на странице F-5.Пожалуйста, исправьте при необходимости.

Ответ:

Мы уважительно принимаем к сведению ваш комментарий и пересмотрели остаток добавочного капитала в консолидированных балансах Компании, чтобы согласовать его с соответствующей суммой, представленной в консолидированном заявления о несостоятельности акционеров.

Консолидированные отчеты об акционерном капитале (дефицит), страница F-5

Комментарий:

Мы рассмотрели ваш ответ на комментарий 9 в нашем письме от июля 20, 2006.Похоже, что приобретение и выбытие казначейских акций в соответствии с условиями соглашения об обмене акциями следует включить («нетто») в строку «Чистые активы Skins, Inc., принятые на 20 марта 2006 г.». В настоящее время представляется, что акционеры Logicom сохранили контрольный пакет акций Skins Inc., что исключает учет слияния как рекапитализации. Пожалуйста, измените вашу презентацию соответствующим образом. Пожалуйста, также пересмотрите отчеты о движении денежных средств, чтобы включить строку «покупка казначейских акций» в строку «денежные средства, принятые в связи с рекапитализацией».

Х. Кристофер Оуингс, эсквайр.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий и включили приобретение казначейских акций в чистые активы, принятые 20 марта 2006 года, в Консолидированный отчет о дефиците акционеров. Кроме того, мы пересмотрели наш Консолидированный отчет о движении денежных средств за шесть месяцев, закончившихся 30 июня 2006 г., соответственно.

Комментарий:

Мы принимаем к сведению ваш ответ на комментарий 8 в нашем письме от 20 июля 2006 г. и пересмотр вашего раскрытия информации. Похоже, что руководство в Разделе 4: B SAB требует, чтобы весь накопленный дефицит на дату слияния Skins Shoes LLC и Skins Shoes, Inc. рассматривался как возврат капитала участникам. Пожалуйста, исправьте соответственно.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий и перенесли весь накопленный дефицит на дату слияния компаний Skins Shoes, LLC и Skin Shoes, Inc.к Дополнительной оплате inCapital в качестве дохода участников капитала 20 октября 2005 г. в нашем Консолидированном отчете о собственном капитале (дефицит).

Примечание Описание бизнеса, стр. F-8

Комментарий:

Пожалуйста, измените, чтобы более подробно раскрыть планы руководства, чтобы разрешить сомнения относительно вашего способность продолжать свою деятельность.См. Раздел 607.02 Кодификации политик финансовой отчетности.

Ответ:

Мы с уважением приняли к сведению ваш комментарий и обновили сноску о действующем концерне в Примечании 1, чтобы более подробно раскрыть планы руководства по разрешению сомнений в способности Компании продолжать как действующее предприятие.

Примечание 2: Краткое изложение принципов учетной политики, стр. F-9 Производные инструменты,

Комментарий:

Пожалуйста, раскройте допущения, использованные для оценки справедливой стоимости производных финансовых инструментов на каждую отчетную дату.Пожалуйста, также раскрывайте справедливую стоимость обязательства по варрантам.

Ответ:

Мы уважительно принимаем к сведению ваш комментарий и обновили сноску по производным инструментам в Примечании 2, чтобы включить допущения, использованные для оценки справедливой стоимости производных инструментов по каждому балансу. дата листа. Мы также раскрыли справедливую стоимость обязательства по варрантам.

Х. Кристофер Оуингс, эсквайр.

Примечание 5: Кредиторская задолженность связанных сторон, стр. F-12

Комментарий:

Мы отмечаем, что вы передали 122 000 полностью принадлежащих вам обыкновенных акций двум акционерам на консультационные услуги, которые будут предоставлены в течение двухлетнего срока, начинающегося 3 апреля 2006 г. Вы оценили сделку на основе справедливой стоимости ваших обыкновенных акций на дату предоставления и представили зачетный дебет как контрольный капитал.Пожалуйста, предоставьте нам конкретные факты и обстоятельства, связанные с соглашениями, в соответствии с которыми вы сочли целесообразным указать сумму как контрольный капитал, а не как предоплаченный актив или немедленные расходы. См. Параграф 5 SFAS 123 (R) и параграф 13 EITF 00-18.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий и доводим до вашего сведения, что консультанты получили 122 000 полностью переданных без права конфискации обыкновенных акций Компании для оказания услуг. сроком на два года в соответствии с контрактом, который начался 3 апреля 2006 года.Компания пришла к выводу, что расходы, связанные с выпуском этих полностью принадлежащих обыкновенных акций, будут списаны на расходы по мере оказания услуг в соответствии с параграфом 5 SFAS 123 (R). Сумма предоплаченных расходов, относящихся к этой операции, была реклассифицирована 30 июня 2006 г. из счета встречного капитала в предоплаченный актив в балансе Компании на 30 июня 2006 г. в соответствии с параграфом 13 EITF 00-18.

Примечание 8: Соглашение об обмене акций, стр. F-13

Комментарий:

Мы рассмотрели ваш ответ на предыдущий комментарий 15 в нашем письме от 20 июля, 2006 г.Похоже, вы не полностью ответили на наш комментарий. Сообщите нам сумму поступлений, выделенных на конвертируемый долг, обыкновенные акции и варранты, выпущенные в рамках двух сделок частного размещения. Также сообщите нам, какие допущения вы использовали при оценке справедливой стоимости варрантов, выданных в сделке с конвертируемым долгом, и почему распределение поступлений, полученных по сделке, не приводит к выгодной конверсии. См. EITF 00–27. Кроме того, сообщите нам, на основании чего вы решили, что заранее оцененные убытки, указанные в соглашениях о подписке, являются штрафами, а не компенсацией разницы в справедливой стоимости между зарегистрированными и незарегистрированными акциями.См. Параграф 16 EITF 00-19. Кроме того, сообщите нам, почему обязательства по производным варрантам не были отражены в чистых активах, принятых в операции обмена акциями, и вашей основе для отражения всей суммы обязательств, в отличие от изменения справедливой стоимости обязательств с даты сделки обмена акций в ваших отчетах о прибылях и убытках.

Ответ:

Мы с уважением отмечаем ваш комментарий и обращаем ваше внимание на то, что 20 марта 2006 г. было проведено два отдельных предложения частного размещения.Во-первых, мы продали 2 821 428 единиц за 2 370 000 долларов, а вторым было преобразование конвертируемой облигации на 150 000 долларов в 178 572 единицы, то есть цена конвертации составила 0,84 доллара за единицу. Каждая единица состояла из одной обыкновенной акции и одного ордера на покупку акций с исполнением по цене 1 доллар за акцию. Варранты по обеим сделкам были предоставлены 20 марта 2006 г., что совпало с закрытием как частных размещений, так и обмена акциями.

H.Кристофер Оуингс, эсквайр.

На основании нашего обзора EITF 00-27, выпуск 15 мы пришли к выводу, что встроенная выгодная конверсия присутствовала только при частном размещении конвертируемых долговых обязательств. На дату принятия обязательства 2 ноября 2005 г. произошла встроенная выгодная конверсия на сумму около 23 000 долларов США. Встроенная выгодная конверсия в размере 23 000 долларов должна была бы быть амортизирована до даты погашения 20 марта 2006 г. (дата слияния) в соответствии с Выпуском 6 EITF 00-27 в финансовой отчетности Logicom до слияния.На дату конвертации мы распределили поступления от конвертируемой облигации на сумму 150 000 долларов США на каждый долевой инструмент на основе отношения справедливой стоимости каждого долевого инструмента на дату принятия обязательства к общей справедливой стоимости всех долевых инструментов на дату принятия обязательства в соответствии с параграф 54 EITF 00-27 (Выпуск 15). На дату принятия обязательства справедливая стоимость акций была основана на рыночной цене 0,80 доллара за акцию или 142 858 долларов, а справедливая стоимость варрантов была рассчитана как 0 долларов.20 на основе расчета Блэка-Шоулза или 35 715 долларов. Основываясь на этом расчете, мы определили, что 120 000 и 30 000 долларов из выручки должны быть распределены на Обыкновенные акции и Варранты, соответственно. Выручка в размере 120 000 долларов США от Обыкновенных акций показана в нашем Консолидированном отчете об акционерном капитале (дефицит), а выручка в размере 30 000 долларов США от варрантов рассматривалась как обязательство в соответствии с EITF 00-19 (на варранты распространяется положение о заранее оцененных убытках, объяснено ниже).


Компания проверила соглашения о подписке и пришла к выводу, что содержащееся в них положение о заранее оцененных убытках не предусматривает какой-либо компенсации для подписчиков. В нем указывается только штрафной ущерб. Поэтому Компания рассчитала справедливую стоимость производного обязательства на основе модели Блэка-Шоулза и обновила Примечание 2 «Производные инструменты», чтобы раскрыть все использованные допущения.

Компания имеет 3 000 000 варрантов, на которые распространяется штраф за заранее оцененный ущерб, указанный в соглашениях о подписке.Из 3 000 000 варрантов 2 821 428 и 178 572 были выпущены в связи с конвертацией денежных средств и конвертируемой задолженности, соответственно. 20 марта 2006 г. Компания включила производное обязательство в размере 553 846 долларов в чистые активы Skins Inc, принятые на 2 821 428 варрантов, выданных при закрытии денежных средств. 30 июня 2006 г. Компания увеличила обязательство до 1 722 764 долл. США по 2 82 21 428 варрантам с зачетом нереализованного убытка на 1 168 918 долл. США по производным инструментам в своем Отчете о прибылях и убытках за шесть месяцев, закончившихся 30 июня 2006 г., на основе разницы в справедливой стоимости. стоимость производного обязательства, принятого на 20 марта 2006 года, и справедливая стоимость производного инструмента на 30 июня 2006 года.По оставшимся 178 572 варрантам, предоставленным при конвертации долга, Компания отразила производное обязательство в размере 109 036 долларов США на 30 июня 2006 г. с зачетом нереализованного убытка по производным инструментам в своем Отчете о прибылях и убытках за шесть месяцев, закончившихся 30 июня 2006 г. разница между первоначальной стоимостью варранта в размере 30 000 долларов и производным обязательством по состоянию на 30 июня 2006 г., не вычтенная против чистых активов, принятых при слиянии, в Заявлении о дефиците акционеров за тот же период, поскольку 178 572 варранта были предоставлены после слияние было завершено.

Х. Кристофер Оуингс, эсквайр.

Примечание 9: Опционы на акции, стр. F-14

Комментарий:

Что касается наград, предоставленных двум членам совета директоров, пожалуйста, измените информацию, чтобы раскрыть сумма компенсационных расходов, признанных в течение каждого из периодов, указанных в последнем абзаце на странице F-14.

Ответ:

Мы уважительно принимаем к сведению ваш комментарий и обновили раскрытие в Примечании 9, включив в него сумму компенсационных расходов, признанных в течение каждого из упомянутых периодов.

В отношении опционов, предоставленных консультантам и лицам, не являющимся сотрудниками, раскрытых в последних двух параграфах «Гранты на замену 16 марта 2006 г.», просьба раскрыть сумму расходов на компенсацию, признанных каждый представленный период. Также раскрывайте допущения, использованные для оценки справедливой стоимости опционов на каждую дату оценки.

Ответ:

Мы уважительно приняли к сведению ваш комментарий и обновили раскрытие в Примечании 9, включив в него сумму компенсационных расходов, признанных в течение каждого представленного периода, и допущения, использованные для оценки справедливая стоимость опционов на каждую дату оценки для опционов на замену от 16 марта 2006 года.

Форма 10-QSB для квартала, закончившегося 30 июня 2006 г.

Комментарий:

Пожалуйста, исправьте, чтобы ответить на комментарии выше, если применимо.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий и внесли соответствующие поправки в форму 10-QSB от 30 июня 2006 года.

Форма 8-K / A подана 18 августа 2006 г.

Комментарий:

Пожалуйста, исправьте, чтобы учесть комментарии выше, если применимо.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий и внесли соответствующие поправки в форму 8-K / A.

Комментарий:

Мы отмечаем, что вы не пересматривали неаудированную предварительную консолидированную сокращенную финансовую отчетность, чтобы отразить операцию обмена акциями как рекапитализацию.Пожалуйста, сделай так.

Ответ:

Мы с уважением принимаем к сведению ваш комментарий и хотели бы обратить ваше внимание Примечание 11. См. Последний абзац внизу страницы 32, где мы классифицируем транзакцию как рекапитализация.

Х. Кристофер Оуингс, эсквайр.

Не стесняйтесь обращаться к нижеподписавшимся или Anh Q.Тран, эсквайр по телефону (310) 552-5000 с любыми вопросами.

/ s / Thomas J. Poletti, Esq.

4,82 ± 1,03 Пропионовая кислота

куб.см:

Марк Кляйн, Skins Inc. лечение

Электронные чернила DoS

Проводящие чернила были приготовлены путем смешивания хлопьев серебра с раствором PEDOT: PSS (дополнительный рис.1а, б). Полупроводниковые чернила, показанные на дополнительных рисунках 1c, d, и ионно-гелевые чернила также были приготовлены в виде смесей. Подробную информацию обо всех приготовлениях чернил можно найти в разделе «Методы». Процесс рисования электроники DoS показан на рис. 1a. Сначала на режущей машине (Silhouette Cameo) был изготовлен трафарет на основе каптона и прозрачной ленты (Magic Tape, 3 M) и приклеен к целевой коже. Затем чернила были нанесены на контуры трафаретов с помощью модифицированной шариковой ручки (см. Дополнительную информацию) с диаметром наконечника 1 мм (дополнительный рис.1д). Следует отметить, что кончик пера не должен касаться кожи для рисования чернил, поскольку образуется мениск, как показано на вставке на фиг. 1а. Движение пера вызывает сдвиг мениска, в результате чего чернила растекаются по поверхности кожи. Скорость волочения ~ 10 мм / с. После ~ 5 мин испарения растворителя при комнатной температуре трафарет удалялся, и оставалась тонкая сухая пленка. Если в устройстве DoS есть какие-либо недостатки, их можно исправить, нарисовав недостатки (дополнительный рис.1е).

Рис. 1: Платформа электроники DoS с токопроводящими и полупроводниковыми чернилами.

процесс рисования электроники DoS, начинающийся с (i) прикрепления трафарета на ленту к коже (масштабная линейка 1 см), (ii) рисования устройства с помощью трафарета, модифицированной шариковой ручки и чернил (масштабная линейка 5). мм), на вставке — крупный план наконечника (масштабная линейка 1 мм), (iii) удаление трафарета (масштабная линейка 2 см) и (iv) готовое устройство после высыхания (масштабная линейка 1 см). b Пример интегрированной системы DoS, включающей резистор, транзисторы, нагреватель, EP (электрофизиологические) датчики, датчик температуры, датчик деформации и датчик увлажнения кожи, нарисованный на коже человека (шкала 5 мм).Соответствующий трафарет для проводника показан на вставке (шкала 1 см). c Достижимый межстрочный интервал с использованием трафаретов и проводящих чернил Ag-PEDOT: PSS (шкала 1 мм). d Нерастянутые (слева, масштабная линейка 1 мм) и двухосно-растянутые (справа, масштабная шкала 1 см) состояния нарисованной структуры, состоящей из Ag-PEDOT: проводящий PSS (левый квадрат) и полупроводник P3HT-NF (правый квадрат) ) чернила на ПДМС. e Скручивающие (слева) и выколачивающие (справа, шкалы 1 см) деформации нарисованной структуры токопроводящими и полупроводниковыми красками. f СЭМ-изображения чернил Ag-PEDOT: PSS, показывающие ультраконформный контакт с бороздками и выступами (слева, масштабная полоса 250 мкм) на верхней части копии кожи и поперечное сечение, показывающее микроструктуру Ag-PEDOT: PSS (справа, масштабная линейка) 20 мкм). Фиолетовый цвет указывает на копию кожи. г Гистологическое изображение чернил Ag-PEDOT: PSS на коже мышей через 48 часов (шкала 100 мкм). ч. Гистологическое изображение чернил P3HT-NF на коже мышей через 48 часов (масштабная полоса 100 мкм). i Сопротивление листа vs.растягивайте чернила Ag-PEDOT: PSS до 30% и высвобождая их. Планки погрешностей представляют стандартное отклонение. j Изображения, полученные с помощью оптического микроскопа Ag-PEDOT: PSS чернила на копии кожи, растянуты до 30% (масштабные полосы 100 мкм). k Датчик DoS EP на запястье испытуемого в растянутом (вверху) и не растянутом (внизу) состояниях (шкала 5 мм).

Исследованы морфологии полученных пленок, созданных методом рисования чернилами. Изображение, полученное с помощью сканирующего электронного микроскопа (СЭМ) (дополнительный рис.2) проводящих чернил показывает нано / микромасштабные чешуйки серебра, а изображения полупроводниковых чернил (дополнительный рис. 3а, b), полученные с помощью атомно-силового микроскопа (АСМ), показывают нановолокнистые структуры P3HT. Чтобы продемонстрировать универсальность платформы электроники DoS, был нарисован прототип многофункциональной интегрированной системы (рис. 1b), чтобы показать, что несколько устройств, включая транзисторы, датчик деформации, датчик температуры, нагреватель, резистор, датчик увлажнения кожи и датчики EP, могут быть изготовленным в процессе рисования.На вставке показан соответствующий трафарет для чернил Ag-PEDOT: PSS, а изготовление интегрированной системы описано далее в дополнительной информации. Интегрированная система DoS может подвергаться растяжению и сжатию без каких-либо физических повреждений, как показано на дополнительном рис. 4.

Характеристики рисования чернил, механические свойства, совместимость с кожей и электрические характеристики чернил Ag-PEDOT: PSS и P3HT-NF были оценены. Ширину чернильных линий и разрешение можно регулировать, варьируя диаметр кончика пера или используя трафареты.Ширина линии чернил Ag-PEDOT: PSS составляла ~ 1 мм, но ее можно было уменьшить до 300 мкм (дополнительный рис. 5) с помощью ручки с более тонким кончиком. Трафарет может уменьшить межстрочный интервал до 200 мкм без создания пересекающихся линий (рис. 1c). Чернила P3HT-NF и ионного геля, показанные на дополнительных рисунках 6a, b, соответственно, были нарисованы линиями, чтобы продемонстрировать способность красок писать. Было приготовлено несколько вариантов чернил Ag-PEDOT: PSS, которые сравнили, чтобы определить оптимальное соотношение 1: 2 (хлопья Ag: PEDOT: раствор PSS), как показано на дополнительном рис.7: это подробнее объясняется в разделе «Методы». Время высыхания составляло 3-5 мин (дополнительный рис. 8а). Хотя процесс рисования электроники DoS включает ручное управление, разная толщина (от нескольких сотен нм до 10 мкм) слоя чернил Ag-PEDOT: PSS может быть достигнута путем многократного рисования в одном и том же месте (дополнительный рисунок 8b). Стоит упомянуть, что перо может быть спроектировано так, чтобы обеспечить лучшее управление потоком чернил и интерфейсом чернила / кожа для обеспечения однородности и повторяемости чернил, что устраняет потенциальную проблему изменения устройства.

Чтобы проверить устойчивость чернил Ag-PEDOT: PSS и чернил P3HT-NF к различным режимам деформации, они были нанесены на полидиметилсилоксан (PDMS), показанный на рис. 1d (слева). При двухосном растяжении (~ 20%) трещины в нарисованной структуре практически отсутствуют (рис. 1г, справа). Ни скручивание, ни толчки не вызвали видимых повреждений, как показано на рис. 1e. Раскрашенное СЭМ изображение чернил Ag-PEDOT: PSS на дубликате кожи на основе PDMS (окрашено в фиолетовый цвет) показывает, что чернила заполняют и конформно ложатся на бороздки и впадины (рис.1е, слева). Вид в поперечном сечении подтверждает и показывает микроструктуру чернил Ag-PEDOT: PSS (рис. 1f, справа). Изготовление копии кожи PDMS описано в дополнительной информации.

Чтобы проверить реакцию кожи на чернила Ag-PEDOT: PSS и P3HT-NF, их наносили на спину мышей после удаления шерсти, затем образцы кожи извлекали и оценивали с помощью процедур гистологического окрашивания. По сравнению с контрольным (не обработанным чернилами) образцом кожи (дополнительный рис.9), 48-часовые образцы кожи с нанесенными чернилами Ag-PEDOT: PSS и P3HT-NF (рис. 1g, h, соответственно) не показали злокачественных новообразований или воспаления в эпидермисе или в дерме под ним. Чернила Ag-PEDOT: PSS демонстрируют низкое удельное сопротивление с сопротивлением листа 1,2 Ом / кв. Без деформации и 9,9 Ом / кв. При деформации 30% (рис. 1i). Снятие напряжения привело к уменьшению до 2,7 Ом / кв. После 1000 циклов растяжения при 10% деформации сопротивление листов краски Ag-PEDOT: PSS немного увеличилось (дополнительный рис.10). Хранение чернил Ag-PEDOT: PSS в окружающей среде (22 ° C) или в холодильнике (4 ° C) не повлияло на его стойкость в течение нескольких месяцев, как показано на дополнительном рис. 11. Изображения, полученные с помощью оптического микроскопа Ag-PEDOT: чернила PSS на подложке дубликата кожи PDMS показывают, что при деформации до 30% не наблюдалось явных трещин (рис. 1j). Следует отметить, что поверхность PDMS была сделана более гидрофильной (дополнительный рис. 12a, b) для улучшения адгезии, но эти обработки не требуются для реальных кож, поскольку они частично гидрофильны 9 .На рис. 1k показана морфология текстуры кожи датчика DoS EP с (верхняя рамка) и без (нижняя рамка) растяжения на коже человека, что указывает на сверхприспособленность и деформируемость устройств DoS.

Электронные устройства и датчики DoS на копии кожи

Для проверки работы электроники DoS на неровных и шероховатых поверхностях транзисторы, тензодатчики, датчики температуры и нагреватели были охарактеризованы на копиях кожи. Транзисторы, которые являются фундаментальными строительными блоками в электронных схемах и биомедицинских устройствах и системах, были изготовлены с использованием процесса рисования электроники DoS.Схема в разобранном виде DoS-транзистора, состоящего из Ag-PEDOT: чернил PSS в качестве проводника, чернил P3HT-NF в качестве полупроводника и чернил с ионным гелем в качестве диэлектрика, показана на рис. 2a. Изготовление DoS-транзистора с использованием соответствующих трафаретов (дополнительный рис. 13) подробно описано в разделе «Методы». Изображения транзистора с текстурой кожи без деформации (верхний кадр) и 30% деформации (нижний кадр) представлены на рис. 2b. Длина канала может быть порядка нескольких сотен микрон, как показано на СЭМ-изображении на рис.2c. Кривые ВАХ показывают типичные характеристики транзистора p-типа (рис. 2d). Чтобы получить кривые передачи, напряжение смещения V DS было установлено равным -0,55 В, а напряжение затвора V G изменялось от 0 до -3 В. Отношение включения / выключения (I ON / I OFF ) и подвижность (µ FE ) были рассчитаны равными 1,69 × 10 3 и 7,07 см 2 V -1 с -1 , когда DoS-транзистор не подвергался деформации, и 2,01 × 10 2 и 5.36 см 2 V −1 s −1 при 30% деформации соответственно (рис. 2д, е). Некоторый гистерезис может наблюдаться, как показано на дополнительном рис. 14, но этого можно ожидать для транзисторов с электролитическим затвором 18 . Пороговое напряжение (V TH ) претерпело небольшое снижение от -2,38 В без деформации до -2,03 В при 30% деформации. Расчеты для µ FE подробно описаны в дополнительном примечании 1. Хотя процесс рисования полностью выполняется вручную, эти результаты показывают, что его можно использовать для разработки функциональных и растягиваемых транзисторов DoS в качестве доказательства концепции.Транзистор DoS потенциально может использоваться в приложениях для считывания, интерфейсной электронике, усилителе сигнала или интегральных схемах.

Рис. 2: Электронные устройства и датчики DoS на копии кожи.

a Схема транзистора DoS на основе Ag-PEDOT: чернила PSS в качестве проводника, чернила P3HT-NF в качестве полупроводника и ионно-гелевые чернила в качестве диэлектрика. b DoS-транзистор на копии кожи без деформации (вверху) и 30% деформации (внизу, шкала 5 мм). c СЭМ-изображение нарисованных электродов истока (S) и стока (D) и канала (шкала 100 мкм). d ВАХ транзистора DoS без приложенной деформации. e , f Передаточные кривые DoS-транзистора без деформации и 30% деформации в направлении длины канала транзистора. г Электрическое сопротивление тензодатчика DoS при приложенной механической нагрузке до 30% и соответствующие коэффициенты измерения. На вставке показана схема тензодатчика DoS.Планки погрешностей представляют стандартное отклонение. ч Изменение относительного сопротивления тензодатчика DoS при циклическом растяжении и отпускании при деформации 10% и 25%. i Изменение относительного сопротивления датчика температуры DoS при различных температурных условиях. j Схема нагревателя DoS на основе токопроводящих чернил. k Температурные профили под различным напряжением на нагревателе DoS. л Градуировочная кривая нагревателя DoS. Планки погрешностей представляют собой s.d.

Датчики деформации и датчики температуры, которые могут отображать критическую физиологическую информацию от кожи 19,20 , были нарисованы в формате двухполюсных датчиков, как показано на вставке к рис. 2g. Оба устройства были сконструированы с использованием чернил Ag-PEDOT: PSS в качестве проводника и чернил P3HT-NF в качестве полупроводника с трафаретами, показанными на дополнительном рисунке 15. Для тензодатчика DoS статические испытания показали, что изменение сопротивления увеличилось в раз. 4 (рис. 2g) после растяжения до 30%, в то время как коэффициент калибровки оставался около 15 во время процесса растяжения.Испытание на циклическое растяжение и высвобождение на фиг. 2h показывает, что изменение сопротивления увеличилось в 2 раза при деформации 10% и в 4,5 раза при деформации 25%. Подробный расчет калибровочного коэффициента представлен в дополнительном примечании 2. Датчик температуры DoS показал, что изменение сопротивления уменьшилось с 1 до 0,57 в диапазоне температур 20–45 ° C (рис. 2i). Реакция датчика температуры DoS аналогична реакции термистора с отрицательным температурным коэффициентом (NTC). На основе линейного графика зависимости ln (R) от1000 / T, показанное на дополнительном рисунке 16, константа термистора ( β) была определена равной 2589 K, что сопоставимо с коммерческими термисторами NTC 21 . Расчет для β показан в дополнительном примечании 3. Ag-PEDOT: чернила PSS были нанесены на трафарет (дополнительный рис. 17) для изготовления нагревателя DoS (схематично показан на рис. 2j), который потенциально может быть использован для заживление кожных ран 22,23 . Динамическое изменение температуры нагревателя DoS было получено путем приложения смещения постоянного тока от 1 до 7 В для получения температур в диапазоне от 25 до 140 ° C, как показано на рис.2к. Градуировочная кривая для нагревателя DoS показана на рис. 2l.

Электронные устройства и датчики DoS на коже

Чернила Ag-PEDOT: PSS использовались для создания нагревателя, соединения для RC-цепи, датчика увлажнения кожи и датчиков EP на коже свиньи и человека. Изображения с инфракрасной камеры (FLIRONE Pro, FLIR® Systems, Inc.) нагревателя DoS показывают высокую проводимость чернил на шероховатой и неровной поверхности свиной кожи (рис. 3a). Чтобы продемонстрировать другое использование чернил на коже, электронные компоненты были объединены в RC-цепь со светодиодом и соединены проводом с чернилами Ag-PEDOT: PSS в качестве межсоединения (рис.3б, слева). Конденсатор (C = 2200 мкФ) заряжался от батареи (V b = 9 В), подключенной к схеме, показанной на вставке к рис. 3c. После извлечения батареи конденсатор разрядил ток через остальную часть цепи, который протекал через резистор (R = 800 Ом) и включил светодиод (рис. 3b, справа). Обычные медицинские датчики были также изготовлены с использованием чернил Ag-PEDOT: PSS.

Рис. 3: Электроника DoS на коже и беспроводное зондирование.

a Изображения с ИК-камеры нагревателя DoS на коже без приложенного напряжения (слева) и с приложенным напряжением 5 В (справа, масштабная линейка 1 см). b Ag-PEDOT: чернила PSS, служащие связующим звеном во время зарядки конденсатора (слева) и разряда через резистор и светодиод (справа, шкала 2 см). c Напряжение конденсатора, показывающее зарядку до извлечения аккумулятора, а затем разрядку. На вставке — принципиальная схема, показывающая батарею, подключенную к конденсатору, который подключен к резистору и светодиоду, подключенным последовательно. d Датчик увлажнения кожи DoS на коже без (слева) и с приложенной деформацией (справа, шкала 2 мм). e Калибровка датчика степени увлажнения кожи с использованием коммерческого измерителя влажности. f Импеданс датчика увлажнения кожи DoS без механического растяжения и с ним. Стрелка указывает время нанесения лосьона на сухую кожу. г Датчики DoS EP без (вверху) и с приложенной деформацией (внизу, шкала 2 мм). ч Записанные сигналы ЭМГ без (вверху) и с приложенной деформацией (внизу). i Записанные сигналы ЭКГ без (вверху) и с механическим растяжением (внизу). j Схема компонентов цепи беспроводной передачи, установленных на кронштейне и взаимодействующих с датчиками DoS EP (шкала 2 см). k Среднее количество ударов в минуту по всем испытаниям, полученное на основе сигналов ЭКГ, полученных с помощью датчиков DoS EP. До появления красной пунктирной линии субъект неподвижно стоял. После красной пунктирной линии субъект двинулся вперед.

Датчик гидратации кожи DoS был сконструирован в виде двух встречно-штыревых электродов с соответствующим трафаретом (дополнительный рис.18) для регистрации импеданса кожи, на основании которого можно экстраполировать уровень гидратации эпидермиса и дермы. Перемыкание обеспечивает большее взаимодействие между двумя электродами и увеличенную емкостную чувствительность 24 . Текстурированная кожа поверхность датчика гидратации кожи DoS может быть четко видна в его ненатянутом (рис. 3d, слева) и растянутом (рис. 3d, справа) состояниях. Линейная зависимость, показанная на рис. 3e ( R 2 = 0,997) между измерениями коммерческого измерителя гидратации (единицы% гидратации) и показаниями нарисованного датчика гидратации кожи (емкость, единицы нФ), может быть записана как

, где % H — процент увлажнения кожи, C — измеренная емкость, b — наклон и a — калибровочная константа.После нанесения лосьона на кожу сопротивление резко снизилось 25 , указывая на то, что датчик гидратации кожи DoS может обнаруживать изменение гидратации кожи даже при растяжении (рис. 3f). Дополнительные данные импеданса, детали интерфейса и процедура измерения показаны на дополнительном рис. 19a – f и описаны далее в дополнительном примечании 4. Чернила Ag-PEDOT: PSS также служили в качестве жизнеспособного датчика EP, изображенного на рис. 3g в нерастянутые (вверху) и растянутые (внизу) состояния.Датчики DoS EP, нарисованные в соответствующих местах с использованием трафаретов (дополнительный рис. 20), могут захватывать электромиографические (ЭМГ) и ЭКГ-сигналы, как показано на рис. 3h, i, соответственно. Для получения ЭМГ два датчика EP были нарисованы на предплечье и бицепсе одной руки (дополнительный рис. 21a). Для регистрации сигналов ЭКГ на каждом запястье пациента был нарисован один датчик EP (дополнительный рисунок 21b), а затем подключен к системе сбора данных (DAQ). Более подробная информация в разделе «Методы».Отношение сигнал / шум (SNR) сигналов ЭКГ, записанных с помощью электродов DoS, остается примерно таким же (~ 45 дБ) даже после растяжения. Подробности расчета SNR для сигналов ЭКГ приведены в дополнительном примечании 5, а спектральная плотность мощности сигнала показана на дополнительном рисунке 22. Кроме того, датчики и устройства DoS могут быть инкапсулированы (дополнительный рисунок 23a, b) для защиты от влажных сред и при этом сохраняют свои функции, такие как запись ЭКГ (дополнительный рис.23c). Важно отметить, что все сигналы EP, показанные в этой работе, не подвергались постобработке. Как было показано с предыдущими датчиками, датчики EP работают на коже даже при напряжении, без видимых изменений в полученных сигналах.

Беспроводной мониторинг ЭКГ с электроникой DoS

Полностью портативный мониторинг сигнала EP позволяет использовать электронику DoS в реальных и клинических условиях. Датчики DoS EP были сопряжены со специальной схемой беспроводной передачи данных, схематически показанной на рис.3j. Подробная информация о настройке и интерфейсе находится в разделе «Методы» и показана на дополнительном рис. 24a – c. Поскольку ходьба считается одним из наиболее репрезентативных повседневных занятий и является частью клинических стресс-тестов 26,27,28 , субъекту было предложено остановиться в течение 16 секунд и отдохнуть, а затем пройти 16 секунд (вставка рис. 3j) для простого стресс-теста. Можно наблюдать очевидное снижение ЧСС (на рис. 3k), когда испытуемый стоял на месте и расслабился (средняя ЧСС составляла 91,5 ударов в минуту), но затем она увеличивалась (средняя ЧСС составляла 95.1 уд. / Мин.) Во время ходьбы испытуемого. Дополнительные сведения об эксперименте и обработке находятся в разделе «Методы». Обнаружение изменения ЧСС указывает на то, что датчики DoS EP подходят для диагностики сердца. Кроме того, репрезентативное испытание данных ЭКГ, записанных во время теста, показано на дополнительном рисунке 25a, b, на котором показаны различимые подволны P, QRS и T даже во время ходьбы, что означает возможность беспроводной системы мониторинга DoS EP для достаточного захвата ЭКГ. сигналы при регулярной деятельности и клинических обследованиях.

Сравнение электроники DoS с существующими технологиями

Чтобы определить преимущества датчиков DoS EP среди существующих сенсорных технологий, они сравнивались как с гелевыми электродами для больниц (Meditrace 450 Foam Electrodes, Kendall), так и с ультратонкими (толщиной 350 нм). ) электроды из змеевидной сетки за их эффективность в присутствии пота, долговечность во времени, адгезию к коже и устойчивость к артефактам движения. Подробные сведения о тестах на пот, долговечность и адгезию описаны в разделе «Методы».Электроды DoS были изготовлены, как упоминалось ранее. Гелевые электроды больничного класса помещали на кожу без каких-либо изменений. Сетчатые электроды были спроектированы и изготовлены с использованием технологий микротехнологии (дополнительная информация, схематически показанная на дополнительном рисунке 26), а подробный геометрический дизайн и схема интерфейса с кожей показаны на дополнительном рисунке 27 и дополнительном рисунке 28 соответственно. На запястьях испытуемого рисовали / помещали по два датчика каждого типа для записи ЭКГ.Сигналы ЭКГ, полученные с помощью датчиков DoS EP, сопоставимы с сигналами других типов датчиков до потоотделения (рис. 4a – c, в середине). Сигналы ЭКГ, зарегистрированные во время потоотделения с помощью датчиков DoS EP и сетчатых электродов, оставались относительно согласованными с сигналами, записанными до потоотделения, в отличие от сигналов, записанных с помощью гелевых электродов (рис. 4a – c, справа). В частности, для гелевых электродов наблюдался ослабленный сигнал ЭКГ, который является результатом скопления пота или снижения концентрации ионов в гелевом электролите 29,30 .Потоотделение минимально повлияло на внешний вид датчика DoS EP, как показано на дополнительном рисунке 29. SNR датчиков до и во время потоотделения (дополнительная таблица 1) показывает, что датчики DoS EP и сетчатые электроды показывают небольшие изменения (~ 1 дБ ). Однако отношение сигнал / шум гелевых электродов после потоотделения уменьшилось на ~ 3 дБ, что совпадает с заметным уменьшением амплитуды. Кроме того, все три типа датчиков были оценены на предмет их долговечности в течение 7 часов. Сигналы ЭКГ, полученные с помощью датчиков DoS EP, были относительно согласованными во всех временных точках измерения, в отличие от других датчиков (дополнительный рис.30а – в).

Рис. 4: Сравнение электроники DoS и существующих технологий для регистрации ЭКГ до и во время состояния потоотделения.

датчик DoS EP (слева, шкала 2 мм) с сигналами ЭКГ, записанными до потоотделения (в центре) и во время потоотделения (справа). b Гелевый электрод (слева, шкала 1 см) с сигналами ЭКГ, записанными до потоотделения (в центре) и во время потоотделения (справа). c Сетчатый электрод (слева, шкала 5 мм) с сигналами ЭКГ, записанными до потоотделения (в центре) и во время потоотделения (справа).

Адгезия датчиков к коже была также проверена с помощью тестов на отслаивание и трение. Как показано на дополнительном рис. 31a – e, датчик DoS EP не может быть удален с кожи, в то время как другие были легко удалены. Датчики DoS EP остались нетронутыми при сильном трении, в то время как сетчатые электроды были необратимо повреждены (дополнительный рис. 32a, b, соответственно). Любые недостатки устройств DoS могут быть быстро исправлены, как упоминалось ранее, тогда как для поврежденных сетчатых электродов потребуется совершенно новое устройство.

ЭП-зондирование без артефактов движения на коже человека

Артефакты движения особенно проблематичны при мониторинге состояния носимых устройств и приводят к неправильной интерпретации и ошибочным диагнозам, что имеет серьезные последствия для здоровья 31,32 . Исследования показали, что неправильный диагноз из-за артефактов движения может существенно снизить качество жизни пациентов 33,34 . Артефакты, возникающие из-за нарушений между электродом и кожей, возникают из-за неправильного прилегания электрода к коже во время движения 6,7,35 .Чтобы оценить реакцию трех типов датчиков на индуцированные движения, было проведено два эксперимента, включая локальную деформацию кожи при записи сигналов ЭКГ и вибрацию руки при записи сигналов ЭМГ в состоянии покоя. Следует отметить, что любые очевидные отклонения от формы волны синусовой ЭКГ во время деформации или потенциалов ЭМГ покоя во время вибрации в каждом из соответствующих экспериментов рассматривались как артефакты движения.

Чтобы проверить реакцию трех типов датчиков на деформацию кожи, ЭКГ человека записывалась с регулярными интервалами растяжения, сжатия и высвобождения кожи в месте расположения одного из датчиков для каждого типа датчика. .Та же самая установка проводного сбора данных (дополнительный рисунок 33a) использовалась, как упоминалось ранее, а пример деформации показан на дополнительном рисунке 33b. Более подробная информация в разделе «Методы». Следует отметить, что такой способ деформации кожи под электродом был крайним вариантом деформаций, которые кожа испытывает при повседневных движениях.

Типичные испытания деформации кожи при записи ЭКГ с помощью датчиков DoS EP, гелевых электродов и сетчатых электродов показаны на рис.5а – в соответственно. Интересующие области выделены соответствующими цветами оранжевого, синего и зеленого цветов, причем каждый цвет представляет движения растяжения, сжатия и освобождения соответственно (рис. 5a). Как показано на рис. 5а, сигнал, регистрируемый датчиками DoS EP во время движений, не показывает никаких аномальных отклонений от формы волны синусовой ЭКГ. Гелевые электроды показывают, что деформации иногда искажали сигнал (красные стрелки на рис. 5б). Эти артефакты, вероятно, возникли из-за скольжения на границе раздела гель-электролит-кожа, вызванного приложенной вручную деформацией кожи 36,37 .Сетчатые электроды также показывают флуктуации сигнала во время деформаций (красные стрелки на рис. 5c). Скольжение между сетчатым электродом и кожей во время деформаций происходило из-за непостоянного прилегания сетчатого электрода к коже 5 . Эти данные трех типов датчиков в увеличенном масштабе представлены на дополнительных рисунках. 34–36 соответственно. Значения SNR были рассчитаны для сигналов, показанных в средних кадрах рис. 5a – c, и были определены как 50 дБ, 20 дБ и 12 дБ для датчиков DoS EP, гелевых и сетчатых электродов, соответственно.Дополнительный рис. 37a, b показывает, как шум и артефакты были изолированы для гелевого и сетчатого электродов, соответственно, а дальнейшее описание приведено в дополнительном примечании 6. Очевидно, артефакты шума и движения могут существенно повлиять на SNR. Результаты для датчиков DoS EP были дополнительно проверены с помощью специального устройства для растяжения для воспроизводимых деформаций кожи (дополнительный рис. 38a, b). Подробности представлены в дополнительной информации. Как и ожидалось, в сигналах ЭКГ не наблюдалось никаких артефактов во время деформаций, создаваемых изготовленным на заказ устройством для растяжения (дополнительный рис.39а, б).

Рис. 5: Обнаружение движения без артефактов с помощью электроники DoS.

a Записанные сигналы ЭКГ (в центре) от датчиков DoS EP во время локального цикла растяжения / отпускания (слева) и цикла сжатия / отпускания (справа). Оранжевые полоски указывают продолжительность растягивающего движения, синие полоски указывают продолжительность сжимающего движения, а зеленые полоски указывают продолжительность расслабляющего движения. b Записанные сигналы ЭКГ (в центре) от гелевых электродов во время цикла локального растяжения / отпускания (слева) и цикла сжатия / отпускания (справа).Красные стрелки указывают на артефакты. c Записанные сигналы ЭКГ (в центре) от сетчатых электродов во время цикла локального растяжения / отпускания (слева) и цикла сжатия / отпускания (справа). Красные стрелки указывают на артефакты. d ЭМГ-сигналы в состоянии покоя, записанные при движении руки, вызванном вибрацией. Розовые полоски указывают продолжительность времени, в течение которого виртуальная машина была включена для датчиков DoS EP (вверху), гелевых электродов (в центре) и сетчатых (внизу) электродов. e TF карты сигналов ЭМГ в состоянии покоя с движением, вызванным вибрацией, для датчиков DoS EP (вверху), гелевых электродов (в центре) и сетчатых (внизу) электродов.Розовые полоски и красные линии показывают продолжительность колебаний.

Помимо характеристики сигналов ЭКГ во время деформаций кожи, было оценено изменение импеданса кожи к электроду (SEI) во время деформаций, поскольку оно было связано с артефактами движения 38 . Дополнительный рис. 40a иллюстрирует принципиальную схему установки, которая была адаптирована для получения изменений SEI 39,40 . В дополнительном примечании 7 приведены подробные сведения об установке и параметрах эксперимента.Кроме того, импеданс (и сопротивление), нормированный по площади контакта, показан в дополнительной таблице 1. Величина изменения SEI (показанная на дополнительном рис. 40b – d) во время всех деформаций, включая растяжение, сжатие и освобождение, была определена как составлять 138 ± 41,5 Ом, 54,1 ± 13,2 Ом и 1,81 ± 1,44 кОм для датчиков DoS EP, гелевых и сетчатых электродов соответственно. Статистический анализ (дополнительное примечание 7) не показал значительной разницы ( P = 0,99) между средним изменением SEI для датчиков DoS EP и гелевых электродов.Эти данные показывают, что изменение SEI для датчиков DoS EP и гелевых электродов не оказало существенного влияния на результаты, показанные на рис. 5a – c. Кроме того, были получены изменения импеданса на поверхности датчика во время растяжения и высвобождения на коже человека (дополнительный рисунок 40e). Дополнительное примечание 7 содержит подробную информацию об экспериментальной установке. Изменение импеданса во время деформаций было минимальным на различных частотах измерения, относящихся к мониторингу сигнала EP 41,42 , что делает датчики DoS EP хорошо подходящими для регистрации биологических сигналов при наличии деформаций кожи.

Другие исследования, в которых изучали происхождение артефактов движения, вызванных движениями в направлении z или в направлении, перпендикулярном поверхности кожи, путем присоединения вибрационного двигателя (VM) рядом с датчиком для имитации движения руки 7 , 43,44,45 . Поскольку было показано, что более тонкие датчики менее восприимчивы к артефактам движения 7 , а датчики DoS EP могут иметь толщину всего несколько 100 нм, реакция датчиков DoS EP на движение, вызванное вибрацией (схема показана на дополнительном рис. .41). Также были оценены характеристики гелевого и сетчатого электродов, подробности см. В разделе «Методы». Судя по сигналам ЭМГ покоя во временной области (рис. 5d), датчики DoS EP (вверху) и гелевые электроды (посередине) не показывают очевидной восприимчивости к вибрации, тогда как сетчатые электроды (внизу) подвержены значительному воздействию. Хотя сетка была ультратонкой, более высокая амплитуда вибрации могла создавать артефакты, которые могли быть захвачены на участках электродов 7 .Увеличенные изображения сигналов во временной области в состояниях включения и выключения VM на дополнительном рис. 42a – d предполагают, что датчики DoS EP и гелевые электроды не подвержены влиянию этой вибрации. Однако дальнейший анализ в частотно-временной области выявил информацию, которую нельзя было наблюдать только по сигналам временной области.

Карты время-частота (TF) на рис. 5e были построены для анализа частотных составляющих сигналов. ЭМГ-сигналы в состоянии покоя (<250 Гц), обозначенные желтым (20 дБ) цветом, можно увидеть на всех картах TF всех датчиков.Сетчатые электроды (внизу) подверглись прямому воздействию вибрации, что обозначено зеленым (представляющим от -10 до -20 дБ) цветом около 1 кГц. Хотя VM вибрировал с частотой 1 кГц, во время вибрации было существенное присутствие сигналов более низкой частоты (> 250 и <500 Гц) по всему исследуемому спектру, что показано на карте TF для сетчатых электродов. Это более низкое частотное содержание также преобладает на карте TF для гелевых электродов, когда VM включен, и четко различимо по сравнению с тем, когда VM выключен, что указывает на то, что гелевые электроды действительно были восприимчивы к вибрации.В отличие от гелевого и сетчатого электродов, датчики DoS EP не показывают этот артефакт в частотно-временной области, как это видно на соответствующей карте TF (рис. 5e, вверху). Следует отметить, что всплески сигналов, наблюдаемые при включении и выключении виртуальной машины, не рассматривались как артефакты, вызванные вибрацией. Дальнейшие эксперименты подтвердили результаты для датчиков DoS EP. Ни увеличение амплитуды вибрации виртуальной машины, ни перемещение виртуальной машины ближе к датчикам DoS EP не приводили к появлению артефактов в записанных сигналах ЭМГ, как показано на дополнительном рис.43a – e.

Ускоренное заживление кожных ран с помощью электроники DoS

Как упоминалось ранее, простота процесса рисования электроники DoS делает технологическую платформу подходящей для областей с ограниченными ресурсами. Еще одно очевидное преимущество заключается в том, что электроды DoS можно настроить под любую форму и размер раны. Например, солдаты на поле боя часто получают ранения кожи от осколков 46 , на полное заживление которых может уйти от нескольких дней до месяцев. Было показано, что применение импульсной электрической стимуляции для заживления кожных ран ускоряет заживление ран, особенно в фазах пролиферации и ремоделирования 22,47,48,49 .Была использована модель раны на коже мышей, и электрическая стимуляция с помощью электроники DoS показала ускоренное заживление ран. На спине мышей хирургическим путем была создана кожная рана ( N = 3), и электроды были протянуты вокруг верхней половины раны, как показано на фиг. 6a, b, соответственно. Схема стимуляции схематически показана на дополнительном рис. 44, а подробные сведения об эксперименте можно найти в разделе «Методы». Гистологические изображения показывают, что на обработанной половине не видно корки (рис.6c, вверху), хотя визуальное наблюдение на глаз позволило предположить наличие тонкого слоя струпа. На необработанной половине видна большая струпья (рис. 6c, внизу), в отличие от обработанной стороны, которая указала на более медленное естественное заживление. Гистологические изображения также показывают, что поперечное сечение обработанной половины имело более узкую ширину раны (указана черными стрелками), чем у необработанной половины. Дополнительно измеряли ширину раны (струпа) на 1, 3 и 5 дни. Ширина струпа уменьшилась с 1 см до 0.49 см (необработанная) и до 0,20 (обработанная) к 5-му дню, что явно демонстрирует ускоренное заживление для обработанной половины (рис. 6d). Подключение миниатюрного стимулятора постоянного тока к электронике DoS было бы чрезвычайно выгодным для лечения на ходу. Ускоренные результаты заживления ран подчеркивают производительность и настраиваемость электроники DoS для лечения.

Рис. 6: Ускоренное заживление кожных ран с помощью электроники DoS.

a Экспериментальная установка, демонстрирующая электроды DoS вокруг кожной раны на спине мышей ( N = 3).Электроды DoS служили проводящими путями для электростимуляции (шкала 2 см). b Фотографии заживления ран на 1-й день (слева), 3-й день (в центре) и 5-й день (справа). Верхнюю половину раны обрабатывали электростимуляцией, а нижнюю половину оставляли без лечения и заживали естественным путем (масштабная шкала 1 см). c Гистологические изображения обработанной (вверху, масштабная линейка 100 мкм) и необработанной (внизу, масштабная линейка 250 мкм) половин раны на 5-й день. Черные стрелки указывают ширину раны. d Ширина корки с течением времени для обработанной (черной) и необработанной (красной) половин раны.

Супрамолекулярная биомиметическая кожа, сочетающая в себе широкий спектр механических свойств и множественные сенсорные возможности

Приготовление гидрогелей

Супрамолекулярные полиэлектролитные гидрогели были легко получены путем статистической сополимеризации акриловой кислоты (АК) и 3-диметил (метакрилоил) аммония сульфонат (DMAPS) (рис. 1а) без химических сшивок и набухающий в водных растворах NaCl.В отличие от прочных гидрогелей, состоящих из полиамфолитов, которые требуют строгого баланса заряда в процессе сополимеризации 23 , этот тип цвиттерионных полиэлектролитных гидрогелей может быть синтезирован в широком диапазоне концентраций мономеров, соотношений и ионной силы. И их механические свойства могут регулироваться этими факторами, как показано на дополнительных рисунках. 1–3. Чтобы обеспечить надежность и избежать образования пузырьков в гидрогелях, здесь мы выбрали образец с начальной концентрацией мономера 45% и массовым соотношением мономеров (AA: DMAPS) 4: 1 для дальнейших характеристик.

Рис. 1

Подтверждение множественных динамических взаимодействий в супрамолекулярных сетях. a Химическая структура полиэлектролита (PAA-co-DMAPS), синтезированного в данной работе. b Спектры НПВО-Фурье (в области 1800–1000 см –1 ) лиофилизированного сополимера ПАК-со-ДМАПС и супрамолекулярных полиэлектролитных гидрогелей, уравновешенных в D 2 O с различными концентрациями NaCl и их соответствующие кривые второй производной. c Гидродинамические диаметры лиофилизированного сополимера ПАК-со-ДМАПС в водных растворах (0,1 мас.%) С различными концентрациями NaCl (0, 0,1, 0,5 и 1 М). На вставке фото показано, что в 1 М NaCl наблюдаются осадки. d Фотография сополимера ПАК-со-ДМАПС, уравновешенного в водных растворах (0,1 мас.%) С различными концентрациями NaCl. e Объемные отношения набухания полиэлектролитных гидрогелей, уравновешенных в водных растворах NaCl с различными концентрациями.(планки погрешностей: стандартные отклонения). f Соответствующая фотография гидрогелей в e

Множественные динамические сшивки в супрамолекулярных сетях

Во-первых, мы даем представление о множественных динамических сшивках внутри супрамолекулярных полиэлектролитных гидрогелей с помощью инфракрасных спектров, динамического светорассеяния (DLS) , и измерения набухания. Как показано на рис. 1b, по сравнению с лиофилизированным сополимером ПАК-со-ДМАПС, полосы валентных колебаний С = О ПАК и ПДМАПС смещаются в сторону более низких частот (1701–1709 см –1 ) во всех полиэлектролитных гидрогелях ( D 2 O вместо H 2 O использовали в качестве растворителя для устранения перекрытия H 2 O примерно при 1640 см ( -1 ).Они указывают на водородные связи между неионизированным –COOH, а также на ионные ассоциации между –COO и четвертичными аммониевыми группами 24 , в то время как полосы симметричных валентных колебаний SO 3 смещаются в сторону более высоких частот, от 1038 см −1 в лиофилизированном сополимере до 1042 см -1 в гидрогелях, что указывает на гидратацию SO 3 и увеличение ионных ассоциаций между SO 3 и группами четвертичного аммония 25 .

Помимо водородных связей и ионных ассоциаций, добавление NaCl увеличивает гидрофобные взаимодействия, что демонстрируется агрегацией сополимера PAA-co-DMAPS (рис. 1c, d) 26 , меньшее соотношение объема набухания (рис. 1e) , f) и более высокая кажущаяся энергия активации E a (дополнительные рисунки 4–7) супрамолекулярных полиэлектролитных сеток с повышенной ионной силой. Гидродинамические диаметры линейных сополимеров ПАК-со-ДМАПС (полученных диссоциацией надмолекулярных сеток) увеличиваются с добавлением NaCl, и осадки наблюдаются в 1, 2, 4 и 6 М растворах NaCl (рис.1в, г). Более того, возрастающие гидрофобные взаимодействия приводят к более высоким энергетическим барьерам движения цепи и, таким образом, усиливают динамически сшитые сети с меньшими объемными отношениями набухания (Рис. 1e, f). Согласно кривым наложения время-температура 27 , E a вычисляется как 41 кДж моль -1 в полиэлектролитных гидрогелях без NaCl и увеличивается до 59, 66 и 96 кДж моль -1 , когда гидрогели уравновешиваются в 2, 4 и 6 М растворах NaCl соответственно.

Широкий спектр механических свойств

Супрамолекулярные сети с разными энергетическими барьерами демонстрируют разные зависящие от времени механические свойства. При колебательной деформации 0,5% гидрогель, уравновешенный 4 M NaCl, демонстрирует уникальное вязкоупругое поведение с переходом между упругостью и вязкостью около 10 −3 Гц при комнатной температуре (рис. 2a), что указывает на то, что гидрогель сочетает в себе эластичность, подобную твердому телу. и жидкоподобная пластичность в различных временных масштабах.Следовательно, предварительно приготовленный супрамолекулярный гидрогель может быть реконфигурирован для изготовления тонкого слоя прозрачной гидрогелевой кожи для протеза руки (коэффициент пропускания около 90% в видимом диапазоне длин волн, дополнительный рисунок 8). Прозрачная гидрогелевая кожа демонстрирует способность к изменению формы, адаптируясь к неровным поверхностям, а также соответствует движению протезного пальца (рис. 2b). Эта превосходная способность к изменению формы или реконфигурации подобна некоторым естественным существам, что важно для будущих приложений роботов с мягким телом, но никогда не было достигнуто в предыдущих биомиметических шкурах.Дополнительный фильм 1 записывает широкий спектр механических свойств гидрогеля в режиме реального времени. Он не только демонстрирует упругую эластичность при нажатии пальцев и чрезвычайно высокую растяжимость, но также способен изменять свою форму и очень быстро залечивать трещины.

Рис. 2

Вязкоупругость, способность к реконфигурации, податливость и автономное самовосстановление динамических супрамолекулярных сетей. a Частотно-зависимые модули накопления ( G ’) и потери ( G ”) супрамолекулярного полиэлектролитного гидрогеля (массовое соотношение мономеров AA: DMAPS составляет 4: 1, уравновешенное в 4 M NaCl). b Фотография прозрачного гидрогеля в исходном состоянии; он изменен, чтобы адаптироваться к неровным поверхностям протеза руки, и показывает соответствие движению протезного пальца (масштабная линейка: 2 см). c Прямое наблюдение реконфигурации и автономного самовосстановления динамических сетей с помощью флуоресцентных микроскопических изображений с временным разрешением (масштабная шкала: 20 мкм). Белые стрелки указывают на цепочки в динамических сетях, пересекающих трещину. d Схематическое изображение динамического процесса

Чтобы непосредственно наблюдать реконфигурацию и самовосстановление супрамолекулярных полиэлектролитных сеток, мы пометили разрушенный гидрогель родамином.Флуоресцентные микроскопические изображения гидрогеля показывают взаимосвязанную пористую структуру (фиг. 2c), что соответствует изображению лиофилизированного образца, полученному с помощью сканирующего электронного микроскопа (SEM) (дополнительный рисунок 9). Мы проследили движение разорванных сетей по изображениям с временным разрешением. Как показано на рис. 2c, когда время увеличивается, динамические водородные связи и ионные ассоциации притягивают цепи, чтобы взаимно диффундировать через трещину и вступать в новые поперечные связи. Этот динамический процесс согласуется с прогнозирующей моделью автономного самовосстановления, основанной на обратимых ассоциациях 28 .Как схематически показано на рис. 2d, наряду с релаксацией цепи, диссоциированные группы имеют тенденцию реформировать мосты и, таким образом, восстанавливать сети.

Количественные характеристики механических свойств этого супрамолекулярного полиэлектролитного гидрогеля представлены на дополнительных рисунках. 10–12. Он устойчив к сжатию с модулем сжатия 27,6 кПа (дополнительный рис. 10), что сравнимо с химически сшитыми гидрогелями и натуральной кожей. Самовосстановление в микроскопическом масштабе также оценивается с помощью реологических измерений ступенчатой ​​деформации.Этот гидрогель может немедленно восстановить 78,5% G ’, а самовосстановление можно циклически повторять несколько раз (дополнительный рисунок 11). Что касается измерений растяжения, как первичный, так и самовосстанавливающийся гидрогель (в течение 2 часов) демонстрирует удивительно большое удлинение> 100 без перелома, что указывает на эффективность заживления почти до 100% в течение 2 часов (дополнительный рисунок 12).

Далее мы сравниваем механические свойства этого гидрогеля и сообщенных быстрых самовосстанавливающихся гидрогелей (в течение 2 часов).Как показано на дополнительном рис. 13, стоит отметить, что с улучшением растяжимости модуль упругости обычно уменьшается. Например, хотя гидрогели на основе 2-уреидо-4-пиримидона могут растягиваться до 10 000%, их модуль упругости меньше 5 кПа 22 . Устройства на основе гидрогеля с таким низким модулем могут быть слишком слабыми, чтобы противостоять внешним изменениям. В целом, этот гидрогель сочетает в себе прочную эластичность, чрезвычайно большую растяжимость и быстрое автономное самовосстановление, а также простой одноэтапный метод подготовки.Об этой комбинации редко сообщалось в предыдущих работах, и она является преимуществом для разработки экономически эффективной ионной электроники скин-подобного типа, адаптируемой к сложной среде.

Кроме того, этот супрамолекулярный полиэлектролитный гидрогель подлежит вторичной переработке. Как показано на дополнительном рис. 14, даже если гидрогель дегидратируется, он может восстановить> 90% G ’за несколько циклов дегидратации-гидратации.

Множественные сенсорные возможности ионной электроники на основе гидрогеля

Мобильные ионы в супрамолекулярном полиэлектролитном гидрогеле не только улучшают механические характеристики, но также обеспечивают ионную проводимость для передачи информации в ионтронике на основе гидрогеля.Чтобы воссоздать множественные сенсорные возможности, здесь диэлектрический эластомер (VHB 4905, 3M) зажат между двумя ионно-проводящими слоями гидрогеля, которые соединены с тремя металлическими электродами. Таким образом, сэндвич-конфигурация включает емкостный датчик с параллельными пластинами (между электродами 1 и 2) и ионно-резистивный датчик (между электродами 2 и 3) для имитации различных рецепторов стимулов в естественной коже (рис. 3a). Когда биомиметическая оболочка растягивается при разных температурах, емкость параллельных пластин нечувствительна к колебаниям температуры и демонстрирует почти линейную зависимость между изменением емкости и деформацией растяжения (рис.3b, c) 9 , тогда как резистивные сигналы чувствительны к температуре и могут быть описаны как гиперплоскость в пространстве «изменение сопротивления в зависимости от деформации в зависимости от температуры» (рис. 3d). Следовательно, емкостный датчик действует как механорецептор натуральной кожи, а резистивный датчик действует как композитный (термический и механический) рецептор. Когда биомиметическая кожа стимулируется как напряжением, так и температурой в сложной среде, емкостный датчик («механорецептор») может различать стимулы напряжения (рис.3b, c), а изменение температуры может быть получено из резистивной гиперплоскости.

Рис. 3

Деформационные и температурные ощущения биомиметической кожи. a Схематическое изображение и две упрощенные эквивалентные электрические схемы биомиметической кожи. b Емкостная реакция биомиметической кожи на взаимное влияние напряжения и температуры. c Кривая емкости-деформации биомиметической кожи. Данные получены из средних значений емкости при различных температурах в b , а полосы ошибок (стандартные отклонения) очень малы, что свидетельствует о нечувствительности емкостного отклика к изменению температуры. d Резистивная реакция биомиметической кожи на взаимное влияние напряжения и температуры. e Кривые обратимой емкости-деформации и теоретический прогноз (красная пунктирная линия). f Обратимые кривые сопротивления деформации и теоретический прогноз (красная пунктирная линия). г Обратимые кривые зависимости сопротивления от температуры. ч Циклические кривые зависимости деформации от емкости в диапазоне деформации 0–100%. i Циклические кривые сопротивления – деформации в диапазоне деформаций 0–100%. j Кривые изменения сопротивления и температуры в диапазоне температур 10–50 ° C

Зависимости между деформацией, температурой, емкостью и сопротивлением также предсказуемы. Предполагая, что диэлектрическая проницаемость и объем остаются постоянными при деформации биомиметической кожи 9 , когда она растягивается в λ раз, емкость C следует линейной зависимости C = C 0 λ и ионное сопротивление R масштабируются как R = R 0 λ 2 (рис.3e, f, C 0 , R 0 — начальная емкость и сопротивление, соответственно, более подробная информация доступна в дополнительной информации, дополнительный рисунок 15). Более того, подобно зависимости сопротивления от температуры, обнаруженной в ионных жидкостях 29 и электронных проводниках 30 , ионное сопротивление гидрогеля уменьшается с повышением температуры окружающей среды (рис. 3g). По сравнению с ранее описанными кожевенными термодатчиками на основе металлов 31 , самовосстанавливающихся эластомеров 30 , электропроводящих полимеров 32 , нанокомпозитов 33,34 и т. Д., эта биомиметическая кожа не только демонстрирует относительно высокую чувствительность, но также имеет широкий диапазон температурной чувствительности (дополнительный рис. 16).

Помимо измерения деформации и температуры, эта биомиметическая кожа также может воспринимать напряжение сжатия из-за изменений геометрии (дополнительный рис. 17a). Когда он сжимается по толщине, его емкостная область соответственно увеличивается и приводит к увеличению емкости (дополнительный рис. 17b). Между тем, сопротивление слоя гидрогеля также увеличивается с уменьшением площади поперечного сечения и удлинения по длине (дополнительный рис.17в). Примечательно, что при приложении напряжения сжатия емкость C и ионное сопротивление R синхронно увеличиваются в 1/ k раз, что отличается от соотношения между деформацией растяжения, емкостью и сопротивлением (подробнее о теоретические прогнозы и экспериментальные данные доступны в дополнительной информации).

Непрерывные циклические тесты (рис. 3h – j) и ступенчатые изменения (дополнительный рис. 18) деформации и температуры подтверждают надежность этого биомиметического кожного покрова.Дальнейшая оценка длительной стабильности. Хотя этот гидрогель может изменять свою форму в динамических условиях, он довольно стабилен в статическом состоянии. Когда устройство на основе гидрогеля помещается в замкнутую среду (без испарения воды или защиты эластомера, подобного эпидермису, дополнительный рисунок 19), в течение 12 часов наблюдается незначительный дрейф (<2%) емкостных и резистивных сигналов. Когда гидрогель подвергается воздействию типичной среды обитания (относительная влажность 60%, 25 ° C), он может сохранять относительно стабильную ионную проводимость в течение 4 часов (дополнительный рис.20а). Хотя длительная дегидратация снижает ионную проводимость, ксерогель полиэлектролита все еще имеет ионную проводимость около 2 × 10 −5 См · см −1 через 20 дней. Следовательно, обезвоженное устройство поддерживает термочувствительное сопротивление (дополнительный рисунок 20b) и стабильные емкостные сигналы (дополнительный рисунок 20c). Вдохновленные структурой кожи млекопитающих, люди могут вводить некоторые эпидермисоподобные эластомеры для защиты этой надмолекулярной кожи 9,35 (дополнительный рис.21) или рециркулировать его из обратимого процесса дегидратации-гидратации (дополнительные рисунки 14 и 22).

Применение в качестве типа многофункциональной биомиметической кожи

Когда биомиметическая кожа прикрепляется к протезу пальца с помощью эпидермисоподобной ленты VHB (рис. 4a), она позволяет протезному пальцу ощущать напряжение и температурные стимулы через различные раздражители-рецепторы, т. е. емкостные и резистивные датчики соответственно. Например, он может записывать информацию о сгибании-выпрямлении пальца на основе изменений емкости во время деформации (рис.4b, дополнительный фильм 2). Когда рука человека касается протеза пальца, биомиметическая кожа также может ощущать повышение температуры с уменьшением сопротивления в реальном времени (рис. 4c, дополнительный фильм 3). В соответствии с соотношением сопротивления и температуры около комнатной температуры, температура увеличивается примерно на 0,3 ° C, что примерно соответствует среднему изменению температуры, определенному на инфракрасном изображении протеза руки, сделанном сразу после удаления руки человека (рис.4г).

Рис. 4

Применения для измерения деформации и температуры и самовосстановления биомиметической кожи. a Фотография биомиметической кожи, прикрепленной к протезу пальца с помощью лент VHB. b Емкостные сигналы отслеживают движения пальцев. Фотография на вставке взята из дополнительного фильма 2. c Резистивные сигналы, когда рука человека касается протеза пальца. Фото-вставка взято из Дополнительного фильма 3. d Инфракрасное изображение протеза руки после удаления руки человека. e Фотография биомиметической кожи, слой гидрогеля которой разрезан пополам. f Фотография биомиметической кожи после самовосстановления. г Сопротивление и емкость биомиметической кожи до перелома и после самовосстановления. h Изменения емкости биомиметической кожи до перелома и после самовосстановления, когда он применяется для обнаружения сгибательно-выпрямляющего движения протеза пальца (емкость увеличивается, когда палец сгибается, и уменьшается, когда он выпрямляется).(Шкала: 2 см)

Помимо ощущения напряжения и температуры, эта биомиметическая кожа обладает такой же способностью к самовосстановлению, как и натуральная кожа. Когда слой ионно-проводящего гидрогеля биомиметической кожи разрезан пополам (рис. 4e), он может автономно восстанавливать трещину после соприкосновения (рис. 4f). В течение 20 минут ионное сопротивление и емкость могут быть восстановлены только с дрейфом примерно 0,04 и 0,9% соответственно (рис. 4g). Самовосстанавливающаяся биомиметическая кожа способна обнаруживать движение пальца и показывает аналогичные изменения емкости до перелома и после самовосстановления (рис.4ч). Кроме того, зависимости емкости-деформации, сопротивления-деформации и сопротивления-температуры восстанавливаются по мере самовосстановления ионно-проводящего гидрогеля (дополнительный рис. 23). Однако, если промышленный диэлектрический слой также поврежден, восстановление биомиметической оболочки будет ограничено эффективностью заживления диэлектрического слоя. Поскольку здесь ленты VHB могут склеиваться после разрезания пополам, ионное сопротивление и емкость также могут восстанавливаться в течение 20 минут (дополнительный рис.24).

Всесторонние характеристики этой биомиметической кожи сравниваются с характеристиками натуральной кожи и других искусственных кож на дополнительном рисунке 25. Эта платформа сочетает в себе широкий спектр механических свойств и множественные ощущения, которые редко были достигнуты в предыдущих работах, например, типичные искусственные кожи на основе растяжимого кремния 5 , полиакриламидных гидрогелей 9 и самовосстанавливающихся эластомеров 36 .

Кожа как эндокринный орган

Дерматоэндокринол.2009 сентябрь-октябрь; 1 (5): 250–252.

1, 2

Христос С. Зубулис

1 Отделения дерматологии, венерологии, аллергологии и иммунологии; Медицинский центр Дессау; Дессау, Германия

2 Лаборатория биогеронтологии, дерматофармакологии и дермато-эндокринологии; Институт клинической фармакологии и токсикологии; Charité Universitaetsmedizin Berlin; Берлин, Германия

1 Отделения дерматологии, венерологии, аллергологии и иммунологии; Медицинский центр Дессау; Дессау, Германия

2 Лаборатория биогеронтологии, дерматофармакологии и дермато-эндокринологии; Институт клинической фармакологии и токсикологии; Charité Universitaetsmedizin Berlin; Берлин, Германия

Автор, ответственный за переписку.

Поступила в редакцию 16 января 2009 г .; Принято 13 июля 2009 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Путем определения новых видов биологической активности гормонов и их разнообразия в отношении различных типов клеток кожи стало очевидно, что сама кожа обладает способностью вырабатывать несколько гормонов и веществ с гормоноподобной активностью. Эти вещества, по-видимому, действуют через паракринные, аутокринные, внутрикринные и эндокринные механизмы, выполняя свои плейотропные эффекты.Также новым является знание о том, что кожа может метаболизировать гормоны и производить производные с потенциально системной активностью. Эти результаты указывают на новые концепции в нашем понимании роли кожи и ее гормонов как важных игроков в гомеостазе и нарушениях всего человеческого организма. Наконец, ученые, работающие в области дермато-эндокринологии, ожидают, что в их деятельности будут использоваться фармакологические и терапевтические функции гормональных медиаторов, их рецепторов и антагонистов.Последняя идея уже реализована для кортикостероидов, андрогенов, эстрогенов, аналогов витамина D для местного применения и ретиноидов, которые сегодня занимают прочное место в клинической дерматологии.

Ключевые слова: кожа, человек, гормон, дерматология, эндокринология, физиология кожи

Кожа и гормоны

Историческая картина эндокринной системы как совокупности определенных органов, вырабатывающих гормоны, в настоящее время заменена концепцией организованные сообщества органов, в которых клетки излучают, получают и координируют молекулярные сигналы от удаленных источников, таких как установленные эндокринные органы, их соседей и самих себя ().Сложные эндокринные механизмы, такие как экспрессия и функция рецепторов определенных гормонов, синтез гормонов из основных классов соединений, используемых организмом для общих целей, устранение гормонов в специализированных клетках кожи и проявление биологической активности, также были идентифицированы в кожа. 1

Режимы действия гормона. Классические и современные эндокринные функции: гормоны, вырабатываемые установленными эндокринными органами или другими удаленными источниками, соответственно, достигают тканей-мишеней через кровообращение.Паракринная функция: гормоны действуют локально на клетки, отличные от тех, которые их производят. Функция юкстакрина: гормоны, вырабатываемые в одной клетке, напрямую взаимодействуют с рецептором соседней клетки. Аутокринная функция: гормоны действуют на клетки, в которых они вырабатываются. Внутрикринная функция: гормоны активируются в клетке, в которой они вырабатываются, и действуют на нее, связываясь с ядерными рецепторами.

Несмотря на эти знания, внимание к способности кожи человека удовлетворять текущим требованиям функций эндокринного органа было обращено только недавно. 2 5 Кожа человека классически считалась мишенью для нескольких гормонов, действие которых давно признано и в некоторых случаях хорошо охарактеризовано. Например, волосяные фолликулы и сальные железы являются мишенями для андрогенных стероидов, секретируемых гонадами и корой надпочечников. 6 , 7 Кроме того, гормоны играют важную роль в развитии и физиологической функции тканей кожи человека, 8 , 9 и, кроме того, гормоны также производятся в коже.Например, циркулирующие андрогены дегидроэпиандростерон (DHEA) и андростендион превращаются в коже различными путями в тестостерон или андростендион, а на периферии — в более мощный андроген 5α-дигидротестостерон (5α-DHT). 10 , 11 Таким образом, с современной дермато-эндокринологической точки зрения кожа является не только приемником сигналов от удаленных передатчиков, но и эндокринным органом. 12 , 13 В последние годы быстро накопились новые знания об экспрессии и функции специфических рецепторов гормонов, 14 синтез гормонов из основных классов соединений, используемых организмом для общих целей, 15 организованный метаболизм, 10 , 11 активация, инактивация и устранение гормонов в специализированных клетках кожи, 16 проявление биологической активности, 7 , 17 и высвобождение тканевых гормонов в тираж. 15 , 17

Рецепторы гормонов в коже человека

Гормоны оказывают свое биологическое действие на клетки кожи посредством связывания и взаимодействия с рецепторами высокой аффинности. Кожа человека экспрессирует рецепторы пептидных гормонов и нейротрансмиттеров, которые в основном расположены на поверхности клетки, а также рецепторы стероидных и тироидных гормонов, которые находятся в цитоплазме или ядерных компартментах. 1 , 7 , 15 , 18 20

Гормональная активность на коже человека

Гормоны проявляют плейотропно-биологические эффекты кожи , аутокринные, внутрикринные и эндокринные механизмы. 1 , 12 В частности, гормон роста / инсулиноподобный фактор роста-1, нейропептиды, половые стероиды, глюкокортикоиды, ретиноиды, витамин D, лиганды рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом, и эйкозаноиды являются основными примерами гормонов, действующих на кожа. 1 , 14

Синтез гормонов в коже человека

Кожа человека вырабатывает гормоны, которые выделяются в кровоток и важны для функций всего человеческого организма. 21 Основными примерами являются половые стероиды, тогда как большая часть андрогенов и эстрогенов у мужчин и женщин синтезируется локально в периферических тканях-мишенях из неактивных предшественников надпочечников DHEA и андростендиона. 10 , 11 , 16 DHEA и андростендион превращаются в тестостерон или в 5α-DHT различными путями за счет участия трех изотипов внутриклеточного фермента 5α-редуктазы и изотипов 17β. -гидроксистероиддегидрогеназа, 11 , 16 , таким образом делая кожу ответственной за значительные количества циркулирующих уровней 5α-DHT.Наилучшая оценка внутрикринного образования эстрогенов в периферических тканях у женщин составляет порядка 75% до менопаузы и близка к 100% после менопаузы, за исключением небольшого вклада тестостерона и андростендиона в яичниках и / или надпочечниках. 12 Таким образом, у женщин в постменопаузе почти все активные половые стероиды вырабатываются в тканях-мишенях по внутрикринному механизму.

Более того, уровни сообщений белка-3, связывающего инсулиноподобный фактор роста (IGF), выше в коже, чем в печени, а концентрации циркулирующего IGF-связывающего белка-3 значительно увеличиваются гормоном роста и IGF-1. 22 GH выполняет прямую функцию в регуляции синтеза IGF-связывающего белка-3, а реакция уровней мРНК IGF-связывающего белка-3 в коже как на GH, так и на IGF-I предполагает, что дермальные фибробласты могут быть более важными, чем печень в регуляции циркулирующего резервуара IGF-связывающего белка-3 при определенных обстоятельствах.

Наконец, что не менее важно, кожа человека вырабатывает гормоны, которые выделяются в кровоток и имеют постоянное значение для функций всего человеческого организма, такие как витамин D. 15 Кожа является уникальным местом синтеза холекальциферола, 23 , 24 , который является производным холестерина. Эпидермальные кератиноциты содержат механизмы, необходимые для производства кальцитриола и рецептора витамина D. 15 , 25

Активация и инактивация гормонов в коже человека

Помимо способности вырабатывать гормоны, кожа человека способна метаболизировать гормоны, чтобы активировать и инактивировать их.Эти шаги в большинстве случаев согласованно выполняются различными популяциями клеток кожи, что указывает на эндокринную автономию кожи. Характерными примерами этого вида эндокринной функции кожи являются метаболические пути оси кортикотропин-высвобождающий гормон / пропиомеланокортин, половые стероиды, витамин D и ретиноиды. 1 , 15 , 26

Сопутствующие заболевания

Сердечно-сосудистые заболевания, вызванные атеросклерозом, являющиеся наиболее частой причиной смертности и заболеваемости в западном мире, напрямую связаны с нарушениями липидного обмена. сахарный диабет и инсулинорезистентность.Нарушения функции щитовидной железы и метаболизма порфиринов возникают реже, но могут вызвать опасные для жизни ситуации, если их не распознать. Все эти, по крайней мере частично, эндокринологические нарушения связаны с характерными дерматозами, которые должны позволять раннюю диагностику и значимое вмешательство. 27 30 Дерматоэндокринология кажется шире, чем думают даже те, кто является инициатором этой области.

Эндокринологически активные соединения

Лечение кожных заболеваний с помощью гормональных медиаторов, их рецепторов и антагонистов является распространенной процедурой в дерматологии.Кортикостероиды, андрогены, эстрогены, аналоги витамина D для местного применения и ретиноиды сегодня занимают прочное место в дерматофармакологии. 13 , 15 , 18

Кожные болезни и проявления, связанные с сахарным диабетом. (а) атрофия кожи, (б) опрелость, вызванная кандидозом, (в) склеромикседема Арндта-Готтрона, (г) диабетический буллез, (д) ​​липоидный некробиоз, (е) черный акантоз, (ж) диссеминированная гранулема, (з) буллезная геморрагическая рожа (i) некроз периферических сосудов (гангрена).

Список литературы

1. Zouboulis CC. Кожа человека как гормональная мишень и эндокринная железа. Гормоны. 2004; 3: 9–26. [PubMed] [Google Scholar] 2. Зубулис CC, редактор. Фундаментальные исследования в эндокринной дерматологии. 3 rd Teupitzer Colloquium 2000, Teupitz, 17–20 сентября 2000 г. Horm Res. 2000; 54: 213–350. [Google Scholar] 3. Zouboulis CC, Degitz K. Действие андрогенов на кожу человека — от фундаментальных исследований до клинического значения. Exp Dermatol. 2004; 13: 5–10. [PubMed] [Google Scholar] 4. Бём М., Зубулис С.С., редакторы.Дермато-эндокринология. Exp Dermatol. 2004; 13: 3–40. [Google Scholar] 5. Зубулис CC, Bornstein SR, редакторы. Эндокринология кожи. Horm Metab Res. 2007. 39: 69–172. [PubMed] [Google Scholar] 6. Zouboulis CC, Picardo M, Reichrath J, редакторы. Сальная оболочка и волосистая часть как эндокринный орган. Дермато-эндокринология. 2009; 1: 63–107. [Google Scholar] 7. Зубулис С.К., Чен В., Торнтон М.Дж., Цинь К., Розенфилд Р.Л. Половые гормоны в коже человека. Horm Metab Res. 2007; 39: 85–95. [PubMed] [Google Scholar] 8.Деплевски Д., Розенфилд Р.Л. Роль гормонов в развитии волосяного покрова. Endocrine Rev.2000; 21: 363–392. [PubMed] [Google Scholar] 9. Стенн К.С., Паус Р. Контроль цикличности волосяных фолликулов. Physiol Rev.2001; 81: 449–494. [PubMed] [Google Scholar] 10. Чен В., Цай С.Дж., Цай Дж.С., Зубулис СС. Тестостерон, синтезируемый в культивируемых себоцитах человека SZ95, в основном происходит из дегидроэпиандростерона. Br J Dermatol. 2009. 161: 674–677. [PubMed] [Google Scholar] 11. Самсон М., Лабри Ф., Зубулис С.К., Луу-В.Биосинтез дигидротестостерона по пути, который не требует тестостерона в качестве промежуточного звена в клеточной линии сальной железы SZ95. J Invest Dermatol. 2009. В печати. [PubMed] 12. Лабрие Ф, Луу-Ви, Лабрие С, Пеллетье Джи, Эль-Альфи М. Интракринология и кожа. Horm Res. 2000; 54: 218–229. [PubMed] [Google Scholar] 13. Орфанос CE, Адлер Ю.Д., Зубулис CC. Синдром САГА. Horm Res. 2000; 54: 251–258. [PubMed] [Google Scholar] 15. Райхрат Дж., Леманн Б., Карлберг С., Варани Дж., Зубулис С.С. Витамины как гормоны.Horm Metab Res. 2007; 39: 71–84. [PubMed] [Google Scholar] 16. Fritsch M, Orfanos CE, Zouboulis CC. Себоциты являются ключевыми регуляторами гомеостаза андрогенов в коже человека. J Invest Dermatol. 2001; 116: 793–800. [PubMed] [Google Scholar] 17. Krämer C, Seltmann H, Seifert M, Tilgen W, Zouboulis CC, Reichrath J. Характеристика эндокринной системы витамина D в себоцитах человека in vitro. Дж. Стероид Биохим Мол Биол 2. 2009; 113: 9–16. [PubMed] [Google Scholar] 18. Чен В., Тибуто Д., Зубулис СС. Кожный метаболизм андрогенов — фундаментальные исследования и клинические перспективы.J Invest Dermatol. 2002; 119: 992–1007. [PubMed] [Google Scholar] 20. Schmuth M, Watson REB, Deplewski D, Dubrac S, Zouboulis CC, Griffiths CEM. Рецепторы ядерных гормонов в коже человека. Horm Metab Res. 2007; 39: 96–105. [PubMed] [Google Scholar] 21. Цао Т., Цай С.Ю., О’Мэлли Б.В., Ван XJ, Руп Д.Р. Эпидермис как биореактор: местно регулируемая доставка в кровоток через кожу. Hum Gene Ther. 2002; 13: 1075–1080. [PubMed] [Google Scholar] 22. Лемми А.Б., Глассфорд Дж., Флик-Смит Х.С., Холли Дж. М., Пелл Дж. М..Дифференциальная регуляция тканевого белка, связывающего инсулиноподобный фактор роста (IGFBP) -3, уровней мРНК рецепторов IGF-I и IGF типа 1, а также концентраций IGF-I и IGFBP в сыворотке гормоном роста и IGF-I. J Endocrinol. 1997. 154: 319–328. [PubMed] [Google Scholar] 23. Schuessler M, Astecker N, Herzig G, Vorisek G, Schuster I. Кожа — это автономный орган в синтезе, двухступенчатой ​​активации и деградации витамина D (3): CYP27 в эпидермисе дополняет набор незаменимого витамина D (3) — гидроксилазы. Стероиды.2001; 66: 399–408. [PubMed] [Google Scholar] 24. Lehmann B, Knuschke P, Meurer M. Новый путь гормонально активного кальцитриола. Horm Res. 2000; 54: 312–315. [PubMed] [Google Scholar] 25. Adorini L. Иммуномодулирующие эффекты лигандов рецепторов витамина D при аутоиммунных заболеваниях. Int Immunopharmacol. 2002; 2: 1017–1028. [PubMed] [Google Scholar] 26. Zouboulis CC, Böhm M. Нейроэндокринная регуляция себоцитов — патогенетическая связь между стрессом и акне. Exp Dermatol. 2004; 13: 31–35. [PubMed] [Google Scholar] 27.Pitambe HV, Schulz EJ. Опасные для жизни дерматозы из-за метаболических и эндокринных нарушений. Clin Dermatol. 2005. 23: 258–266. [PubMed] [Google Scholar] 28. Zouboulis CC, Blume-Peytavi U, Lennert T., Stavropoulos PG, Schwarz A, Runkel N, et al. Фульминантный метастатический кальциноз с некрозом кожи у ребенка с терминальной стадией почечной недостаточности и третичным гиперпаратиреозом. Brit J Dermatol. 1996. 135: 617–622. [PubMed] [Google Scholar] 29. Адлер Ю.Д., Зубулис СС, Гейлен СС, Орфанос СЕ. Eine seltene Variante des SAHA Syndroms.Z Hautkr. 2000. 76: 327–328. [Google Scholar] 30. Штайнхофф М., Рохлитц Х., Нуссбаум Г, Георгиева Дж., Зубулис С.С. Уменьшение роста бороды как единственный диагностический признак у пациента с макропролактиномой. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2007. 21: 124–126. [PubMed] [Google Scholar]

Полностью мягкий мультиаксиальный датчик силы на основе жидкого металла для электронной кожи | Письма Micro and Nano Systems

Для исследования реакции многоосного датчика силы был реализован трехосевой датчик нагрузки (SM-50 N, CAS Korea) для мониторинга силы, приложенной к датчику в направлениях x, y и z. и линейный столик с нагружающим наконечником для нагружения с управляемым смещением (рис.4a) Каждый микроканал LM был подключен к 8-канальному считывателю АЦП (ADS1114, Texas Instruments), установленному на Arduino DUE (Arduino). Микроканалы LM были обозначены как x1, x2, x3 и x4, как показано на рис. 4b. В исходном состоянии (F = 0) напряжение составляет примерно 20 мВ, а соответствующее ему сопротивление составляет примерно 0,4 Ом из-за высокой электропроводности жидкого металла. Благодаря схеме деления напряжения и считывателю АЦП с высоким разрешением можно было отслеживать небольшие изменения напряжения.

Фиг.4

Характеристики производительности. a Экспериментальная установка. b Схематический вид датчика. (x1 – x4: метки для каждого микроканала LM, H : высота купола и D : диаметр купола) c Отклик датчика с высотой купола ( H ) 0,9 мм до нормальная направленная сила. d Реакция в реальном времени на различные нагрузки e Отклик датчика, когда H составляет 2,2 мм. f Чувствительность к смещению в зависимости от высоты купола

В купольном датчике положения внутренней пары микроканалов LM и внешней пары геометрически симметричны, соответственно.(x2 и x3: внутренняя пара, x1 и x4: внешняя пара). Таким образом, реакции сенсоров каждой пары на приложенную нормальную силу показали аналогичную тенденцию. Когда была приложена нормальная сила 1,2 Н, относительные изменения напряжения (ΔV / V 0 ) внутренней пары увеличились до 12,1 и 15,8 соответственно. С другой стороны, ответы x1 и x4 внешней пары были только 0,4 и 0,8 соответственно (рис. 4c). Это означает, что разработанные многоосные датчики силы могут различать направление приложенной силы, используя различное положение микроканала LM путем изменения геометрии купола.Кроме того, отклики датчиков восстанавливались до исходных значений после различных циклов нагружения благодаря превосходной стабильности жидкого металла и конструкции датчика (рис. 4d). Между тем, когда высота купола ( H ) увеличилась до 2,2 мм, пара внешних датчиков показала несколько иные ответы: отклик x1 начал увеличиваться после 0,5 N, а ответ x4 увеличился после 1 N (рис. 4e. ). Это связано с разным зазором между микроканалами LM вдоль купола.

Кривые сила-смещение в зависимости от разной высоты купола были измерены для проверки чувствительности датчика. Когда H увеличивается, меньшая сила прилагается при том же смещении, и чувствительность датчика уменьшается (рис. 4f). Например, для приложения нормальной силы 1 Н требуется смещение 200 мкм для высоты купола H = 0,9 мм, а смещение 900 мкм требуется для H = 2,2 мм. Когда сила, приложенная к датчику без куполообразной конструкции ( H = 0 мм), отклик резко возрастает с увеличением нагрузки.По мере увеличения H требуется большее смещение для приложения силы. Кроме того, купол с увеличенным размером H обеспечивает большее радиальное смещение между соседними каналами, что приводит к различному поведению отклика матрицы датчиков. Эти характеристики приводят к разнице в чувствительности мультиаксиального датчика относительно высоты и диаметра купола. Кроме того, диаметр купола также повлияет на зазор между каналами для жидкого металла, хотя в нашем исследовании это не рассматривается.

Характеристики разработанного датчика исследовались на плоских поверхностях, где возможен точный контроль направления и величины силы. С другой стороны, когда датчик расположен на изогнутых или волнистых поверхностях, тенденция или поведение датчика будет другим, поскольку микроканалы деформируются, что требует дополнительной калибровки исходного состояния. Определение характеристик датчика на поверхности с различной геометрией выходит за рамки данного исследования и остается в качестве будущей работы для практического применения электронной кожи.

Оценка пребиотических свойств кожуры миндаля (Amygdalus communis L.) in vitro | Письма о микробиологии FEMS

Аннотация

В этом исследовании мы исследовали потенциальный пребиотический эффект натуральной (NS) и бланшированной (BS) кожуры миндаля, которая является побочным продуктом промышленности по переработке миндаля. Была использована полная модель желудочно-кишечного тракта, включая in vitro, желудочное и двенадцатиперстное пищеварение с последующей ферментацией в толстой кишке с использованием смешанных фекальных бактериальных культур.И NS, и BS значительно увеличили популяцию бифидобактерий и Clostridium coccoides / Eubacterium rectale , что привело к получению пребиотического индекса (3,2 для BS и 3,3 для NS), который хорошо сравнивался с коммерческими пребиотическими фруктоолигосахаридами (4,2) при 24-часовая инкубация. Не было обнаружено значительных различий в доле групп кишечных бактерий и в продукции короткоцепочечных жирных кислот между NS и BS, что показывает, что полифенолы, присутствующие в кожуре миндаля, не влияют на бактериальную ферментацию.В заключение мы показали, что пищевые волокна из кожуры миндаля изменили состав кишечных бактерий, а кожура миндаля, возникшая в результате промышленного бланширования, может быть использована в качестве потенциальных пребиотиков.

Введение

Кожура миндаля ( Amygdalus communis L.), как известно, обладает рядом полезных питательных свойств, в основном за счет наличия полифенолов и высокого (12%) содержания пищевых волокон (Mandalari et al. , 2010). Стенки миндальных клеток (пищевые волокна) устойчивы к расщеплению ферментов в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, и это может иметь значение для управления массой тела: липиды, не высвобождаемые при жевании, недоступны для абсорбции в кишечнике (Ellis et al., 2004; Mandalari et al. , 2008а). Физиологические свойства пищевых волокон были широко исследованы, растворимые фракции с основными эффектами на всасывание глюкозы и липидов при лечении диабета (Mann et al. , 2004), а нерастворимые фракции медленно и не полностью ферментируются в толстой кишке. , с несколькими благоприятными эффектами на функцию толстой кишки, включая привычку кишечника, транзит, метаболизм и баланс комменсальной флоры в толстой кишке (Costabile et al., 2008). Состав микробиоты толстой кишки устанавливается при рождении и сразу после него, становясь все более сложным с возрастом (Blaut et al. , 2002). Пребиотики — это пищевые продукты или пищевые ингредиенты, способные регулировать микробиоту толстой кишки и характеризующиеся их устойчивостью к кислотности желудочного сока, гидролизу ферментами млекопитающих и всасыванию в желудочно-кишечном тракте. Они ферментируются кишечной микробиотой и вызывают избирательную стимуляцию роста и / или активности кишечных бактерий, связанных со здоровьем и благополучием (Gibson & Roberfroid, 1995; Mandalari et al., 2007). Роберфроид (2007) определил пребиотик как «селективно ферментированный ингредиент, который допускает определенные изменения как в составе, так и / или активности желудочно-кишечного микробного сообщества, что приносит пользу благополучию и здоровью хозяина».

Здесь мы описываем потенциальный пребиотический эффект кожуры миндаля, используя полную модель пищеварения желудочно-кишечного тракта, которая включает среду желудка и тонкого кишечника, и модель толстой кишки, состоящую из in vitro ферментационных систем с репрезентативными кишечными бактериями человека.Кожура миндаля имеет высокое содержание клетчатки, большая часть которой нерастворима, а также значительное количество липидов (Mandalari et al. , 2010). Бланшированная кожица миндаля, промышленно удаленная с ореха путем бланширования в горячей воде, составляет 4–8% от общей массы очищенного миндаля и считается побочными продуктами, которые, если их не обрабатывать, выбрасываются как отходы.

Материалы и методы

Шкурка миндаля

Натуральный миндаль (Maisie Jane’s, Калифорния) любезно предоставлен Миндальным советом Калифорнии и хранится в темноте.Кожу натурального миндаля (NS) удаляли обработкой жидким азотом, как описано ранее (Mandalari et al. , 2010). Шкуры размалывали с использованием аналитической мельницы (Janke & Kunkel A10). Бланшированные и сушеные кожуры миндаля (BS), произведенные ABCO Laboratories (порошок кожуры миндаля 1912 г.), были поставлены Миндальным советом Калифорнии.

In vitro исследования пищеварения

Моделирование желудочно-кишечного переваривания NS и BS было выполнено с использованием протокола, описанного ранее (Mandalari et al., 2008а). Вкратце, для желудочного переваривания 1,5 г каждого продукта из кожи миндаля (NS, BS) суспендировали в 12,4 мл кислого солевого раствора (150 мМ NaCl, pH 2,5) и при необходимости доводили до pH 2,5 с помощью HCl. Затем добавляли суспензию везикул фосфатидилхолина, пепсин и аналог желудочной липазы так, чтобы конечные концентрации в водной фазе составляли 2,4 ммоль л -1 , 146 и 60 ед. Мл -1 , соответственно. Образцы помещали в инкубатор с орбитальным встряхиванием (170 об / мин, 37 ° C) на 2 часа.В качестве исходного материала для моделирования пищеварения двенадцатиперстной кишки использовали in vitro желудочного переваривания NS и BS. PH был увеличен до 6,5 добавлением NaOH и растворов солей желчных кислот, CaCl 2 , бис-трис и ферментов в 150 ммоль л -1 NaCl добавили, так что конечные концентрации были следующими: 4 ммоль л -1 таурохолат натрия, 4 ммоль л -1 гликодеоксихолат натрия, 11,7 ммоль л -1 CaCl 2 , 0,73 ммоль л -1 Bis-Tris буфер (pH 6.5), 5,9 ед. Мл −1 α-химотрипсина, 104 ед. Мл −1 трипсина, 3,2 мкг мл −1 колипазы, 54 ед. Мл −1 липазы поджелудочной железы и 25 ед. Мл −1 α -амилаза. Образцы помещали в инкубатор с орбитальным встряхиванием (170 об / мин, 37 ° C) на 1 час. Каждое расщепление in vitro с проводили не менее трех раз с твердым материалом, извлеченным для анализа.

Определение содержания липидов

Общий липид NS и BS после in vitro пищеварения желудка и желудка плюс двенадцатиперстная кишка определяли гравиметрически путем экстракции n -гексаном и выражали в% сухой массы (Mandalari et al., 2008а).

Анализ общего белка

Общее содержание белка в NS и BS и твердых остатках, извлеченных после in vitro переваривания желудка и двенадцатиперстной кишки, было проанализировано на общий азот по методу Кьельдаля, как сообщалось ранее (Mandalari et al. , 2008a). Значения были выражены как N × 6,25.

Определение пищевых волокон

Общие пищевые волокна (TDF), нерастворимые пищевые волокна (IDF) и растворимые пищевые волокна (SDF) были измерены в обезжиренных образцах NS, BS и post in vitro переваривания желудка и двенадцатиперстной кишки с использованием ферментно-гравиметрического метода AOAC, как описано ранее. (Mandalari et al., 2008а). Вкратце, трижды обезжиренные образцы NS и BS инкубировали при 100 ° C с термостабильной α-амилазой, затем при 60 ° C с протеазой и, наконец, с раствором амилоглюкозидазы. TDF, IDF и SDF были скорректированы на остаточный белок и золу. Опыты проводились в двух экземплярах.

Анализ клеточной стенки

Материал клеточной стенки получали из NS и BS после переваривания желудка и двенадцатиперстной кишки с использованием метода, описанного ранее (Mandalari et al., 2008а). Анализ сахара проводили путем кислотного гидролиза полисахаридов с последующим восстановлением, ацетилированием и количественным определением ацетатов альдита с помощью газожидкостной хроматографии с использованием методов, адаптированных из Blakeney et al. (1983). Общие уроновые кислоты определяли колориметрически при 580 нм по стандартной кривой галактуроновой кислоты с использованием метода Blumenkrantz & Asboe-Hansen (1973). Галактуроновую кислоту и глюкуроновую кислоту этим методом не различают.

Определение фенолов

Определение фенольных соединений и флавоноидов NS и BS, а также твердых остатков, извлеченных после переваривания in vitro желудка и двенадцатиперстной кишки, проводили с использованием системы ВЭЖХ Shimadzu, оснащенной детектором на матрице фотодиодов в УФ-видимом диапазоне и детектором флуоресценции (Hewlett Packard 1046A) .Детектирование проводили при 270 нм для гидроксибензойных кислот и флаванонов и при 370 нм для флавонолов. УФ-спектры различных соединений записывали от 240 до 400 нм. Длины волн, использованные для флуоресцентного детектирования флаван-3-олов, были: λ из , 276 нм; λ em , 316 нм. Сбор данных выполняли с использованием программного обеспечения для химической станции class-vp5 (Shimadzu, Япония), как сообщалось ранее (Mandalari et al. , 2010).

Периодическая ферментация фекалий

Сосуды для ферментера с водяной рубашкой (300 мл), заполненные 135 мл предварительно стерилизованной основной питательной среды (2 г л -1 пептонная вода, 2 г л -1 дрожжевой экстракт, 0.1 г л -1 NaCl, 0,04 г л -1 K 2 HPO 4 , 0,04 г л -1 KH 2 PO 4 , 0,01 г л -1 MgSO 4 · 7H 2 O, 0,01 г л -1 CaCl 2 · 6H 2 O, 2 г л -1 NaHCO 3 , 2 мл Твин 80, 0,02 г л -1 гемина, 10 мкл витамина К 1 , 0,5 г л -1 цистеина HCl, 0,5 г л -1 ( желчных солей, pH 7,0) инокулировали 15 мл фекальной суспензии, приготовленной путем гомогенизации 10% масс. v свежий фекальный материал одного здорового донора из 0.1 M фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), pH 7,0. Добавляли экстракт кожуры миндаля (NS или BS после переваривания) или фруктоолигосахариды (FOS) до конечной концентрации 1% (мас. / Об.). Отрицательный контроль проводили без добавления в сосуды ферментера. Каждый сосуд перемешивали с помощью магнитной мешалки, температуру устанавливали на 37 ° C и pH автоматически поддерживали на уровне 6,8. Анаэробные условия поддерживали путем барботирования сосудов бескислородным азотом при 15 мл мин. -1 . Образцы (5 мл) отбирали через 0, 4, 8 и 24 ч для подсчета бактерий и анализа жирных кислот.Ферментацию проводили в трех разных случаях.

Подсчет бактерий

Бактерии подсчитывали с помощью FISH (Rycroft et al. , 2001). Дублированные образцы ферментации разбавляли в четыре раза 4% (вес. / Об.) Фильтрованным параформальдегидом и фиксировали в течение ночи при 4 ° C. Затем образцы дважды промывали фильтрованным PBS (0,1 M, pH 7,0) и хранили при -20 ° C в PBS / этаноле (1: 1, об. / Об.) До дальнейшего анализа. Гибридизацию проводили при оптимальной температуре с использованием геноспецифичных олигонуклеотидных зондов, нацеленных на 16S рРНК, меченных флуоресцентным красителем Cy3 для различных бактериальных групп или 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом для общего числа клеток.Использованные зонды были Bif164, специфичными для Bifidobacterium (Langendijk et al. , 1995), Bac303, специфичными для Bacteroides (Manz et al. , 1996), Lab158, специфичными для Lactobacillus /00 Enterocppoccus. (Harmsen et al. , 1999), His150, специфичный для большинства видов группы Clostridium hystolyticum (кластеры Clostridium I и II) (Franks et al. , 1998) и EREC482, специфичный для большей части Clostridium coccoides Группа Eubacterium rectale ( кластеры Clostridium XIVa и XIVb) (Corcoran et al., 2007).

Анализ короткоцепочечных жирных кислот (SCFA)

Образцы (1 мл) были удалены из ферментера периодической культуры и центрифугированы при 15 000 g в течение 5 мин; 20 мкл супернатанта вводили в систему ВЭЖХ, оборудованную детектором показателя преломления, как описано ранее (Mandalari et al. , 2008b). Количественное определение органических кислот проводили с использованием калибровочных кривых для уксусной, пропионовой, масляной и молочной кислот в концентрациях от 0.5 и 100 мМ, а результаты выражены в ммоль л -1 .

Статистический анализ

Различия между числом бактерий при 0, 8 и 24 часах ферментации для каждой партии культуры проверяли на достоверность парным тестом t , предполагая нормальное распределение, равные отклонения и учитывая обе стороны распределения. Различия считались значимыми, когда значение P было <0,05.

Результаты

Характеристика кожуры миндаля после моделирования пищеварения

В таблице 1 показан общий состав двух продуктов из кожуры миндаля (NS и BS) до и после желудочно-кишечного переваривания.Эти фракции впоследствии были использованы в качестве субстратов для модели толстой кишки. Концентрация сахара в кожуре миндаля существенно не изменилась после переваривания, галактуроновая кислота и глюкоза были основными присутствующими сахарами (36% и 29% от общего количества, соответственно), за которыми следовали арабиноза (18%) и ксилоза (8%). От 18% до 20% липидов и белков высвобождались из кожуры миндаля после переваривания in vitro желудка и двенадцатиперстной кишки, причем стадия желудочного переваривания отвечает за максимальную степень липолиза и протеолиза.На рисунке 1 показаны четыре основные группы полифенолов кожуры миндаля, присутствующие в NS и BS после in vitro пищеварения в желудке и двенадцатиперстной кишке. Более высокие выбросы флавоноидов и фенольных кислот во время пищеварения наблюдались с NS по сравнению с BS, причем NS были более биодоступными, чем BS, как после желудочного, так и после желудочного и двенадцатиперстного переваривания. Однако NS по-прежнему содержали более высокие количества полифенолов после переваривания: почти в 10 раз большее количество флаванолов и гидроксикоричной кислоты наблюдалось в NS по сравнению с BS, за исключением флаван-3-олов, присутствующих в более высоких количествах в BS.Основными идентифицированными полифенолами были катехин, эпикатехин, изорамнетин и кемпферол вместе с их производными сахаров.

1

Химический состав (выраженный в г 100 г -1 ) натуральной (NS) или бланшированной (BS) кожуры миндаля до и после in vitro переваривание желудка и двенадцатиперстной кишки

Питательные вещества До in vitro переваривание желудка и двенадцатиперстной кишки После in vitro переваривание желудка и двенадцатиперстной кишки
NS BS NS BS
Общее количество пищевых волокон 47.5 ± 2,6 45,1 ± 1,9 45,5 ± 3,9 46,3 ± 1,5
Растворимые пищевые волокна 2,7 ± 0,4 3,8 ± 0,5 3,9 ± 0,4 4,5 ± 0,6
Липид 22,2 ± 1,4 24,2 ± 2,1 22,4 ± 1,6 25,6 ± 2,0
Белок 10,3 ± 0,8 12,8 ± 0,7 10,6 ± 0,5 13,4 ± 1,0
Всего пищевых волокон
Питательное вещество До in vitro желудочное и двенадцатиперстное пищеварение После in vitro желудочное и двенадцатиперстное пищеварение
NS BS NS BS
47.5 ± 2,6 45,1 ± 1,9 45,5 ± 3,9 46,3 ± 1,5
Растворимые пищевые волокна 2,7 ± 0,4 3,8 ± 0,5 3,9 ± 0,4 4,5 ± 0,6
Липид 22,2 ± 1,4 24,2 ± 2,1 22,4 ± 1,6 25,6 ± 2,0
Белок 10,3 ± 0,8 12,8 ± 0,7 10,6 ± 0,5 13,4 ± 1,0
1

Химический состав (выраженный в г 100 г −1 ) натуральной (NS) или бланшированной (BS) кожуры миндаля до и после in vitro переваривание желудка и двенадцатиперстной кишки

90 042
Питательные вещества До in vitro желудочное и двенадцатиперстное пищеварение После in vitro желудочное и двенадцатиперстное пищеварение
NS BS NS BS
Всего пищевых волокон 47.5 ± 2,6 45,1 ± 1,9 45,5 ± 3,9 46,3 ± 1,5
Растворимые пищевые волокна 2,7 ± 0,4 3,8 ± 0,5 3,9 ± 0,4 4,5 ± 0,6
Липид 22,2 ± 1,4 24,2 ± 2,1 22,4 ± 1,6 25,6 ± 2,0
Белок 10,3 ± 0,8 12,8 ± 0,7 10,6 ± 0,5 13,4 ± 1,0
Всего пищевых волокон
Питательное вещество До in vitro желудочное и двенадцатиперстное пищеварение После in vitro желудочное и двенадцатиперстное пищеварение
NS BS NS BS
47.5 ± 2,6 45,1 ± 1,9 45,5 ± 3,9 46,3 ± 1,5
Растворимые пищевые волокна 2,7 ± 0,4 3,8 ± 0,5 3,9 ± 0,4 4,5 ± 0,6
Липид 22,2 ± 1,4 24,2 ± 2,1 22,4 ± 1,6 25,6 ± 2,0
Белок 10,3 ± 0,8 12,8 ± 0,7 10,6 ± 0,5 13,4 ± 1,0

1

Основные группы флавоноидов и фенольных кислот в кожуре миндаля после моделирования пищеварения человека (черные полосы — BS; белые полосы — NS).Значения выражены в мг г -1 кожи и представляют собой среднее значение трех определений.

1

Основные группы флавоноидов и фенольных кислот в кожуре миндаля после моделирования пищеварения человека (черные полосы — BS; белые полосы — NS). Значения выражены в мг г -1 кожи и представляют собой среднее значение трех определений.

Ферментация периодических культур

Результаты определения количества бактерий при периодической ферментации, использованные для мониторинга эффекта NS, BS и FOS на рост смешанной бактериальной популяции в толстой кишке человека, показаны в таблице 2.После 24-часовой инкубации наблюдалось значительное увеличение общих уровней бактерий с NS, BS и FOS, что сопровождалось увеличением количества бифидобактерий, Lactobacillus / Enterococcus spp. и группа C. coccoides / E. rectale после 8- и 24-часовой инкубации. По сравнению с контролем, популяция Bacteroides не претерпела значительных изменений после 8- и 24-часовой инкубации, в то время как значительный рост популяции Lactobacillus / Enterococcus spp.числа наблюдались только после добавления FOS. Увеличение численности C. coccoides / E. rectale наблюдалось в присутствии NS, BS и FOS, при переваривании кожуры миндаля наблюдалось большее увеличение после 24-часовой инкубации. Все исследуемые фракции также стимулировали рост бифидобактерий, причем их количество увеличивалось на 0,50 и 0,64 log через 8 ч с кожурой миндаля и ФОС, соответственно. Виды группы C. hystolyticum ( Clostridium кластеры I и II) уменьшились после добавления всех фракций.Существенных различий между NS и BS, их действием на бифидобактерии, Lactobacillus / Enterococcus spp. Не наблюдалось. и C. coccoides, / E. rectale, количество является оптимальным после 8-часовой инкубации.

2

Изменения в бактериальной популяции (log 10 клеток мл -1 ) в периодических культурах после 8- и 24-часовой инкубации

0,035 0,03 8,6
Время инкубации (ч) Контроль FOS NS BS
Всего бактерий 0 9.15 ± 0,06
8 9,24 ± 0,04 9,25 ± 0,03 9,28 ± 0,08 9,27 ± 0,03
24 9,24 ± 0,04 9,42 ± 0,05 9,37 ± 0,10 9,37 ± 0,02
Бифидобактерии 0 8,11 ± 0,03
8 8,14 ± 0.13 8,75 ± 0,02 8,61 ± 0,10 8,61 ± 0,07
24 8,19 ± 0,07 8,65 ± 0,02 8,53 ± 0,17 8,55 ± 0,11
Бактероиды 9010 0 8,26 ± 0,03
8 8,30 ± 0,05 8,29 ± 0,05 8,10 ± 0,11 8,08 ± 0,13
24 8.28 ± 0,11 8,35 ± 0,21 8,30 ± 0,10 8,31 ± 0,11
Clostridium hystolyticum группа 0 7,47 ± 0,04
8 7,51 ± 0,03 7,01 ± 0,01 7,31 ± 0,07 7,25 ± 0,03
24 7,59 ± 0,01 7,33 ± 0,07 7,32 ± 0.03 7,45 ± 0,08
Clostridium coccoides / Eubacterium rectale группа 0 8,33 ± 0,04
8 8,37 ± 0,03 8,70 ± 0,03 8,69 ± 0,02
24 8,38 ± 0,06 8,58 ± 0,15 8,86 ± 0,04 8,84 ± 0,05
Lactobacillus / Enterococcus s 0 7,55 ± 0,04
8 7,57 ± 0,03 7,89 ± 0,05 7,72 ± 0,10 7,70 ± 0,07
24 7,58 ± 0,04 7,92 ± 0,07 7,67 ± 0,10 7,71 ± 0,01
0,035 0,03 8,6
Время инкубации (ч) Контроль FOS NS BS
Всего бактерий 0 9.15 ± 0,06
8 9,24 ± 0,04 9,25 ± 0,03 9,28 ± 0,08 9,27 ± 0,03
24 9,24 ± 0,04 9,42 ± 0,05 9,37 ± 0,10 9,37 ± 0,02
Бифидобактерии 0 8,11 ± 0,03
8 8,14 ± 0.13 8,75 ± 0,02 8,61 ± 0,10 8,61 ± 0,07
24 8,19 ± 0,07 8,65 ± 0,02 8,53 ± 0,17 8,55 ± 0,11
Бактероиды 9010 0 8,26 ± 0,03
8 8,30 ± 0,05 8,29 ± 0,05 8,10 ± 0,11 8,08 ± 0,13
24 8.28 ± 0,11 8,35 ± 0,21 8,30 ± 0,10 8,31 ± 0,11
Clostridium hystolyticum группа 0 7,47 ± 0,04
8 7,51 ± 0,03 7,01 ± 0,01 7,31 ± 0,07 7,25 ± 0,03
24 7,59 ± 0,01 7,33 ± 0,07 7,32 ± 0.03 7,45 ± 0,08
Clostridium coccoides / Eubacterium rectale группа 0 8,33 ± 0,04
8 8,37 ± 0,03 8,70 ± 0,03 8,69 ± 0,02
24 8,38 ± 0,06 8,58 ± 0,15 8,86 ± 0,04 8,84 ± 0,05
Lactobacillus / Enterococcus s 0 7,55 ± 0,04
8 7,57 ± 0,03 7,89 ± 0,05 7,72 ± 0,10 7,70 ± 0,07
24 7,58 ± 0,04 7,92 ± 0,07 7,67 ± 0,10 7,71 ± 0,01
2

Изменения бактериальной популяции (log 10 клеток мл -1 ) в периодических культурах после 8- и 24-часовой инкубации

0,035 0,03 8,6
Время инкубации (ч) Контроль FOS NS BS
Всего бактерий 0 9.15 ± 0,06
8 9,24 ± 0,04 9,25 ± 0,03 9,28 ± 0,08 9,27 ± 0,03
24 9,24 ± 0,04 9,42 ± 0,05 9,37 ± 0,10 9,37 ± 0,02
Бифидобактерии 0 8,11 ± 0,03
8 8,14 ± 0.13 8,75 ± 0,02 8,61 ± 0,10 8,61 ± 0,07
24 8,19 ± 0,07 8,65 ± 0,02 8,53 ± 0,17 8,55 ± 0,11
Бактероиды 9010 0 8,26 ± 0,03
8 8,30 ± 0,05 8,29 ± 0,05 8,10 ± 0,11 8,08 ± 0,13
24 8.28 ± 0,11 8,35 ± 0,21 8,30 ± 0,10 8,31 ± 0,11
Clostridium hystolyticum группа 0 7,47 ± 0,04
8 7,51 ± 0,03 7,01 ± 0,01 7,31 ± 0,07 7,25 ± 0,03
24 7,59 ± 0,01 7,33 ± 0,07 7,32 ± 0.03 7,45 ± 0,08
Clostridium coccoides / Eubacterium rectale группа 0 8,33 ± 0,04
8 8,37 ± 0,03 8,70 ± 0,03 8,69 ± 0,02
24 8,38 ± 0,06 8,58 ± 0,15 8,86 ± 0,04 8,84 ± 0,05
Lactobacillus / Enterococcus s 0 7,55 ± 0,04
8 7,57 ± 0,03 7,89 ± 0,05 7,72 ± 0,10 7,70 ± 0,07
24 7,58 ± 0,04 7,92 ± 0,07 7,67 ± 0,10 7,71 ± 0,01
0,035 0,03 8,6
Время инкубации (ч) Контроль FOS NS BS
Всего бактерий 0 9.15 ± 0,06
8 9,24 ± 0,04 9,25 ± 0,03 9,28 ± 0,08 9,27 ± 0,03
24 9,24 ± 0,04 9,42 ± 0,05 9,37 ± 0,10 9,37 ± 0,02
Бифидобактерии 0 8,11 ± 0,03
8 8,14 ± 0.13 8,75 ± 0,02 8,61 ± 0,10 8,61 ± 0,07
24 8,19 ± 0,07 8,65 ± 0,02 8,53 ± 0,17 8,55 ± 0,11
Бактероиды 9010 0 8,26 ± 0,03
8 8,30 ± 0,05 8,29 ± 0,05 8,10 ± 0,11 8,08 ± 0,13
24 8.28 ± 0,11 8,35 ± 0,21 8,30 ± 0,10 8,31 ± 0,11
Clostridium hystolyticum группа 0 7,47 ± 0,04
8 7,51 ± 0,03 7,01 ± 0,01 7,31 ± 0,07 7,25 ± 0,03
24 7,59 ± 0,01 7,33 ± 0,07 7,32 ± 0.03 7,45 ± 0,08
Clostridium coccoides / Eubacterium rectale группа 0 8,33 ± 0,04
8 8,37 ± 0,03 8,70 ± 0,03 8,69 ± 0,02
24 8,38 ± 0,06 8,58 ± 0,15 8,86 ± 0,04 8,84 ± 0,05
Lactobacillus / Enterococcus s 0 7,55 ± 0,04
8 7,57 ± 0,03 7,89 ± 0,05 7,72 ± 0,10 7,70 ± 0,07
24 7,58 ± 0,04 7,92 ± 0,07 7,67 ± 0,10 7,71 ± 0,01

Чтобы получить общую количественную оценку пребиотического эффекта, был рассчитан пребиотический индекс (ИП) (Palframan et al., 2003). PI представляет собой сравнительную взаимосвязь между ростом «полезных» бактерий, таких как бифидобактерии, номерами Lactobacilli и E. rectale , и «менее желательными» бактериями, такими как Clostridia и Bacteroides , в соотношении к изменению общей численности бактерий (рис. 2). Для всех субстратов значения PI, полученные при 8-часовой инкубации, были выше, чем при 24-часовой, при этом FOS давал самые высокие значения во все тестируемые моменты времени.Никаких значительных различий между NS и BS не наблюдалось, при этом значение PI немного выше для BS (4,2), чем для NS (4,1) после 8-часовой инкубации, тогда как значение PI было немного ниже через 24 часа для BS (3,2) по сравнению с с NS (3.3).

2

Показатели PI для периодических культур через 8 часов (черные столбцы) и 24 часа (белые столбцы) с использованием фруктоолигосахаридов (FOS), предварительно переваренной бланшированной кожуры миндаля (BS) и предварительно переваренной кожуры натурального миндаля (NS) по сравнению с необработанными ( контроль) культур.

2

Показатели PI для периодических культур через 8 часов (черные столбцы) и 24 часа (белые столбцы) с использованием фруктоолигосахаридов (FOS), предварительно переваренной бланшированной кожуры миндаля (BS) и предварительно переваренной кожицы натурального миндаля (NS) по сравнению с необработанными (контрольные) культуры.

Производство SCFA и лактата во время ферментации

Концентрации молочной, уксусной, пропионовой и масляной кислот, продуцируемые во время ферментации in vitro , показаны в таблице 3. FOS давал наивысшее общее продуцирование SCFA во все тестируемые моменты времени.Существенных различий в SCFAs между NS и BS не наблюдалось. Концентрации пропионовой и масляной кислот увеличивались через 8 часов и достигли пика после 24-часовой ферментации с NS и BS, снова коррелируя с изменениями популяции C. coccoides / E. rectale . Продукция уксусной кислоты увеличивалась к концу инкубации, тогда как концентрация молочной кислоты увеличивалась после 8-часовой инкубации и оставалась стабильной.

3

Концентрации (мМ) SCFA и лактата, образующиеся во время ферментации при 0, 4, 8 и 24 часах инкубации

4,82 ± 1,03 Пропионовая кислота
Жирные кислоты Время (ч) Контроль FOS NS BS
Итого 0 4.15 4,21 4,79 3,96
4 7,89 41,11 11,42 11,33
8 17,39 76,03 31,58 32,38 91 17,30 100,01 54,20 55,27
Молочная кислота 0 0,54 ± 0,07 0,57 ± 0,01 0.74 ± 0,02 0,67 ± 0,24
4 0,85 ± 0,12 14,19 ± 1,84 1,66 ± 0,29 1,78 ± 0,15
8 2,30 ± 0,42 15,77 ± 1,34 4,84 ± 0,25 5,17 ± 0,17
24 1,73 ± 0,72 13,81 ± 1,97 4,62 ± 0,69
Уксусная кислота 0 1.32 ± 0,30 1,22 ± 0,12 1,51 ± 0,06 1,51 ± 0,16
4 3,54 ± 0,20 20,62 ± 2,09 5,70 ± 0,49 5,40 ± 0,78
8 9,77 ± 0,78 47,34 ± 4,98 9,71 ± 0,62 15,87 ± 2,11
24 10,90 ± 0,03 56,44 ± 4,65 27,00 ± 0,76 28,79 ± 0,92
0 1.34 ± 0,18 1,20 ± 0,14 1,51 ± 0,06 1,34 ± 0,04
4 1,71 ± 0,23 3,55 ± 0,14 3,14 ± 0,09 2,76 ± 0,29
8 2,42 ± 0,07 5,59 ± 1,64 6,69 ± 0,74 6,51 ± 0,32
24 3,13 ± 0,48 15,54 ± 3,98 14,84 ± 0,70 15,58 ± 0,14
Масляная кислота 0 0.94 ± 0,24 1,23 ± 0,26 1,36 ± 0,03 1,03 ± 0,45
4 1,79 ± 0,35 2,74 ± 1,76 0,92 ± 0,14 1,38 ± 0,42
8 2,90 ± 0,14 7,32 ± 0,40 4,19 ± 0,78 4,33 ± 0,69
24 1,54 ± 1,17 14,22 ± 2,08 5,95 ± 0,22 5,77 ± 0,58
Жирные кислоты Время (ч) Контроль FOS NS BS
Всего 0 4.15 4,21 4,79 3,96
4 7,89 41,11 11,42 11,33
8 17,39 76,03 31,58 32,38 91 17,30 100,01 54,20 55,27
Молочная кислота 0 0,54 ± 0,07 0,57 ± 0,01 0.74 ± 0,02 0,67 ± 0,24
4 0,85 ± 0,12 14,19 ± 1,84 1,66 ± 0,29 1,78 ± 0,15
8 2,30 ± 0,42 15,77 ± 1,34 4,84 ± 0,25 5,17 ± 0,17
24 1,73 ± 0,72 13,81 ± 1,97 4,62 ± 0,69
Уксусная кислота 0 1.32 ± 0,30 1,22 ± 0,12 1,51 ± 0,06 1,51 ± 0,16
4 3,54 ± 0,20 20,62 ± 2,09 5,70 ± 0,49 5,40 ± 0,78
8 9,77 ± 0,78 47,34 ± 4,98 9,71 ± 0,62 15,87 ± 2,11
24 10,90 ± 0,03 56,44 ± 4,65 27,00 ± 0,76 28,79 ± 0,92
0 1.34 ± 0,18 1,20 ± 0,14 1,51 ± 0,06 1,34 ± 0,04
4 1,71 ± 0,23 3,55 ± 0,14 3,14 ± 0,09 2,76 ± 0,29
8 2,42 ± 0,07 5,59 ± 1,64 6,69 ± 0,74 6,51 ± 0,32
24 3,13 ± 0,48 15,54 ± 3,98 14,84 ± 0,70 15,58 ± 0,14
Масляная кислота 0 0.94 ± 0,24 1,23 ± 0,26 1,36 ± 0,03 1,03 ± 0,45
4 1,79 ± 0,35 2,74 ± 1,76 0,92 ± 0,14 1,38 ± 0,42
8 2,90 ± 0,14 7,32 ± 0,40 4,19 ± 0,78 4,33 ± 0,69
24 1,54 ± 1,17 14,22 ± 2,08 5,95 ± 0,22 5,77 ± 0,58
3

Концентрации (мМ) SCFAs и лактата, образующихся во время ферментации при 0-, 4-, 8- и 24-часовой инкубации

4,82 ± 1,03 Пропионовая кислота
Жирные кислоты Время (ч) Контроль FOS NS BS
Итого 0 4.15 4,21 4,79 3,96
4 7,89 41,11 11,42 11,33
8 17,39 76,03 31,58 32,38 91 17,30 100,01 54,20 55,27
Молочная кислота 0 0,54 ± 0,07 0,57 ± 0,01 0.74 ± 0,02 0,67 ± 0,24
4 0,85 ± 0,12 14,19 ± 1,84 1,66 ± 0,29 1,78 ± 0,15
8 2,30 ± 0,42 15,77 ± 1,34 4,84 ± 0,25 5,17 ± 0,17
24 1,73 ± 0,72 13,81 ± 1,97 4,62 ± 0,69
Уксусная кислота 0 1.32 ± 0,30 1,22 ± 0,12 1,51 ± 0,06 1,51 ± 0,16
4 3,54 ± 0,20 20,62 ± 2,09 5,70 ± 0,49 5,40 ± 0,78
8 9,77 ± 0,78 47,34 ± 4,98 9,71 ± 0,62 15,87 ± 2,11
24 10,90 ± 0,03 56,44 ± 4,65 27,00 ± 0,76 28,79 ± 0,92
0 1.34 ± 0,18 1,20 ± 0,14 1,51 ± 0,06 1,34 ± 0,04
4 1,71 ± 0,23 3,55 ± 0,14 3,14 ± 0,09 2,76 ± 0,29
8 2,42 ± 0,07 5,59 ± 1,64 6,69 ± 0,74 6,51 ± 0,32
24 3,13 ± 0,48 15,54 ± 3,98 14,84 ± 0,70 15,58 ± 0,14
Масляная кислота 0 0.94 ± 0,24 1,23 ± 0,26 1,36 ± 0,03 1,03 ± 0,45
4 1,79 ± 0,35 2,74 ± 1,76 0,92 ± 0,14 1,38 ± 0,42
8 2,90 ± 0,14 7,32 ± 0,40 4,19 ± 0,78 4,33 ± 0,69
24 1,54 ± 1,17 14,22 ± 2,08 5,95 ± 0,22 5,77 ± 0,58
Жирные кислоты Время (ч) Контроль FOS NS BS Всего 0 4.15 4,21 4,79 3,96 4 7,89 41,11 11,42 11,33 8 17,39 76,03 31,58 32,38 91 17,30 100,01 54,20 55,27 Молочная кислота 0 0,54 ± 0,07 0,57 ± 0,01 0.74 ± 0,02 0,67 ± 0,24 4 0,85 ± 0,12 14,19 ± 1,84 1,66 ± 0,29 1,78 ± 0,15 8 2,30 ± 0,42 15,77 ± 1,34 4,84 ± 0,25 5,17 ± 0,17 24 1,73 ± 0,72 13,81 ± 1,97 4,62 ± 0,69 4,82 ± 1,03 Уксусная кислота 0 1.32 ± 0,30 1,22 ± 0,12 1,51 ± 0,06 1,51 ± 0,16 4 3,54 ± 0,20 20,62 ± 2,09 5,70 ± 0,49 5,40 ± 0,78 8 9,77 ± 0,78 47,34 ± 4,98 9,71 ± 0,62 15,87 ± 2,11 24 10,90 ± 0,03 56,44 ± 4,65 27,00 ± 0,76 28,79 ± 0,92 Пропионовая кислота 0 1.34 ± 0,18 1,20 ± 0,14 1,51 ± 0,06 1,34 ± 0,04 4 1,71 ± 0,23 3,55 ± 0,14 3,14 ± 0,09 2,76 ± 0,29 8 2,42 ± 0,07 5,59 ± 1,64 6,69 ± 0,74 6,51 ± 0,32 24 3,13 ± 0,48 15,54 ± 3,98 14,84 ± 0,70 15,58 ± 0,14 Масляная кислота 0 0.94 ± 0,24 1,23 ± 0,26 1,36 ± 0,03 1,03 ± 0,45 4 1,79 ± 0,35 2,74 ± 1,76 0,92 ± 0,14 1,38 ± 0,42 8 2,90 ± 0,14 7,32 ± 0,40 4,19 ± 0,78 4,33 ± 0,69 24 1,54 ± 1,17 14,22 ± 2,08 5,95 ± 0,22 5,77 ± 0,58 Обсуждение 91

В настоящем исследовании мы продемонстрировали пребиотический потенциал кожуры миндаля, используя комбинированные модели пищеварения человека, которые включают желудочное и двенадцатиперстное пищеварение с последующей ферментацией в толстой кишке.При оценке новых пребиотических соединений следует принимать во внимание устойчивость к гидролизу пищевыми ферментами человека и абсорбцию в тонком кишечнике, а также гидролиз и ферментацию в толстом кишечнике. Кожура миндаля содержит большое количество пищевых волокон, состоящих из полисахаридов стенок растительных клеток, способных обеспечивать организм энергией за счет ферментации и абсорбции SCFA. Пектиновые вещества, покрывающие микрофибриллы целлюлозы, являются основным компонентом клеточных стенок кожи миндаля с небольшими количествами гемицеллюлоз, таких как ксилоглюкан и α-глюканы (Mandalari et al., 2010). Мы полагаем, что положительное воздействие на микробиоту толстой кишки, наблюдаемое в этой работе, было вызвано ферментацией негликемических углеводов, в основном пектина, присутствующих в кожуре миндаля. Предыдущие исследования продемонстрировали пребиотический потенциал пектиновых олигосахаридов, полученных из бергамота и апельсиновой корки (Manderson et al. , 2005; Mandalari et al. , 2007).

Costabile et al. (2008) недавно показали, что прием цельнозерновых хлопьев для завтрака был более бифидогенным по сравнению с эквивалентным количеством завтрака на основе пшеничных отрубей после 21-дневного периода кормления.В настоящем исследовании мы показали значительное увеличение Bifidobacterium spp. и в меньшей степени Lactobacillus / Enterococcus spp. после инкубации с кожурой миндаля (таблица 2). PI был рассчитан с использованием уравнения, представленного Palframan et al. (2003, рис. 2), хотя в более позднем определении ИП предлагалось «увеличение абсолютного количества экспрессируемых бифидобактерий, деленное на суточную дозу проглоченного пребиотика» (Roberfroid, 2007).Известно, что пищевые углеводы, в частности устойчивые крахмалы и волокна, производят SCFA, такие как уксусная, пропионовая и масляная кислоты, путем ферментации (Wong et al. , 2006). В настоящей работе ферментация кожуры миндаля увеличивала концентрацию в основном ацетата и пропионата (Таблица 3). Бифидобактерии продуцируют ацетат / лактат; поэтому ожидалось увеличение процентного содержания этих органических кислот с увеличением активности или количества этой бактериальной группы.Ферментация FOS привела к максимальной продукции лактата, ацетата и бутирата после 8- и 24-часовой инкубации, тогда как аналогичные количества пропионата были обнаружены после добавления FOS и кожуры миндаля: эти наблюдения указывают на различные типы бактериальной ферментации, происходящие на подложки.

Дополнительный физиологический эффект пищевых волокон связан с ролью антиоксидантных соединений, связанных с полисахаридами, таких как феруловая кислота (Napolitano et al., 2009 г.). Несколько связанных с клеточной стенкой фенольных соединений, в основном p -гидроксибензойная кислота, ванилиновая кислота и t -феруловая кислота, были обнаружены в кожуре миндаля, и их концентрация существенно не изменилась после in vitro пищеварения желудка и двенадцатиперстной кишки. Известно, что эстеразы микробиоты толстой кишки могут способствовать медленному, но непрерывному всасыванию фенольных соединений через толстую кишку, расщепляя сложноэфирные связи (Vardakou et al. , 2008). Следовательно, положительные эффекты, связанные с микробиотой кишечника, также могут быть связаны с антиоксидантной составляющей, присутствующей в клетчатке.Известно, что превращение полифенолов в фенольные кислоты микробиотой толстой кишки увеличивает количество фенольных кислот как одной из основных групп фенольных метаболитов (Lafay & Gil-Izquierdo, 2008). В настоящем исследовании мы показали, что полифенолы, достигающие толстой кишки в различных концентрациях (рис. 1), не влияли на пребиотический потенциал кожуры миндаля: не наблюдалось различий в бактериальных популяциях, изученных после ферментации с NS и BS.

На основании данных, полученных в ходе ферментации in vitro , кожица миндаля продемонстрировала потенциал для использования в качестве нового источника пребиотиков, увеличивая популяции бифидобактерий и C.coccoides / E. rectale и уменьшая численность группы C. hystolyticum . Однако для подтверждения представленных здесь данных in vitro необходимо провести исследования пребиотического действия кожуры миндаля с участием людей-добровольцев.

Благодарности

Мы благодарим Ивана Лемарка (IFR) за помощь в проведении статистического анализа. Это исследование финансировалось Миндальным советом Калифорнии (ABC).Мы хотели бы поблагодарить Карен Лэпсли (ABC) за предоставленные миндальные продукты.

Список литературы

(

1983

)

Простое и быстрое приготовление ацетатов альдита для анализа моносахаридов

.

Углеводный Res

113

:

291

299

.

(

2002

)

Молекулярно-биологические методы изучения кишечной микробиоты: проект ЕС

по кишечной флоре человека.

Brit J Nutr

87

:

S203

S211

.

(

1973

)

Новый метод количественного определения уроновых кислот

.

Анал Биохим

54

:

484

489

.

(

2007

)

Рост пробиотических лактобацилл в присутствии олеиновой кислоты увеличивает последующую выживаемость в желудочном соке

.

Микробиология

153

:

291

299

.

(

2008

)

Цельнозерновые хлопья для завтрака обладают пребиотическим действием на микробиоту кишечника человека: двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное исследование

.

Brit J Nutr

99

:

110

120

.

(

2004

)

Роль клеточных стенок в биодоступности липидов в семенах миндаля

.

Am J Clin Nutr

80

:

604

613

.

(

1998

)

Вариации бактериальных популяций в человеческих фекалиях, измеренные с помощью флуоресцентной гибридизации in situ с группоспецифичными олигонуклеотидными зондами, нацеленными на 16S рРНК

.

Appl Environ Microb

64

:

3336

3345

.

(

1995

)

Диетическая модуляция микробиоты толстой кишки человека: введение в концепции пребиотиков

.

J Nutr

125

:

1401

1412

.

(

1999

)

Зонд, нацеленный на 16S рРНК, для обнаружения лактобацилл и энтерококков в образцах фекалий с помощью флуоресцентной гибридизации in situ

.

Microb Ecol Health D

11

:

3

12

.

(

2008

)

Биодоступность фенольных кислот

.

Phytochem Ред.

7

:

301

311

.

(

1995

)

Количественная флуоресценция in situ гибридизация Bifidobacterium spp. с геноспецифическими зондами, нацеленными на 16S рРНК, и его применение в образцах фекалий

.

Appl Environ Microb

61

:

3069

3075

.

(

2007

)

Оценка in vitro пребиотической активности экстракта, богатого пектиновыми олигосахаридами, ферментативно полученного из кожуры бергамота

.

Appl Microbiol Biot

73

:

1173

1179

.

и другие. (

2008a

)

Высвобождение белка, липидов и витамина Е из семян миндаля во время пищеварения

.

J Agr Food Chem

56

:

3409

3416

.

(

2008b

)

Исследование потенциальных пребиотических свойств миндаля ( Amygdalus communis L.) семена

.

Appl Environ Microb

64

:

4264

4270

.

и другие. (

2010

)

Характеристика полифенолов, липидов и пищевых волокон из кожуры миндаля ( Amygdalus communis L.)

.

J Food Compos Anal

, DOI: DOI:.

(

2005

)

Определение in vitro пребиотических свойств олигосахаридов, полученных из потока побочных продуктов производства апельсинового сока

.

Appl Environ Microb

71

:

8383

8389

.

и другие. (

2004

)

Научно обоснованные подходы к лечению и профилактике сахарного диабета в области питания

.

Нутр Метаб Кардиовас

14

:

373

394

.

(

1996

)

Применение набора 16S рРНК-специфичных олигонуклеотидных зондов, разработанных для исследования бактерий типа cytophaga-flavobacter-bacteroides в естественной среде

.

Микробиология

142

:

1097

1106

.

(

2009

)

Потенциальная пребиотическая активность олигосахаридов, полученных ферментативным превращением нерастворимых пищевых волокон твердых сортов пшеницы в растворимые пищевые волокна

.

Нутр Метаб Кардиовас

19

:

283

290

.

(

2003

)

Разработка количественного инструмента для сравнения пребиотического эффекта диетических олигосахаридов

.

Lett Appl Microbiol

37

:

281

284

.

(

2007

)

Пребиотики: пересмотр концепции

.

J Гайка

137

:

830S

837S

.

(

2001

)

Сравнительная оценка in vitro ферментативных свойств пребиотических олигосахаридов

.

J Appl Microbiol

91

:

878

887

.

(

2008

)

Оценка пребиотических свойств фракций арабиноксилана пшеницы и индукция гидролазной активности в микрофлоре кишечника

.

Int J Food Microbiol

31

:

166

170

.

(

2006

)

Здоровье толстой кишки: ферментация и короткоцепочечные жирные кислоты

.

Дж Клин Гастроэнтерол

40

:

235

243

.

Заметки автора

© Федерация европейских микробиологических обществ, 2010 г. Опубликовано Blackwell Publishing Ltd. Все права защищены

Датчики

| Бесплатный полнотекстовый | Портативные анализаторы кожи с одновременным измерением трансэпидермальной потери воды, проводимости кожи и твердости кожи

1. Введение

Минимальные или неинвазивные измерения свойств кожи широко используются не только для диагностики кожных заболеваний [1], таких как атопический дерматит и системный склероз, а также для ухода за кожей в косметических областях [2].Существует ряд свойств кожи, которые отражают физиологическое или физическое состояние кожи. Среди них трансэпидермальная потеря воды (TEWL), проводимость и твердость кожи являются ключевыми свойствами кожи для оценки как здоровья кожи, так и работоспособности человека в клиниках. В частности, TEWL [3,4,5,6] и проводимость кожи [7,8,9] отражают функцию эпидермального барьера, чтобы удерживать влагу в коже и защищать элементы кожи от загрязнения [10]. TEWL — это показатель потери воды с поверхности кожи, а проводимость кожи — это показатель влажности кожи.Низкий TEWL и высокая проводимость кожи являются индикаторами состояния здоровой барьерной функции. Следовательно, измерение TEWL и проводимости кожи помогает понять статус эпидермиса. TEWL и проводимость кожи также связаны с физиологическим статусом человека. Более высокий уровень TEWL можно рассматривать как «скорость потоотделения», которая является ключевым показателем теплового статуса человека [11,12]. Проводимость кожи во многом зависит от состояния психологического стресса [13]. Сообщается, что зависящие от времени изменения проводимости на ладони и ладонной части запястья указывают на положительную связь с хроническим / острым стрессовым статусом [14].Между тем, твердость кожи [15,16,17] отражает физическое состояние кожи, связанное с коллагенами и эластичными волокнами [18]. Эти элементы кожи отвечают за защиту физиологических элементов кожи (таких как нервные окончания, потовые железы и кровеносные сосуды [19,20]) от внешних физических воздействий. Умеренный уровень твердости кожи свидетельствует о здоровом физическом состоянии кожи. Например, слишком высокий уровень твердости кожи указывает на высокую вероятность системного склероза [16]. Твердость кожи также связана с мышцами, сокращающими пили [21].Мышцы Arrector pili (также известные как мурашки по коже) связаны с волосяными фолликулами и имеют тесную связь с эмоциональными чувствами [22], такими как холод и страх. Физические сигналы человека, передаваемые через кожу, такие как звук сердца, артериальное давление и фотоплетизмограмма (ФПГ), также сильно коррелируют с твердостью кожи. В этом отношении три свойства кожи: TEWL, проводимость кожи и твердость кожи — ключи к пониманию состояния здоровья кожи. Кроме того, три свойства кожи можно использовать для мониторинга работоспособности человека с помощью технологий носимой электроники [23,24,25].Чем больше свойств кожи мы измеряем, тем более полное и глубокое понимание кожи мы можем получить, чем анализ на основе одного свойства. Поэтому инструменты для мультимодального анализа кожи были востребованы. Ранее Grankande, et. al. [26] использовали серию нескольких зондов и процедур только для одного свойства, чтобы измерить несколько свойств кожи. Использование нескольких датчиков и процедур приводило к неудобствам, а также к увеличению неопределенности измерения. Интегрированная структура с одним устройством, например, двухмодальное устройство [27], недавно было разработано для одновременного измерения TEWL и проводимости кожи.Он имеет единственную контактную площадку для контакта с кожей, состоящую из камеры для измерения TEWL и пары электродов для измерения проводимости кожи. Однако это устройство учитывает только состояние барьерных функций кожи, не имея представления о другом физическом состоянии кожи. Ранее мы сообщали о зонде «усеченный полый конус» (THC) [28], который позволяет оценивать как барьерную функцию (TEWL), так и физическое состояние кожи (твердость кожи). Зонд THC был разработан с уникальной структурой, в которой верхняя часть представляет собой цилиндрическую камеру для измерения TEWL, а нижняя половина сужается для эффективного измерения твердости.Однако, поскольку этот предыдущий метод был основан на механическом активном срабатывании зонда THC, он требовал высокой мощности и дополнительных габаритов от громоздкого цилиндрического опорного корпуса.

В этой статье мы представляем мультимодальное устройство для анализа кожи ручного типа, способное одновременно измерять TEWL, проводимость и твердость кожи. Настоящее устройство типа ручки модифицирует предыдущее устройство на основе зонда THC, заменяя активное срабатывание пассивным пружинным элементом и датчиком силы, что позволяет упростить воплощение в компактную структуру типа ручки.Кроме того, поскольку новая конструкция позволяет THC постоянно контактировать с кожей, проводимость кожи можно получить во время измерения путем имплантации парных электродов в отверстие наконечника THC.

3. Результаты и обсуждение

На рисунке 3 показаны результаты измерения TEWL с помощью ручного устройства: на рисунке 3a показан профиль влажности во времени, когда датчик THC находится в контакте с поверхностью полупроницаемой мембраны искусственной кожи. Влажность увеличивается по мере того, как камера зонда THC собирает воду в течение первых 10–15 с.Наклон линейного интервала, параметр TEWL, показан на вставке на рис. 3a. На рисунке 3b показаны результаты калибровки, показывающие скорость изменения влажности (крутизна,% / с), испускаемой с поверхности полупроницаемой мембраны. Настоящее устройство типа ручки показывает чувствительность 0,0068 (% / с) / (г / м 2 / ч) с высокой линейностью 99,63%. Мы также сравнили результаты измерений с коммерческим прибором для анализа кожи [27]. На рисунке S1 показано сравнение измерений TEWL между коммерческим датчиком и настоящим перьевым устройством.Коэффициент детерминации составляет 0,8613, что указывает на хорошее соответствие линейной зависимости между двумя устройствами. На рисунке S2 показаны измерения проводимости, полученные из необработанных данных устройства перьевого типа. Устройство типа ручки показывает хорошую возможность измерения проводимости в диапазоне 0,2–2,0 мкСм, который является обычным диапазоном проводимости кожи человека. Экспериментально полученная калибровочная функция равна [Выход = 994,73 × (известная проводимость) -0,754 ], а коэффициент детерминации (R 2 ) равен 0.99. На рисунке 4 показана калиброванная проводимость, полученная с помощью ручного устройства, в сравнении с измерением с помощью цифрового мультиметра. Устройство перьевого типа измеряет проводимость с чувствительностью 1,02 мкСм / мкСм и линейностью 99,36%. На рисунке S3 показаны выходные параметры твердомера для семи различных цилиндрических блоков PDMS, где соотношение смеси основы и отвердителя варьируется от 40: 1 до 10: 1. Твердость семи блоков измеряется в диапазоне от 26,4 до 83,7 по Шору 00. Чтобы получить калибровочную кривую измерения твердости ручного прибора, выходные сигналы весоизмерительной ячейки наносятся на эталонные выходы твердомера.Эффективность измерения твердости меняется при изменении диаметра проволоки (WD) механической витой пружины. Рисунок S4 показывает, что WD 1,7 мм (Рисунок S4b) демонстрирует оптимальные характеристики с точки зрения чувствительности и повторяемости по сравнению с таковыми у устройств WD 1,6 и 1,8 мм (Рисунок S4a, c, соответственно). На основе рисунка S4b на рисунке 5 показаны характеристики калиброванного измерения твердости по сравнению с измерением твердомером. Устройство типа пера показывает измерение твердости с чувствительностью 0.98 Shore 00 / Shore 00 и линейность 99,85% в диапазоне 26,4–83,7 Shore 00. Основываясь на характеристиках характеристик измерения, мы экспериментально доказываем, что настоящее устройство типа ручки имеет надлежащие возможности измерения для обнаружения TEWL, кожи проводимость и твердость кожи в диапазоне свойств кожи человека. На рисунке 6 показан пример одновременного измерения свойств кожи. При контакте с искусственной кожей четко наблюдались увеличение влажности, уменьшение проводимости и увеличение твердости.Это указывает на то, что устройство типа ручки является многообещающим инструментом мультимодального анализа кожи без каких-либо перекрестных помех со стороны встроенных датчиков. В то время как датчики давления и проводимости восстанавливаются в неактивное состояние мгновенно, восстановление датчика влажности требует времени до базовой линии. Поскольку мы использовали метод принципа закрытой камеры (CCP) [4,32] для измерения TEWL, каждое измерение требует времени вентиляции для восстановления до исходного уровня влажности после предыдущего измерения. Настоящему устройству типа ручки требуется около 1 мин вентиляции для каждого измерения, чтобы получить повторяемые наклоны.Требуемое время вентиляции можно изменить в зависимости от объема, длины и входного диаметра зонда THC.

Период измерения данного устройства ограничен из-за начальной временной задержки, необходимой для повышения влажности, и времени восстановления для восстановления влажности. Оба сильно связаны с внутренним объемом THC и вентиляцией воздуха. Небольшой внутренний объем THC выгоден как для быстрого отклика, так и для восстановления. Однако это уменьшает диапазон измерения и чувствительность из-за ограниченной способности улавливать влажность и уменьшения крутизны влажности.Существует компромисс между временем отклика / восстановления и чувствительностью / диапазоном. Поэтому определение подходящего размера камеры важно в зависимости от требуемого применения.

Существуют и другие конструктивные особенности, которые влияют на работу датчика. Диаметр входного отверстия датчика THC особенно важен для конструкции устройства перьевого типа. Например, более узкий вход покажет лучшую чувствительность из-за более глубокого углубления на коже. Однако слишком узкий вход может проникнуть через поверхность кожи, что приведет к инвазивному результату и ошибке измерения.Следовательно, для измерения твердости кожи человека требуется соответствующий диаметр входного отверстия. В то же время это также связано с измерением TEWL. Меньший диаметр входного отверстия увеличивает необходимое время сбора влаги, что приводит к более длительному процессу измерения для TEWL. Парные электроды для измерения проводимости кожи помещаются на краю входа зонда THC. При диаметре входного отверстия менее 2 мм из-за минимального размера штыревого электрода могут возникнуть технически трудные для установки электроды.Следовательно, настоящее устройство типа ручки было разработано с диаметром входного отверстия 3 мм, что является подходящими размерами для измерения трех свойств кожи.

Результат измерения твердости зависит от силы контакта. Следовательно, важно, чтобы сила контакта оставалась стабильной и постоянной в течение периода измерения. Дюрометр, как стандартный прибор для измерения твердости, требует постоянного прижимного усилия [28] для получения повторяемых результатов измерения.Мы использовали стабильное контактное усилие 8 Н для этого устройства перьевого типа для получения повторяемых результатов измерений.

Настоящее устройство типа ручки учитывает проводимость только для оценки влажности поверхности кожи. Чтобы учесть характеристики влажности кожи под эпидермисом кожи, требуется анализ импеданса. Путем изменения частоты переменного тока ряд измерений импеданса обеспечит влажность кожи в более глубоких тканях кожи.

Целью данного исследования является проектирование, изготовление и определение характеристик датчиков для анализа кожи на основе широко принятых методов калибровки для оценки характеристик каждого датчика.Ограничением этой работы является испытание в клиническом применении. Например, измерения кожи человека для анализа и оценки состояния здоровья кожи человека или физиологического стрессового состояния на основе измерения устройства ручного типа могут быть одной из будущих работ.

Post A Comment

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *